一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液及检测方法，涉及生物检测技术领域。本发明专利技术提供了用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液，所述裂解液包括抗原提取液和样本缓冲溶液；所述抗原提取液包含溶剂、表面活性剂和脂类提取剂，所述样本缓冲溶液包含缓冲液、表面活性剂、金属离子和大分子化合物和溶剂。本发明专利技术裂解液安全、高效，且便于运输和存储，降低了操作者使用难度；此外，使用本发明专利技术的裂解液的检测方法提高了沙眼衣原体抗原检测的灵敏度。检测方法提高了沙眼衣原体抗原检测的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液及检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其是涉及一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液及检测方法。

技术介绍

[0002]沙眼衣原体是一种寄生于细胞内的微生物，常寄生于眼、生殖道，引发泌尿生殖道的感染。确定感染病原体的类型对相关疾病的诊断与治疗具有重要临床价值。
[0003]目前，在临床病人中，有70％～80％的女性患者和50％的男性患者常表现为无临床症状，所以抗原分型临床检验具有重要诊断辅助作用。常见的实验室检查方法有：1)涂片镜检；2)PCR核酸扩增检验；3)抗原检测；4)血清学检测等。使用基于硝酸纤维素膜的层析方法，可以在较短时间提供可靠的辅助诊断依据，同时降低对器械和实验人员的技术要求，极大的方便了患者以及临床检验人员。对于金标抗原类检测方法，裂解液配方对于正确获得目标抗原，提升检测灵敏度，起到主要作用。
[0004]现有技术中，沙眼衣原体抗原检测的裂解液有较多类型，配方也不尽相同。裂解方法从早期的一步法到后来的两步法。市场上较多的两步法方案中，以酸碱中和方案居多。在酸碱中和方案中，使用的为强酸及强碱的稀溶液，用量控制不准会导致抗原破坏，影响灵敏度。同时，在运输以及检测操作上对相关人员有一定的潜在危害。因此，有必要研发一种新的裂解液配方和新的裂解方法。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液及检测方法，本专利技术的裂解液配方温和，降低了裂解液的储存、运输和操作难度，使用本专利技术裂解液进行抗原检测，在保证灵敏度的同事，提高了结果的稳定性，节省检验成本。
[0007]本专利技术提供的技术方案如下：
[0008]在一个方面，本专利技术提供了一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液，所述裂解液包括抗原提取液和样本缓冲溶液；所述抗原提取液包含溶剂、表面活性剂和脂类提取剂，所述样本缓冲溶液包含缓冲液、表面活性剂、金属离子和大分子化合物和溶剂。
[0009]本专利技术提供的是一种改进的配方温和的裂解液，避免使用强酸和强碱进行提取，减少对沙眼衣原体的破坏，且方便储存和运输，便于操作人员使用。此外，本专利技术的裂解液进行沙眼衣原体抗原的提取和检测，提高了检测的灵敏度和稳定性。
[0010]在一个实施方案中，所述抗原提取液中，所述溶剂、所述表面活性剂和所述脂类提取剂的重量份数比为60～120：0.1～15：0.1～15。
[0011]在一个实施方案中，所述样本缓冲溶液中，所述缓冲液、所述表面活性剂、所述金属离子、所述大分子化合物和所述溶剂的重量份数比为0.1～20：0.1～15：0.1～5：1～20：90～110。
[0012]本专利技术裂解液中的各组分配比设计合理，相互之间具有协同配合作用，使得提取的沙眼衣原体纯度高、对抗原的破坏和影响小；裂解液性质稳定，便于储存和运输。
[0013]在一个实施方案中，所述溶剂包括水、二甲基亚砜、甲醇、甘油中的一种或多种。
[0014]在一个实施方案中，所述抗原提取液中的表面活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温80、十二烷基硫酸钠、曲拉通
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100的一种或多种；所述样本缓冲溶液的表面活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温80、十二烷基硫酸钠、曲拉通
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100和布里洁(brij)的一种或多种。
[0015]在一个实施方案中，所述脂类提取剂包括胆固醇、苯酚、甘油、高密度脂蛋白的一种或多种。
[0016]在一个实施方案中，所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、硼酸
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硼砂缓冲液或柠檬酸缓冲液中的一种或多种；优选地，所述缓冲液的pH为7
