一种长链非编码RNA基因抑制剂在促进毛囊干细胞增殖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种长链非编码RNA基因抑制剂在促进毛囊干细胞增殖中的应用，属于干细胞技术领域。本发明专利技术通过CCK

【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNA基因抑制剂在促进毛囊干细胞增殖中的应用


[0001]本专利技术属于干细胞
，尤其涉及一种长链非编码RNA基因抑制剂在促进毛囊干细胞增殖中的应用。

技术介绍

[0002]毛囊干细胞是毛囊结构中广泛分布的一种独特干细胞，毛囊干细胞具有多向分化的能力，能够分化为毛囊、皮脂腺和表皮等。不同于胚胎干细胞，毛囊干细胞一般处于静息状态，只有在毛囊生长期早期才会被激活，毛囊干细胞不仅维持正常皮肤中毛囊的再生，在皮肤损伤时，其还参与毛囊、表皮和皮脂腺的重建。因此，毛囊干细胞被认为是促进皮肤创伤修复的重要种子细胞。然而，毛囊干细胞在体外扩增时，增殖能力并不理想。因此，如何增加体外培养时毛囊干细胞的增殖速度是急需解决的问题。
[0003]长链非编码RNA是长度大于200个核苷酸的非编码RNA，其并不直接参与蛋白质的编码，起初其被认为是基因组转录的“噪音”。但是，随着基因芯片技术以及RNA测序技术的广泛应用，越来越多的lncRNA被鉴定出来，并通过研究证实其具有复杂的生物学功能，并且对细胞的增殖，分化，凋亡以及迁移等都有着不同程度的影响。因此，研究在毛囊干细胞增殖中发挥作用的长链非编码RNA，对于解决毛囊干细胞体外培养增殖速度慢的问题具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种长链非编码RNA在促进毛囊干细胞增殖中的应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案： 本专利技术提供了一种长链非编码RNA lncRNA
‑
AC079586.1，所述lncRNA
‑
AC079586.1的基因抑制剂能够促进毛囊干细胞的增殖, 所述lncRNA
‑
AC079586.1的转录本序列如SEQ ID NO.1所示，所述lncRNA
‑
AC079586.1的External Transcript ID: ENST00000375987.3。
[0006]此外，本专利技术提供了一种 lncRNA
‑
AC079586.1基因抑制剂在制备毛囊干细胞增殖促进剂中的应用，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链序列为5
′‑ꢀ
AGUGUAUGUCGCAUAUCAC
‑3′
；所述siRNA的反义链序列为5
′‑ꢀ
GUGAUAUGCGACAUACACU
‑3′
。
[0007]此外，本专利技术提供了一种用于促进毛囊干细胞增殖的基因抑制剂，所述基因抑制剂为lncRNA
‑
AC079586.1基因的siRNA，所述siRNA的正义链序列为5
′‑ꢀ
AGUGUAUGUCGCAUAUCAC
‑3′
；所述siRNA的反义链序列为5
′‑ꢀ
GUGAUAUGCGACAUACACU
‑3′
。
[0008]优选地，所述siRNA能够促进毛囊干细胞增殖优选地，所述siRNA能够降低细胞周期基因P21的表达；所述siRNA能够促进细胞周期基因CDK
‑
1的表达。
[0009]此外，本专利技术提供了lncRNA
‑
AC079586.1基因抑制剂在制备毛囊干细胞的细胞周
期基因P21表达抑制剂中的应用，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链序列为5
′‑ꢀ
AUGUUCUAAUGUUCUUUUCUG
‑3′
；所述siRNA的反义链序列为5
′‑
GAAAAGAACAUUAGAACAUUC
‑3′
。
[0010]除此之外，本专利技术提供了lncRNA
‑
AC079586.1基因抑制剂在制备毛囊干细胞的细胞周期基因CDK1表达促进剂中的应用，其特征在于，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链序列为5
′‑ꢀ
AUGUUCUAAUGUUCUUUUCUG
‑3′
；所述siRNA的反义链序列为5
′‑
GAAAAGAACAUUAGAACAUUC
‑3′
。
[0011]本专利技术的有益效果在于本专利技术首次证明抑制毛囊干细胞中的lncRNA
‑
AC079586.1表达能够显著的促进毛囊干细胞增殖，并且能够抑制细胞周期基因P21的表达和促进细胞周期基因CDK1的表达，从而为进一步制备新型的毛囊干细胞增殖促进剂提供基础。
附图说明
[0012]图1 ：si
‑
lncRNA
‑
AC079586.1对于lncRNA
‑
AC079586.1表达的抑制效果检测；图2 ：CCK
‑
8检测si
‑
lncRNA
‑
AC079586.1对于毛囊干细胞增殖的影响；图3 ：荧光定量PCR检测P21和CDK
‑
1基因的mRNA表达；图4： Wsetern Blot检测P21和CDK
‑
1基因的蛋白表达。
具体实施方式
[0013]实施例1（1）使用消毒剪刀和镊子拔取包含完整毛囊的毛发数根，使用含有双抗的无菌PBS冲洗毛发3次；（2）保留完整毛囊，剪去其余的部分，在24孔板中分别放置2根毛囊；（3）加入50μL DMEM/F
‑
12培养基浸泡毛囊，确保贴壁良好，置于细胞培养箱中；（4）培养24h后，缓慢加入200μL 培养基，每3天更换新鲜培养基并观察细胞爬出情况。
[0014]（5）培养10
‑
14天后，观察到长梭形细胞从毛囊爬出后，更换含10%FBS的DMEM/F
‑
12培养基继续培养；（6）当细胞融合度达到80
‑
90%的时候，去除培养基，用PBS进行清洗，加入0.25%胰酶置于细胞培养箱中；（7）1
‑
2min之后，轻轻拍打细胞培养板，待80%细胞飘起之后，终止消化，收集细胞，离心，培养基重悬后铺板进行常规培养。
[0015]实施例2设计lncRNA
‑
AC079586.1的siRNA并验证其抑制效果1.转染si
‑
lncRNA
‑
AC079586.1（1）lncRNA
‑
AC079586.1的siRNA序列如下：5
′‑ꢀ
AGUGUAUGUCGCAUAUCAC
‑3′
（SEQ ID NO.2）5
′‑ꢀ
GUGAUAUGCGACAUACACU
‑3′
（SEQ ID NO.3）1.siRNA转染（2）将P3毛囊干细胞接种于6孔板中，按照lip2000说明书将si
‑ꢀ
lncRNA
‑
AC079586.1和si本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNA lncRNA
‑
AC079586.1，其特征在于，所述lncRNA
‑
AC079586.1的基因抑制剂能够促进毛囊干细胞的增殖，所述lncRNA
‑
AC079586.1的转录本序列如SEQ ID NO.1所示。2. lncRNA
‑
AC079586.1基因抑制剂在制备毛囊干细胞增殖促进剂中的应用，其特征在于，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链序列为5
′‑ꢀ
AUGUUCUAAUGUUCUUUUCUG
‑3′
；所述siRNA的反义链序列为5
′‑
GAAAAGAACAUUAGAACAUUC
‑3′
。3.一种用于促进毛囊干细胞增殖的基因抑制剂，其特征在于，所述基因抑制剂为lncRNA
‑
AC079586.1基因的siRNA，所述siRNA的正义链序列为5
′‑ꢀ
AUGUUCUAAUGUUCUUUUCUG
‑3′
；所述siRNA的反义链序列为5
′‑
GAAAAGAACAUUAGAACAUUC
‑3′
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵焰，孙吉灵，
申请(专利权)人：济南生发堂生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：