一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基，属于生物制品的检测技术领域。复苏培养基由蛋白胨、甘露醇、海藻糖、甜菜碱、脯氨酸、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和水组成，使用大量的食源性致病菌验证的结果表明复苏培养基的效果较现有的国际标准和国家食品安全标准中使用的BPW等前增菌培养基均有显著提高，并且该复苏培养基具有很好的复苏普遍性，实验测试的包含7种克罗诺杆菌菌种和沙门氏菌标准菌株及食品分离株均表现出相似的实验结论。本发明专利技术适用于干燥食品或低水活度食品中克罗诺杆菌和沙门氏菌的快速复苏与增菌培养，有利于提高干燥损伤克罗诺杆菌和沙门氏菌的检出率，避免现有方法漏检造成的食物中毒发生。的食物中毒发生。

【技术实现步骤摘要】
一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基


[0001]本专利技术属于生物制品的检测
，涉及一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基。

技术介绍

[0002]干燥是食品加工的常见工艺单元，通过导致细菌的脱水失活来控制食品中有害微生物的生长与繁殖。克罗诺杆菌和沙门氏菌是重要食源性致病菌，具有较强的干燥耐受性，我国食品安全标准中，克罗诺杆菌和沙门氏菌是婴幼儿配方奶粉中安全风险监测的重要对象。
[0003]婴幼儿配方食品的安全性备受社会关注。婴幼儿配方奶粉加工过程中需要经过干燥、冷却及低水活度长期储藏，奶粉中的细菌易受到干燥环境的损伤呈亚致死状态。因此，食品微生物检验过程中，干燥工艺及长期的干燥储藏环境会导致细菌损伤容易造成食品中克罗诺杆菌和沙门氏菌检验出现假阴性结果，导致被克罗诺杆菌和沙门氏菌污染的婴幼儿配方奶粉进入市场；而这些受损伤亚致死状态的细菌一旦通过食物进入婴幼儿肠道，在合适条件下可以复活，进而引起克罗诺杆菌和沙门氏菌感染的食源性疾病。因此，高效复苏干燥损伤细菌的前增菌培养基对提高干燥损伤细菌的检出率，保障相关食品的安全性，显得极为重要。
[0004]现有的国家食品安全标准检验过程中，沙门氏菌和克罗诺杆菌的检测方法均以缓冲蛋白胨水为前增菌复苏培养基，缺乏保护剂的缓冲蛋白胨水容易导致干燥损伤细菌无法正常复苏或有效复苏。