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10。
[0017]在一个实施方案中，所述金属离子盐包括为氯化镁、氯化钠、柠檬酸三钠、硫酸亚铁中的一种或多种。
[0018]在一个实施方案中，所述大分子化合物包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、酪蛋白纳、牛血清白蛋白中的一种或多种。
[0019]本专利技术还涵盖一种衣原体抗原提取试剂盒，所述试剂盒包括前述方案中提到的裂解液和样本缓冲溶液。
[0020]用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液的制备方法，依次添加所述表面活性剂、脂类提取剂以及溶剂，在常温下搅拌混匀后得所述抗原提取液；依次添加缓冲液、表面活性剂、大分子化合物和金属离子盐，在常温下搅拌混匀后得所述样本缓冲溶液。
[0021]在另一个方面，本专利技术提供了一种非疾病诊断目的的沙眼衣原体抗原的检测方法，使用所述裂解液对其进行检测，包括：采用所述抗原提取液对样本进行裂解和提取，然后添加所述样本缓冲溶液，之后进行抗原检测。
[0022]在一个具体的实施方案中，所述待检测样本进行裂解的时间为1～2min。
[0023]在一个实施方案中，将裂解后的待检测样本采用免疫层析试纸条进行检测。
[0024]在一个具体的实施方案中，所述待检测样本是人的尿道分泌物或女性的宫颈分泌物取出，例如用无菌拭子取出进行检测。
[0025]有益效果：
[0026](1)本专利技术提供的裂解液，试剂更安全。在现有技术强酸碱裂解中和法中，使用氢氧化钠对病原体进行破碎，再使用盐酸进行中和。本专利技术中，使用三羟甲基氨基甲烷和柠檬酸组分的体系来消除样本中酸性pH的干扰，同时降低测试液对人体皮肤的可能腐蚀伤害，对实验人员和相关运输、存储人员更安全友好。
[0027](2)本专利技术的检测灵敏度高。强酸碱裂解法中，碱液中的氢氧化钠作为破膜剂，获得相应的抗原。由于氢氧化钠为强碱，其不可逆的破坏作用需要精确的控制反应时间，否则容易导致LPS抗原被破坏从而影响灵敏度。本专利技术使用表面活性剂结合脂类提取剂，可以温和完整地获得LPS抗原，大幅提高灵敏度。
[0028](3)使用本专利技术裂解液进行抗原检测的操作难度低。强酸碱裂解中和法中，需要精确控制碱液的反应时间，以确保有效抗原的产出。若疏忽时间，则可能造成样本中抗原损失，导致测试结果有误。而本专利技术中，无需考量第二组分的添加时间对测试结果的影响，极
大降低操作难度，减少错误操作的可能性。
具体实施方式
[0029]下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0030]实施例1
[0031]一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液，由抗原提取液(A液)和样本缓冲溶液(B液)组成。
[0032]抗原提取液中，溶剂选择甘油，添加量80g；表面活性剂为吐温80和聚乙烯吡咯烷酮，添加量分别为1g和2g，脂类提取剂选用胆固醇，添加量5g。按照表面活性剂、脂类提取剂以及溶剂的顺序添加，并在常温下搅拌混匀。
[0033]样本缓冲溶液中，缓冲体系中三羟甲基氨基甲烷缓冲液包括三羟甲基氨基甲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于沙眼衣原体抗原检测的裂解液，其特征在于，所述裂解液包括抗原提取液和样本缓冲溶液；所述抗原提取液包含溶剂、表面活性剂和脂类提取剂，所述样本缓冲溶液包含缓冲液、表面活性剂、金属离子、大分子化合物和溶剂。2.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述抗原提取液中，所述溶剂、所述表面活性剂和所述脂类提取剂的重量份数比为60～120：0.1～15：0.1～15。3.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述样本缓冲溶液中，所述缓冲液、所述表面活性剂、所述金属离子、所述大分子化合物和所述溶剂的重量份数比为0.1～20：0.1～15：0.1～5：1～20：90～110。4.根据权利要求1或2所述的裂解液，其特征在于，所述溶剂包括水、二甲基亚砜、甲醇、甘油中的一种或多种。5.根据权利要求1～3中任一项所述的裂解液，其特征在于，所述抗原提取液中的表面活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温80、十二烷基硫酸钠、曲拉通
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100的一种或多种；所述样本缓冲溶液的表面活...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨玮，史准，
申请(专利权)人：固安林科特生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：