花生遗传群体的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种花生遗传群体的构建方法，属于遗传群体构建技术领域。本发明专利技术的花生遗传群体的构建方法是采用存在FAD2基因型差异的两亲本花生进行杂交，采用竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive Allele Specific PCR,KASP)检测F1代籽仁的FAD2基因型，筛选FAD2的基因型为杂合的籽仁，剔除FAD2的基因型为纯合的籽仁；观察检测F1单粒播种收获F2代的目标表型是否发生分离，对于F2代表型分离不明显的株系进行FAD2基因型检测淘汰纯合株系，然后通过自交或回交构建相关遗传群体。本发明专利技术的方法能简单高效地筛选出真杂种，构建目标性状有效分离群体。有效分离群体。有效分离群体。

【技术实现步骤摘要】
花生遗传群体的构建方法


[0001]本专利技术属于遗传群体构建
，具体涉及一种花生遗传群体的构建方法。

技术介绍

[0002]有性杂交是作物育种的重要途径，也是遗传群体构建必不可少的方法。对于自花授粉作物，人工杂交需要经过母本去雄及人工授粉两个阶段。在花生杂交过程中，需要在杂交之前以及杂交之后摘除没有授粉花朵以避免非杂交果针的混杂。但在实际操作过程中，母本雄蕊去除不彻底以及摘花遗漏等原因均会导致收获的杂交果中存在一定比例的假杂种。因此，筛选真杂种、剔除假杂种便成为杂交果收获后的重要工作。长期以来，育种工作者都是通过观察F1的表型以及在F2代是否发生性状分离来筛选真杂种，但这样筛选的前提是两个杂交亲本需要存在明显的容易识别的性状差异，且这些差异性状要在F2发生分离。如果某性状由2对以上基因决定，F2群体的分离比例需要达到一定的数量才能够显现。而且很多性状诸如含油量、脂肪酸含量、抗病性、抗逆性等的表型检测工作既繁重又不准确。随着分子生物技术的飞速发展，利用分子标记筛选杂交种逐渐成为鉴定真杂种的有效方法。如利用SSR标记、AhMITE标记、CAPS标记、KASP标记以及SNP标记鉴定真杂种在花生中均有报道。利用这些方法首先需要对杂交亲本进行多态性筛选，而生产上广泛选用的杂交亲本之间均存在亲缘关系较近且多态性低的现状，使得筛选工作繁琐且效率低下。

