一种异射干苷元的制备方法技术

本发明专利技术公开了异射干苷元在制备治疗抗肿瘤的药物中的用途，本发明专利技术还提供了一种异射干苷元的提取方法。本发明专利技术通过选择特定的分离纯化方法大大提高了异射干苷元的纯度和收率，降低了成本。通过药理实验证明，本发明专利技术制备得到的异射干苷元具有抗肿瘤活性，对HCT116、A549、HepG2肿瘤细胞株活性优于射干苷元，具有广阔的市场应用前景。的市场应用前景。的市场应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种异射干苷元的制备方法


[0001]本专利技术属于药物分离纯化领域，具体为一种异射干苷元的制备方法。

技术介绍

[0002]异射干苷元，又名异鸢尾黄素(isotectorigenin，ψ
‑
tectorigenin)，为射干苷元的同分异构体，化学名称为5,7,4
′‑
三羟基
‑8‑
甲氧基异黄酮。射干苷元、异射干苷元结构式如下：
[0003][0004]异射干苷元属于类黄酮化合物，长期以来，类黄酮被认为具有抗炎，抗氧化，抗过敏，保肝，抗血栓，抗病毒和抗癌活性，但由于异射干苷元的研究报道很少，故其具体的药效作用还不明确，其在药学上的应用价值目前也未知。
[0005]专利US20080311634A1公开了一种从鸢尾科植物的愈伤组织中分离异射干苷元的方法，该方法需要先培养愈伤组织，再通过醇提的方法将愈伤组织中富集的异射干苷元提取出。该方法复杂，且成本高，需要植物栽培领域与植物提取领域间协作才能制备得到高质量的异射干苷元，因此在工业生产中难以推广应用。

