SF3B1基因突变在混合性PRL阳性垂体腺瘤辅助诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种SF3B1基因突变在混合性PRL阳性垂体腺瘤辅助诊断中的应用。本发明专利技术通过检测SF3B1基因c.1874G>A突变和诊断试剂盒的研制和应用，可使得混合性PRL阳性垂体腺瘤的诊断更加方便易行，使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，为垂体腺瘤的药物筛选、药效评价及靶向治疗提供了一种简单而有效的辅助手段。及靶向治疗提供了一种简单而有效的辅助手段。

【技术实现步骤摘要】
SF3B1基因突变在混合性PRL阳性垂体腺瘤辅助诊断中的应用


[0001]本专利技术涉及垂体腺瘤辅助诊断领域，尤其涉及在混合性PRL阳性垂体腺瘤辅助诊断及分型产品中的应用。

技术介绍

[0002]垂体瘤是最常见的颅内肿瘤之一，约占颅内肿瘤的10-15％，人群发病率约为8-9/万。随着影像技术的发展，其检出率呈现逐年增高的趋势。垂体瘤根据不同的内分泌特性，可分为泌乳素型、生长激素型、促肾上腺皮质激素型、促甲状腺素型、无功能型以及混合型等若干亚型。肿瘤通过异常分泌各种激素，导致患者出现不孕不育、肢端肥大、Cushing综合征、甲亢等显著的内分泌紊乱症状。
[0003]多激素垂体腺瘤(Plurihomonal Pituitary Adenomas(PPAs))是病理检查表现为泌乳素(PRL)、生长激素(GH)、促甲状腺激素(TSH)、卵泡刺激素(FSH)/黄体生成素(LH)或促肾上腺皮质激素(ACTH)等不同激素免疫组化染色阳性类型的组合，临床可表现为垂体功能异常以及肿瘤压迫症状，包括头痛、视力、视野障碍等，其中PRL和ACTH混合型细胞腺瘤是最常见的多激素和双激素腺瘤，PRL、GH和TSH免疫组化染色阳性归类为Pit-1阳性的多激素垂体腺瘤。对于临床上诊断无功能腺瘤的患者，若出现压迫症状，手术治疗为首选治疗方案。
[0004]PRL/GH混合性腺瘤是PRL和GH染色阳性的混合型垂体腺瘤，包括PRL-GH细胞腺瘤和PRL-GH混合性细胞腺瘤，临床表现为血清GH和IGF-1的高水平和肢端肥大症或巨人症的体征和症状，部分患者可有停经、泌乳、性欲减退等高泌乳素血症的症状和体征。该两种垂体腺瘤免疫组化染色均表现为PRL阳性和GH阳性，其中PRL-GH细胞腺瘤为同一细胞可见PRL和GH两种激素染色阳性；PRL-GH混合性细胞腺瘤为分泌不同激素的细胞混合，即分泌PRL细胞和分泌GH细胞的混合。肢端肥大症的首选治疗方案是手术治疗，可以应用生长抑素类药物包括奥曲肽，兰瑞肽。
[0005]混合性PRL阳性垂体腺瘤为激素免疫组化染色包含PRL染色阳性的两种或两种以上激素染色阳性的垂体腺瘤的统称，其激素染色除PRL染色阳性外，还具有选自以下至少一种激素染色阳性：GH、TSH、FSH、LH和ACTH。混合性PRL阳性垂体腺瘤包括PRL阳性多激素垂体腺瘤、PRL-GH细胞腺瘤和PRL-GH混合性细胞腺瘤等。该类型中的部分肿瘤表现为体积巨大，同时向周边侵袭性生长，手术中极难获得肿瘤全切除，并且该部分患者预后较差，推测他们可能分属于混合性PRL阳性垂体腺瘤两种不同的亚型，对其应该采取不同的临床治疗策略。目前尚无特异性的分子诊断标记物可以对他们进行诊断，甚至鉴别诊断。
[0006]作为RNA加工过程的关键步骤，RNA剪接的精确性是基因得以正常表达的先决条件之一，RNA剪接异常导致的基因表达紊乱是多种疾病发生的重要原因。近年来，高通量测序技术检测发现各类肿瘤细胞中存在多种剪接因子突变，这些突变均不同程度地影响了RNA剪接，导致下游基因表达异常。
[0007]剪接因子SF3b是一种多蛋白复合物，包括亚基，例如SF3B1、SF3B3和PHF5A。SF3b复合体是U2 snRNA、剪接因子SF3a和SF3b以及其他相关蛋白组装而成的U2 snRNA-蛋白质复
合体(snRNP)的一部分。它们一起形成17S U2 snRNP，其以ATP依赖性方式在内含子的3'侧组装形成A复合物。SF3b核心复合体包含几个剪接体相关蛋白(SAP)，包括SF3B1/SAP155、SF3B2/SAP145、SF3B3/SAP130、SF3B4/SAP49、SF3B5/SAP10、SF3B6/SAP14a和PHF5A/SAP14b。
[0008]研究表明，诸如SF3B1、U2AF1和SRSF2之类的剪接因子牵涉到包括慢性淋巴细胞白血病和骨髓增生异常综合征在内的血液系统恶性肿瘤以及乳腺癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌和葡萄膜黑色素瘤。中国专利申请CN107405383A公开了在骨髓增生异常综合征(MDS)和癌症两者中确认的SF3B1突变包括例如R625H。
[0009]然而，目前还没有将剪接因子亚基SF3B1突变应用于垂体腺瘤，特别是混合性PRL阳性垂体腺瘤诊断的报道。基于现有技术中诊断上述疾病的手段的局限性，若能筛选出其易感的SF3B1突变作为分子诊断标记物，从而找到一种有效、廉价的能够在辅助诊断垂体腺瘤，特别是对于混合性PRL阳性垂体腺瘤的有效的治疗方法是亟待解决的问题。

