以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法技术

本发明专利技术公开一种以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法，首先剪取待筛选中间球海胆管足并经过前期处理制成样本，通过液相色谱

【技术实现步骤摘要】
以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法。

技术介绍

[0002]中间球海胆（Strongylocentrotus intermedius）原产于日本北海道和俄罗斯远 东等地沿海，1989年自日本引入中国，现已在中国的大连、山东等地形成一定的人工养殖规模，其性腺的国内市场需求量和出口量逐年递增。
[0003]海水酸化（seawater acidification）是因海洋富集并溶解了过量的二氧化碳气体（CO2）而导致海水pH降低的一种环境问题。联合国政府间气候变化专门委员会报告显示，自1880年以来，海洋平均pH下降了0.12，预计到本世纪末（2100年），地球海水的平均pH将会再降0.3
‑
0.5。海水酸化可造成养殖海胆大量死亡，严重制约和影响了海胆养殖产业的健康可持续发展，因此，开展耐海水酸化海胆的鉴别及选育工作迫在眉睫。
[0004]特征标志物定义为在独特物种中可检测到，良好的生物标志物具有高灵敏度（识别真阳性的可能性）和特异性（确认真阴性的可能性），从而可提供明确的确认/排除信息。小分子代谢物能够有效地研究基因的动态表达，具有靶向筛选的潜力，是有前途的理想候选标志物。然而，目前未见以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法。
[0006]本专利技术的技术解决方案是：一种以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：a. 剪取待筛选的中间球海胆管足，制成液相色谱
‑
质谱分析用样本；b. 采用液相色谱
‑
质谱联用分析仪对样本进行小分子代谢物组学分析，获得样本中的小分子代谢物相对含量；c. 选出样本中同时有15种小分子代谢物相对含量均位于标准区间值的中间球海胆为耐酸化中间球海胆，所述15种小分子代谢物及相对含量标准区间值如下：三甲基[(苯基氨甲酰)
‑
甲基]碘化铵
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479
‑
8379；(R)
ꢀ‑3‑
[(R)
‑3‑
羟基丁酰氧基]丁酸酯
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
745
‑
16671；1
‑
O
‑
十八烷基
‑
sn
‑
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
128
‑
7126；飞燕草苷
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377
‑
8404；奈达铂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
72
‑
271；2
‑
[(3
‑
氯苯基) 甲基]‑5‑
羟基
‑
1H
‑
苯并[g]吲哚
‑3‑
羧酸乙酯
ꢀꢀ
2698
‑
10859；2
‑
脱氢
‑3‑
脱氧
‑
D
‑
阿拉伯庚酸7
‑
磷酸酯
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42
‑
506；去甲基乳烯酸
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121
‑
1368；
白消安
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35
‑
1777；1
‑
萘胺
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23021
‑
36410；美芬尼新
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10322
‑
160292；Kandelin A
‑1ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2280
‑
26264；3
‑
[6
‑
（3
‑
氨基苯基）
‑
7H
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
酰氧基]苯酚
ꢀꢀ
2410
‑
15332；二甲基精氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
19364
‑
149271；S
‑
(N
‑
羟基
‑
N
‑
甲基氨甲酰)谷胱甘肽
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
67726
‑
1429309。所述a步骤依次如下：称取管足50
±
2 mg加入到2 mL 离心管中，加入
‑
20℃预冷的500 uL内含1 ppm的2
‑
氯苯丙氨酸的甲醇溶液中，所述甲醇溶液的质量浓度为70%；超声匀浆4次，每次30 s，30 HZ；匀浆后振荡5 min，冰上静置15 min；在4℃，12000 r/min下离心10 min，吸取上清液400 uL到另一个离心管中；在原离心管沉淀中加入500 uL乙酸乙酯/甲醇溶液，所述乙酸乙酯与甲醇的体积比为1：3，振荡5 min，冰上静置15 min，在4℃、12000 rmp下离心10min，取上清液400 uL；合并两次上清液，浓缩干燥；干燥物加入100 uL 质量浓度为70%的甲醇溶液，超声3min，在4℃，12000 r/min下离心3 min，吸取60 uL上清液，即制成液相色谱
‑
质谱分析用样本。
[0007]所述b步骤如下：所述液相色谱
‑
质谱联用分析仪的条件：色谱柱：Waters T3 C18柱，i.d.2.1
×
100 mm, 1.8 μm；流动相A：质量0.04%甲酸/水；流动相B：含有质量0.04%甲酸的纯乙腈；柱温：35℃；流速：0.3ml/min；进样量：1 uL；质谱下机原始数据经过ProteoWizard 转换为mzML格式，采用XCMS程序进行峰提取，对齐，保留时间校正；采用SVR方法对峰面积进行校本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：a. 剪取待筛选的中间球海胆管足，制成液相色谱
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质谱分析用样本；b. 采用液相色谱
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质谱联用分析仪对样本进行小分子代谢物组学分析，获得样本中的小分子代谢物相对含量；c. 选出样本中同时有15种小分子代谢物相对含量均位于标准区间值的中间球海胆为耐酸化中间球海胆，所述15种小分子代谢物及相对含量标准区间值如下：三甲基[(苯基氨甲酰)
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甲基]碘化铵
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8379；(R)
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[(R)
‑3‑
羟基丁酰氧基]丁酸酯
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十八烷基
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7126；飞燕草苷
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8404；奈达铂
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271；2
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[(3
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氯苯基) 甲基]
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羟基
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1H
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苯并[g]吲哚
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羧酸乙酯
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2698
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10859；2
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脱氢
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阿拉伯庚酸7
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磷酸酯
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1368；白消安
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36410；美芬尼新
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【专利技术属性】
技术研发人员：湛垚垚，常亚青，宋坚，崔东遥，赵谭军，刘丽，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：