技术实现思路

[0006]为了解决异射干苷元药效作用不明确，以及至今无简便、实用、大量制备高纯度异射干苷元的方法的技术问题，本专利技术提供了一种异射干苷元的用途。
[0007]本专利技术提供了异射干苷元在制备治疗抗肿瘤的药物中的用途。
[0008]进一步地，所述药物为治疗结肠癌、肺癌和/或肝癌的药物。
[0009]本专利技术还提供了一种异射干苷元的提取方法，它是由川射干药材或射干苷元为原料，加Na2CO3水溶液提取，分离、纯化、即得异射干苷元。
[0010]进一步地，所述川射干药材与Na2CO3水溶液的质量体积比为0.5～2g:20ml；所述射干苷元与Na2CO3水溶液的质量体积比为0.5～2g:1000ml；所述川射干药材为川射干药材粗粉；所述Na2CO3水溶液的浓度为0.02％～0.08％w/v，g/ml，优选0.05％w/v，g/ml；所述提取为煎煮提取或回流提取，优选煎煮提取，时间4小时。
[0011]进一步地，所述分离的方法为：取提取液过滤，滤液调pH值至6.5
‑
7.5，冷却，加氯仿萃取，取氯仿萃取液减压浓缩，干燥，得粗提物。
[0012]更进一步地，所述提取液的原料为川射干药材时，冷却后还包括加与滤液等体积
的石油醚萃取；所述冷却至室温；所述氯仿与滤液等体积。
[0013]进一步地，所述纯化的方法包括制备液相色谱纯化法、湿柱色谱纯化法或干柱色谱纯化法。
[0014]更进一步地，所述制备液相色谱纯化法为：
[0015]粗提物溶解于甲醇，注入制备色谱柱，再用流动相甲醇
‑
水洗脱，收集响应值最大时段的洗脱液，减压浓缩，干燥得异射干苷元；
[0016]更进一步地，所述粗提物与甲醇的质量体积比为5～15mg：1ml；所述制备液相色谱的色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，检测波长为263nm；所述流动相甲醇
‑
水的体积比25：75，流速为10ml/min。
[0017]更进一步地，所述湿柱色谱纯化法为：
[0018]粗提物溶解于氯仿，加1倍量w/v,g/ml的80目硅胶拌匀，干燥，研细，上样于硅胶柱，再用流动相氯仿
‑
甲醇梯度洗脱，收集洗脱液，每5倍量v/w,ml/g于80目硅胶的洗脱液为1份，取第20
‑
25份洗脱液合并，减压浓缩，干燥得异射干苷元；
[0019]所述硅胶柱是采用氯仿湿法装柱的200～300目硅胶柱，其直径5～6cm，柱高80cm；
[0020]所述氯仿
‑
甲醇梯度洗脱程序为：依次用体积比20:1、10:1、6:1、3:1的氯仿
‑
甲醇溶液洗脱，每个体积比的氯仿
‑
甲醇溶液用量为80目硅胶的80倍量v/w,ml/g。
[0021]更进一步地，所述干柱色谱纯化法为：
[0022]粗提物溶解于氯仿，加1倍量w/v,g/ml的100目硅胶拌匀，干燥，研细，上样于硅胶柱，再用展开剂氯仿
‑
甲醇展开，取出硅胶，切割成20等份，合并距上样处第10～14份切割段，甲醇洗脱，减压浓缩，干燥得异射干苷元；
[0023]所述硅胶柱是填有10～40μm薄层层析硅胶的中空玻璃柱，其直径6～7cm，柱高100cm；所述氯仿
‑
甲醇的体积比为10：1。
[0024]本专利技术通过研究川射干模拟人肠道环境条件下(PH8.5左右)水煎煮试验的化学成分变化，发现了异射干苷、异射干苷元的存在，并用制备液相分离出异射干苷元并鉴定了其化学结构，进而确认射干苷元在弱碱水煎煮下可部分转化为异射干苷元。同时，通过药理实验证明，本专利技术制备得到的异射干苷元具有抗肿瘤活性，对HCT116、A549、HepG2肿瘤细胞株活性优于射干苷元。
[0025]本专利技术的异射干苷元分离纯化方法，通过碱液煎煮，氯仿萃取降低了后续异射干苷元的纯化难度，并以制备液相色谱、湿法柱层析和干法柱层析纯化使样品中的大极性及低极性的杂质充分分离，可在短时间内(48小时)制备克级纯度达99％％以上的异射干苷元，提高异射干苷元产品的纯度和收率，降低了成本，同时由于操作简便，适合工业化生产，具有广阔的市场应用前景。
[0026]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0027]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0028]图1自制射干苷元色谱图
[0029]图2实施例1异射干苷元色谱图(纯度97.33％)
[0030]图3实施例2异射干苷元色谱图(纯度99.71％)
[0031]图4实施例3异射干苷元色谱图(纯度99.63％)
[0032]图5实施例4异射干苷元色谱图(纯度99.29％)
[0033]图6川射干水煎煮样品溶液总离子流图
[0034]图7川射干弱碱水煎煮样品溶液总离子流图
[0035]图8射干苷元弱碱水煮LC
‑
MS总离子流图
[0036]图9试验例2射干苷元弱碱水煮UPLC色谱图
[0037]图10试验例3射干苷元弱碱水煮UPLC色谱图
[0038]图11试验例4射干苷元弱碱水煮UPLC色谱图
[0039]图12试验例5射干苷元弱碱水煮HPLC色谱图
[0040]图13试验例5射干苷元弱碱水煮样品MS图
[0041]图14异射干苷元红外光谱图
[0042]图15异射干苷元氢谱图
[0043]图16异射干苷元碳谱图
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.异射干苷元在制备治疗抗肿瘤的药物中的用途。2.根据权利要求1所述用途，其特征在于，所述药物为治疗结肠癌、肺癌和/或肝癌的药物。3.一种异射干苷元的提取方法，其特征在于，它是由川射干药材或射干苷元为原料，加Na2CO3水溶液提取，分离、纯化、即得异射干苷元。4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述川射干药材与Na2CO3水溶液的质量体积比为0.5～2g:20ml；所述射干苷元与Na2CO3水溶液的质量体积比为0.5～2g:1000ml；所述川射干药材为川射干药材粗粉；所述Na2CO3水溶液的浓度为0.02％～0.08％w/v，g/ml，优选0.05％w/v，g/ml；所述提取为煎煮提取或回流提取，优选煎煮提取，时间4小时。5.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述分离的方法为：取提取液过滤，滤液调pH值至6.5
‑
7.5，冷却，加氯仿萃取，取氯仿萃取液减压浓缩，干燥，得粗提物；所述提取液的原料为川射干药材时，冷却后还包括加与滤液等体积的石油醚萃取；所述冷却至室温；所述氯仿与滤液等体积。6.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述纯化的方法包括制备液相色谱纯化法、湿柱色谱纯化法或干柱色谱纯化法。7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述制备液相色谱纯化法为：粗提物溶解于甲醇，注入制备色谱柱，再用流动相甲醇
‑
水洗脱，收集响应值最大时段的洗脱液，减压浓缩，干燥得异射干苷元。8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述粗提物与甲醇的质量体积比为5～15mg：...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁崇均，陈帅，罗森，余梦瑶，许晓燕，罗恒，汤依娜，王笳，
申请(专利权)人：四川省中医药科学院，
类型：发明
国别省市：