黑骨藤的检测方法、黑骨藤对照提取物的制备及其应用技术

本发明专利技术公开了一种黑骨藤的检测方法、黑骨藤对照提取物的制备及其应用；包括对黑骨藤进行提取，得提取溶液，所述检测方法包括含量测定方法，所述含量测定方法包括对提取溶液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C的含量检测。本发明专利技术的检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，降低了检验成本；使用对照提取物作为标准物质可以同时对多个组分进行含量测定，符合中药整体质量控制的思想；本发明专利技术还提供了黑骨藤对照提取物在制备抗类风湿性关节炎的药物中的应用，为研究黑骨藤抗类风湿性关节炎的指标性成分具有重要的意义。性成分具有重要的意义。性成分具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
黑骨藤的检测方法、黑骨藤对照提取物的制备及其应用


[0001]本专利技术涉及一种黑骨藤的检测方法、黑骨藤对照提取物的制备及其应用，属于药品技术的领域。

技术介绍

[0002]中医药是中华民族的瑰宝，建立完善的质量标准是保证中药质量和疗效的前提，决定着中医药的发展前途。中药标准物质是中药质量标准及其评价体系的有机组成部分，是控制中药生产，提高、保证质量的主要手段。中药标准物质主要有中药化学对照品、对照药材、对照提取物3大类。中药化学对照品极难获得，且价格昂贵，检测成本极高，因此解决对照品短缺、建立简便、易行的测定药材中多指标成分分析方法就显得尤为重要。中药对照提取物是一类非单体成分对照物，不稳定单体成分在混合物中稳定性得以提高。自2005年版《中国药典》收载至今品种数量较少，却具有广泛的应用前景，涉及鉴别、含量测定、检查项目，对保证中药的质量发挥着日趋重要的作用。对照提取物易制备，价格低，稳定性好，配制操作简单，作为标准物质可以大大减少单体对照品的使用，从而节约中药稀有资源，降低检验成本；使用对照提取物作为标准物质可以同时对多个组分进行含量测定，体现了中药整体质量控制的思想。此外，采用系统的药理学实验来验证黑骨藤抗类风湿性关节炎的指标性成分也具有重要的意义。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于，提供一种黑骨藤的检测方法、黑骨藤对照提取物的制备及其应用。本专利技术所述的检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，降低了检验成本；使用对照提取物作为标准物质可以同时对多个组分进行含量测定，符合中药整体质量控制的思想。本专利技术还提供了黑骨藤乙酸乙酯部位在制备抗类风湿性关节炎的药物中的应用。
[0004]本专利技术的技术方案：一种黑骨藤对照提取物的制备方法，包括如下步骤：精密称取药材粉末，按料液比1:20
‑
30加入60
‑
80％乙醇溶液，加热回流提取2
‑
4次，每次50
‑
70min，合并提取液，于70℃水浴蒸干，加水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，各萃取3次，将3次乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩，水浴蒸干，真空干燥，研磨至粉末状，得黑骨藤醇提物乙酸乙酯萃取部位HGT
‑
C粉末；称取黑骨藤乙酸乙酯部位，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱，依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱，其中20％段合并为第一段a1，中间合并为第二段a2，后为一段a3；30％、50％段各自合并分别为a4、a5；将a5段取2g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱；依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱；各自合并为b1、b2、b3；将以上a2和b3以5:2的比例合并，即得黑骨藤对照提取物。
[0005]前述的黑骨藤对照提取物的制备方法，包括如下步骤：精密称取药材粉末，按料液比1:25加入70％乙醇溶液，加热回流提取3次，每次60min，合并提取液，于70℃水浴蒸干，加水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，各萃取3次，将3次乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩，水浴蒸干，真空干燥，研磨至粉末状，得黑骨藤醇提物乙酸乙酯萃取部
位HGT
‑
C粉末；称取黑骨藤乙酸乙酯部位10g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱，依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱，每个梯度洗脱4000mL，其中20％段前1000ml合并为第一段a1，中间2500ml合并为第二段a2，后500ml为一段a3；30％、50％段各自合并分别为a4、a5；将a5段取2g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱；依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱；各自合并为b1、b2、b3；将以上a2和b3以5:2的比例合并，即得黑骨藤对照提取物。
[0006]所述黑骨藤对照提取物在制备抗类风湿性关节炎的药物中的应用。
[0007]一种黑骨藤的检测方法为：对黑骨藤进行提取，得提取溶液，所述检测方法包括含量测定方法，所述含量测定方法包括对提取溶液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C的含量检测。
[0008]前述的黑骨藤的检测方法中，所述新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C的含量检测方法为：
[0009]采用ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱2.1mm
×
100mm，1.8μm；以0.0.05％
‑
0.15％甲酸水A
‑
乙腈B为流动相，进行梯度洗脱，检测波长327nm，流速0.2ml/min，柱温30℃；
[0010]混合对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸5.06份、绿原酸25.05份、隐绿原酸8.04份、绿原酸甲酯5.05份，异绿原酸B5.02份，异绿原酸A 5.00份，异绿原酸C 7.05份，置于50mL量瓶，加50％甲醇定容，制成混合对照品溶液
①
，摇匀，备用；吸取上述混合对照品溶液
①
1mL，置于100mL量瓶，50％甲醇定容，摇匀，制成混合对照品溶液
②
，摇匀，备用；