技术实现思路

[0005]为了防止婴幼儿配方奶粉检验过程中出现克罗诺杆菌和沙门氏菌漏检情况的发生，提高奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的检出率，避免干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌通过食物进入婴幼儿身体，导致食源性疾病的暴发，本专利技术提供一种用于复苏干燥损伤克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基。
[0006]一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基由下列质量的物质组成：10g蛋白胨、1.5g磷酸二氢钾、9.0g磷酸二氢钠、5.0 g氯化钠、2
‑
5 g甘露醇、2
‑
6g海藻糖、2
‑
5g甜菜碱、2
‑
6g脯氨酸和1000 mL 水；所述磷酸二氢钠为12个结晶水的磷酸二氢钠；将上述物质在常温下混合均匀，即得液态的复苏培养基。
[0007]进一步的技术方案：一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基由下列质量的物质组成：10 g蛋白胨、1.5 g磷酸二氢钾、9.0 g磷酸二氢钠、5.0 g氯化钠、3.0 g甘露醇、2.5 g海藻糖、3.0 g甜菜碱、2.5 g脯氨酸和1000 mL水。
[0008]本专利技术的有益技术效果体现在以下方面：1.本专利技术以缓冲蛋白胨水培养基为基础，加入修复因子甘露醇、海藻糖、甜菜碱及脯氨酸，降低了干燥损伤细菌复水或渗透压差异等导致细胞破裂死亡，同时提高了受损伤细菌的代谢酶活力，保持细正常的生理代谢活动。
[0009]2.干燥损伤复苏效果好将阪崎克罗诺杆菌ATCC29544和沙门菌CMCC50071分别培养至对数中期的菌液以5000 rpm的转速离心15 min，弃去上清后用生理盐水以同样步骤洗去残留培养基成分。后使用50 μL 牛奶（250 g奶粉/L)重悬菌体，吸取50 μL牛奶菌悬液加入12孔板中，放入干燥器干燥20天、30天和40天。将优化后的液体培养基2 mL添加到不同时间段干燥损伤细菌的12孔板中并混匀，置于恒温培养箱中37 o
C培养18 h。空白对照组为不添加物质的BPW蛋白胨水和LB肉汤。然后，吸取200 μL的培养液，测定OD
600
，结果发现本专利技术培养基菌落生长数量（OD
600
）显著高于其他培养基，表明本专利技术复苏液体培养基的增菌效果好，复苏效率高。
[0010]3．复苏效果具有普遍性将阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC29544(Cronobacter sakazakii ATCC29544)、莫金斯安克罗诺杆菌ATCC51329（Cronobacter muytjenii）等克罗诺杆菌七个菌种及沙门氏菌菌株（包括伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌及沙门氏菌分离株）分别培养至对数中期的菌液以5000 rpm的转速离心15 min，弃去上清后用生理盐水以洗去残留培养基成分，然后使用50 μL 牛奶（250 g奶粉/L)重悬菌体，吸取50 μL菌悬液加入12孔板的中心，放入干燥器干燥20天。将优化后的液体培养基2 mL添加到干燥损伤细菌的12孔板中并混匀，置于恒温培养箱中37 o
C培养18 h，空白对照组为不添加物质的BPW蛋白胨水和LB肉汤。然后，吸取200 μL的培养液，测定OD
600
，结果发现本专利技术培养基中克罗诺杆菌和沙门氏菌的菌株生长数量（OD
600
）显著高于BPW和LB等液体培养基，表明本专利技术复苏液体培养基的增菌效果好，具有良好的普遍性。
具体实施方式
[0011]下面结合实施例，对本专利技术作进一步地描述。
[0012]实施例1用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基的制备操作如下：准确称取培养基各组分：蛋白胨 10g、磷酸二氢钾 1.5 g、12个结晶水的磷酸二氢钠9 g、氯化钠 5 g、甘露醇3.0 g、海藻糖2.5 g、甜菜碱2.5 g和脯氨酸 2.5 g，溶解于1000 mL水中，常温下混合均匀；121℃高温灭菌15分钟，得到用于复苏干燥损伤克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基，密封保存备用。
[0013]将克罗诺杆菌（阪崎克罗诺杆菌ATCC29544）和沙门氏菌（伤寒沙门氏菌CMCC50071）培养至对数期的菌液离心，用生理盐水洗去培养基成分，然后用50 μL 牛奶（浓度为250 g奶粉/L)重悬菌体，吸取50 μL牛奶菌悬液加入12孔板的中心，放入干燥器中20天、40天、60天。
[0014]将2.0 mL本专利技术复苏培养基添加到干燥不同时间段的克罗诺杆菌的12孔板中，与干燥处理的克罗诺杆菌混合均匀，37℃恒温培养18 h，然后吸取200 μL支96孔板中测定复苏后的菌液OD
600
值，重复三次，取平均值；
由表1可见，克罗诺杆菌和沙门氏菌干燥处理不同时间段（20天、40天和60天），加入BPW、LB和本专利技术的培养基进行复苏培养，37℃恒温培养18 h，本专利技术的复苏增菌液的OD
600
较BPW和LB均有显著性提升，表明本专利技术的复苏培养基具有良好的干燥损伤修复能力。
[0015]实施例2用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基的制备操作如下：准确称取培养基各组分：蛋白胨 10g、磷酸二氢钾 1.5 g、12个结晶水的磷酸二氢钠9 g、氯化钠 5 g、甘露醇3.0 g、海藻糖2.5 g、甜菜碱 2.5 g、脯氨酸 2.5 g，溶解于1000 mL水中，常温下混合均匀，121℃高温灭菌15分钟，得到用于复苏干燥损伤克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基，密封保存备用。
[0016]按照实施例1制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于复苏干燥损伤的克罗诺杆菌和沙门氏菌的液体培养基，其特征在于由下列质量的物质组成：10g蛋白胨、1.5g磷酸二氢钾、9.0g磷酸二氢钠、5.0 g氯化钠、2
‑
5 g甘露醇、2
‑
6g海藻糖、2
‑
5g甜菜碱、2
‑
6g脯氨酸和1000 mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶应旺，凌娜，偶德馨，董晶晶，蒋秀婷，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：