技术实现思路

[0003]针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种花生遗传群体的构建方法。
[0004]为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0005]一种花生遗传群体的构建方法，步骤如下：
[0006](1)采用目标性状差异明显且能够稳定遗传的两亲本花生进行杂交，收获杂交荚果F1代，两亲本花生除目标性状外还存在非目标性状的FAD2基因型差异；
[0007](2)切取F1代籽仁远胚端一侧子叶，用于基因组DNA的提取，带切口籽仁用石蜡涂抹切口封闭；
[0008](3)提取所切取子叶的DNA，设计特异性引物，采用竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive Allele Specific PCR,KASP)检测FAD2的基因型，筛选FAD2的基因型为杂合的籽仁，剔除FAD2的基因型为纯合的籽仁；
[0009](4)将步骤(3)筛选获得的杂合F1单粒播种于田间，待成熟后按单株编号收获F2代；
[0010](5)观察检测F2代目标表型是否发生分离，对于F2代表型分离不明显的株系，取其对应F2株系的叶片，提取DNA，采用竞争性等位基因特异性PCR(KASP)检测其FAD2的基因型，淘汰FAD2的基因型为纯合的株系；
[0011](6)经二次筛选获得的F2代籽粒进行单粒播种，随后按单粒传法连续自交5～6代构建重组近交系(Recombinant inbred line,RIL)遗传群体，或者通过回交构建近等基因
系(Near Isogenic Lines，NIL)遗传群体。
[0012]所述存在FAD2基因型差异为两亲本花生含有AhFAD2A/2a和AhFAD2B/2b中至少一个基因型差异。
[0013]所述特异性引物是根据AhFAD2A/2a位点(AhFAD2基因第448位)碱基G/ASNP差异，分别针对野生型位点与突变位点设计差异引物FAD2A
‑
WT、FAD2a
‑
M，以及通用反向引物FAD2A
‑
R；根据AhFAD2B/2b位点(AhFAD2基因第442位)A碱基的缺失/插入差异，分别针对野生型位点与突变位点设计差异引物FAD2B
‑
WT、FAD2b
‑
M，以及通用反向引物FAD2B
‑
R。引物序列见表1，野生型位点引物FAD2A
‑
WT和FAD2B
‑
WT的5'端加尾序列均使用FAM荧光标记；突变位点引物FAD2a
‑
M和FAD2b
‑
M的5'端加尾序列均使用HEX荧光标记。
[0014]一种针对花生含油量表型的重组近交系遗传群体的构建方法，步骤如下：
[0015](1)采用花生含油量性状差异明显的两亲本花生进行杂交，收获杂交荚果F1代，两亲本花生除目标性状外还存在非目标性状的FAD2基因型差异；
[0016](2)切取F1代籽仁远胚端一侧子叶，用于基因组DNA的提取，带切口籽仁用石蜡涂抹切口封闭；
[0017](3)提取所切取子叶的DNA，设计特异性引物，采用竞争性等位基因特异性PCR(KASP)检测FAD2的基因型，筛选FAD2的基因型为杂合的籽仁，剔除FAD2的基因型为纯合的籽仁；
[0018](4)将步骤(3)筛选获得的杂合F1单粒播种于田间，待成熟后按单株编号收获F2代；
[0019](5)观察检测F2代目标表型是否发生分离，对于F2代表型分离不明显的株系，取其对应F2株系的叶片，提取DNA，采用竞争性等位基因特异性PCR检测其FAD2的基因型，淘汰FAD2的基因型为纯合的株系；
[0020](6)经二次筛选获得的F2代籽粒进行单粒播种，随后按单粒传法连续自交5～6代构建针对花生含油量表型的重组近交系遗传群体。
[0021]在一个具体实施例中，所述花生亲本为高油亲本宇花14号和低油亲本SPI098。
[0022]一种针对花生荚果长表型的重组近交系遗传群体的构建方法，步骤如下：
[0023](1)采用花生荚果长性状差异明显的两亲本花生进行杂交，收获杂交荚果F1代，两亲本花生除目标性状外还存在非目标性状的FAD2基因型差异；
[0024](2)切取F1代籽仁远胚端一侧子叶，用于基因组DNA的提取，带切口籽仁用石蜡涂抹切口封闭；
[0025](3)提取所切取子叶的DNA，设计特异性引物，采用竞争性等位基因特异性PCR(KASP)检测FAD2的基因型，筛选FAD2的基因型为杂合的籽仁，剔除FAD2的基因型为纯合的籽仁；
[0026](4)将步骤(3)筛选获得的杂合F1单粒播种于田间，待成熟后按单株编号收获F2代；
[0027](5)观察检测F2代目标表型是否发生分离，对于F2代表型分离不明显的株系，取其对应F2株系的叶片，提取DNA，采用竞争性等位基因特异性PCR(KASP)检测其FAD2的基因型，淘汰FAD2的基因型为纯合的株系；
[0028](6)经二次筛选获得的F2代籽粒进行单粒播种，随后按单粒传法连续自交5～6代构建针对花生荚果长表型的重组近交系遗传群体。
[0029]在一个具体实施例中，所述花生亲本为大果品种鲁花11和小果品系BC54。
[0030]本专利技术技术方案的优点：
[0031]其中高油酸分子标记AhFAD2A/2a和AhFAD2B/2b是花生中应用最广泛的SNP标记。AhFAD2A基因编码区448nt处碱基G突变为A(AhFAD2a)，导致编码氨基酸由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种花生遗传群体的构建方法，其特征在于，步骤如下：(1)采用目标性状差异明显且能够稳定遗传的两亲本花生进行杂交，收获杂交荚果F1代，两亲本花生除目标性状外还存在非目标性状的FAD2基因型差异；(2)切取F1代籽仁远胚端一侧子叶，用于基因组DNA的提取，带切口籽仁用石蜡涂抹切口封闭；(3)提取所切取子叶的DNA，设计特异性引物，采用竞争性等位基因特异性PCR检测FAD2的基因型，筛选FAD2的基因型为杂合的籽仁，剔除FAD2的基因型为纯合的籽仁；(4)将步骤(3)筛选获得的杂合F1单粒播种于田间，待成熟后按单株编号收获F2代；(5)观察检测F2代目标表型是否发生分离，对于F2代表型分离不明显的株系，取其对应F2株系的叶片，提取DNA，采用竞争性等位基因特异性PCR检测其FAD2的基因型，淘汰FAD2的基因型为纯合的株系；(6)经二次筛选获得的F2代籽粒进行单粒播种，随后按单粒传法连续自交5～6代构建重组近交系遗传群体，或者通过回交构建近等基因系遗传群体。2.根据权利要求1所述花生遗传群体的构建方法，其特征在于，所述存在FAD2基因型差异为两亲本花生含有AhFAD2A/2a和AhFAD2B/2b中至少一个基因型差异。3.根据权利要求1所述花生遗传群体的构建方法，其特征在于，所述特异性引物如SEQ ID NO:1
‑
SEQ ID NO:8所示。4.一种针对花生含油量表型的重组近交遗传系群体的构建方法，其特征在于，步骤如下：(1)采用花生含油量性状差异明显的两亲本花生进行杂交，收获杂交荚果F1代，两亲本花生除目标性状外还存在非目标性状的FAD2基因型差异；(2)切取F1代籽仁远胚端一侧子叶，用于基因组DNA的提取，带切口籽仁用石蜡涂抹切口封闭；(3)提取所切取子叶的DNA，设计特异性引物，采用竞争性等位基因特异性PCR检测FAD2的基因型，筛选FAD2的基因型为杂合的籽仁，剔除FAD2的基因型为纯合的籽仁；(4)将步骤(3)筛选获得的杂合F1单粒播种于田间，待成熟后按单株编号收获F2代；(5)观察检测F2代目标表型是否发生分离，对于F2代表型分离不明显的株...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔利仙，唐艳艳，邱晓臣，纪红昌，胡畅丽，刘文平，朱虹，隋炯明，张晓军，王晶珊，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：