[0011]对照提取物溶液的制备：称取黑骨藤乙酸乙酯部位10g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱；依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱，每个梯度洗脱4000mL；其中20％段前1000ml合并为第一段a1，中间2500ml合并为第二段a2，后500ml为一段a3；30％、50％段各自合并分别为a4、a5；将a5段取2g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱；依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱；各自合并为b1、b2、b3；将以上a2和b3以5:2的比例合并，即得对照提取物；精密称取黑骨藤对照提取物14mg，置10mL量瓶中，加50％甲醇2mL，超声处理1min，放冷，加50％甲醇定容至刻度、摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得对照提取物溶液；
[0012]供试品溶液的制备：精密称取药材样品粉末10
‑
20g，按料液体积比1:20
‑
30加入70％乙醇溶液400mL，加热回流提取2
‑
4次，每次50
‑
70min，合并提取液，于70℃水浴蒸干，加水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，各萃取3次，将3次乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩，水浴蒸干，真空干燥，研磨至粉末状，得黑骨藤醇提物乙酸乙酯萃取部位HGT
‑
C粉末；精密称定HGT
‑
C粉末25mg，置10mL量瓶，加甲醇2mL，超声处理2min，放冷，加甲醇定容至刻度、摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
[0013]测定法：分别吸取混合对照品溶液、对照提取物溶液和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黑骨藤对照提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：精密称取药材粉末，按料液比1:20
‑
30加入60
‑
80％乙醇溶液，加热回流提取2
‑
4次，每次50
‑
70min，合并提取液，于70℃水浴蒸干，加水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，各萃取3次，将3次乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩，水浴蒸干，真空干燥，研磨至粉末状，得黑骨藤醇提物乙酸乙酯萃取部位HGT
‑
C粉末；称取黑骨藤乙酸乙酯部位，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱，依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱，其中20％段合并为第一段a1，中间合并为第二段a2，后为一段a3；30％、50％段各自合并分别为a4、a5；将a5段取2g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱；依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱；各自合并为b1、b2、b3；将以上a2和b3以5:2的比例合并，即得黑骨藤对照提取物。2.如权利要求1所述的黑骨藤对照提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：精密称取药材粉末，按料液比1:25加入70％乙醇溶液，加热回流提取3次，每次60min，合并提取液，于70℃水浴蒸干，加水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，各萃取3次，将3次乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩，水浴蒸干，真空干燥，研磨至粉末状，得黑骨藤醇提物乙酸乙酯萃取部位HGT
‑
C粉末；称取黑骨藤乙酸乙酯部位10g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱，依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱，每个梯度洗脱4000mL，其中20％段前1000ml合并为第一段a1，中间2500ml合并为第二段a2，后500ml为一段a3；30％、50％段各自合并分别为a4、a5；将a5段取2g，用等量的PRP
‑
512B型树脂拌样，装柱；依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱；各自合并为b1、b2、b3；将以上a2和b3以5:2的比例合并，即得黑骨藤对照提取物。3.一种黑骨藤的检测方法，其特征在于：对黑骨藤进行提取，得提取溶液，所述检测方法包括含量测定方法，所述含量测定方法包括对提取溶液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C的含量检测。4.如权利要求3所述的黑骨藤的检测方法，其特征在于：所述新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C的含量检测方法为：采用ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱2.1mm
×
100mm，1.8μm；以0.0.05％
‑
0.15％甲酸水A
‑
乙腈B为流动相，进行梯度洗脱，检测波长327nm，流速0.2ml/min，柱温30℃；混合对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸5.06份、绿原酸25.05份、隐绿原酸8.04份、绿原酸甲酯5.05份，异绿原酸B5.02份，异绿原酸A 5.00份，异绿原酸C 7.05份，置于50mL量瓶，加50％甲醇定容，制成混合对照品溶液
①
，摇匀，备用；吸取上述混合对照品溶液
①
1mL，置于100mL量瓶，50％甲醇定容，摇匀，制成混合对照品溶液
②
，摇匀，备用；对照提取物溶液的制备：称取黑骨藤乙酸乙酯部位10g，用等量的PRP
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512B型树脂拌样，装柱；依次用20％、30％、50％的甲醇梯度洗脱，每个梯度洗脱4000mL；其中20％段前1000ml合并为第一段...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘刚，刘育辰，安兰兰，周环娟，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：