技术实现思路

[0010]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于筛选出垂体腺瘤，特别是混合性PRL阳性垂体腺瘤易感的SF3B1突变作为分子诊断标记物，并研制相应的诊断试剂盒，进行垂体腺瘤检测，从而使得垂体腺瘤诊断更加方便易行，使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，同时该方法也适用于垂体腺瘤，特别是混合性PRL阳性垂体腺瘤的肿瘤分型、恶性程度评价以及为其药物筛选、药效评价及靶向治疗提供一种简单而有效的辅助手段，开辟新的途径。
[0011]具体来说，本专利技术提出了如下技术方案：
[0012]在一方面，本专利技术提供了一种检测SF3B1基因c.1874G>A突变的产品在制备用于辅助诊断混合性PRL阳性垂体腺瘤、区分混合性PRL阳性垂体腺瘤SF3B1突变型和野生型、或预测混合性PRL阳性垂体腺瘤是否恶性的试剂或试剂盒中的用途。
[0013]在一方面，本专利技术提供了一种检测SF3B1蛋白R625H突变的产品在制备用于辅助诊断混合性PRL阳性垂体腺瘤、区分混合性PRL阳性垂体腺瘤SF3B1突变型和野生型、或预测混合性PRL阳性垂体腺瘤是否恶性的试剂或试剂盒中的用途。
[0014]在一方面，本专利技术提供了一种检测SF3B1基因c.1874G>A突变的引物。
[0015]在一方面，本专利技术提供了一种辅助诊断混合性PRL阳性垂体腺瘤、区分混合性PRL阳性垂体腺瘤SF3B1突变型和野生型、或预测混合性PRL阳性垂体腺瘤是否恶性的试剂盒。
[0016]下面结合附图和各个具体实施方式，对本专利技术及其有益技术效果进行详细说明，其中：
附图说明
[0017]图1示出了探针检测的特异性。
[0018]图2示出了探针检测的灵敏度。
[0019]图3示出了CCK-8活性检测感染SF3B1突变型腺病毒的细胞的增殖能力。
[0020]图4示出了克隆形成试验检测感染SF3B1突变型腺病毒的细胞的增殖能力。
[0021]图5示出了感染SF3B1突变型腺病毒的细胞的细胞凋亡能力。
具体实施方式
[0022]除非另外定义，否则本文所用的所有科学技术术语的含义与本专利技术所属领域的一般技术人员通常所了解的含义相同。虽然与本文中所述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可以用于本专利技术实践或测试中，但是描述了优选方法和材料。为了本专利技术的目的，以下术语定义如下。
[0023]术语“混合性PRL阳性垂体腺瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID NO:4所示。10.一种辅助诊断混合性PRL阳性垂体腺瘤、区分混合性PRL阳性垂体腺瘤SF3B1突变型和野生型、或预测混合性PRL阳性垂体腺瘤是否恶性的试剂盒，所述试剂盒包含针对SF3B1基因c.1874G>A突变的引物对以及突变型等位基因探针，和/或所述试剂盒包含检测SF3B1蛋白R625H突变的抗体和/或蛋白质芯片；优选地，所述试剂盒还包含PCR扩增反应试剂混合液；优选地，所述PCR扩增反应试剂混合液包括TaqDNA聚合酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液和去离子水；优选地，所述试剂盒还包括野生型等位基因探针；优选地，所述探针是TaqMan MGB探针，更优选地，所述TaqMan MGB探针的5'末端标记了荧光报告基团，3'末端标记了非荧光淬灭基团MGB；优...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢微嫣，郭靖，李储忠，王红云，龚磊，李丹，张亚卓，
申请(专利权)人：北京市神经外科研究所，
类型：发明
国别省市：