中胚层杀伤（MK）细胞制造技术

本发明专利技术涉及中胚层杀伤(MK)细胞及其在治疗方法中的用途，特别是用于治疗癌症。特别是用于治疗癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】中胚层杀伤(MK)细胞


[0001]本专利技术涉及中胚层杀伤(MK)细胞及其在治疗方法中的用途，特别是用于治疗癌症。

技术介绍

[0002]中胚层细胞来源于许多组织，并且作为其它细胞类型的支持结构。例如，骨髓由造血细胞和间充质细胞组成。先前已经描述和表征了两种主要的间充质细胞类型，即在骨髓中发现的(i)间充质干细胞(MSC)及其前体和(ii)间充质前体细胞(MPC)。间充质干细胞(MSC)是多能的成体干细胞。MSC分化形成骨骼组织中发现的不同特化细胞。例如，它们可以分化为软骨细胞(软骨细胞体)、骨细胞(成骨细胞)和脂细胞(脂肪细胞)。
[0003]MSC已经用于多种治疗方法，如治疗年龄相关性黄斑变性(Age
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related Macular Degeneration，AMD)和心肌梗塞。一旦施用于受试者，MSC通常会迁移(或归巢)至受损组织，并通过旁分泌信号传导以及促进受损组织中邻近细胞的存活、修复和再生而发挥其治疗效果。
[0004]有证据表明，MSC可能具有某些免疫抑制性质和免疫增强性质。因此，MSC可用于操纵免疫应答，从而治疗疾病。然而，目前的治疗方法通常涉及MSC亚型的混合物的输注，其中大多数MSC亚型不具备所需的免疫调节性质。这需要使用高细胞剂量，其可能导致脱靶副作用和体积相关的副作用。此外，MSC通常从骨髓中获得，因此难以获得此方法所需的大量细胞。
[0005]申请人还公开了其它中胚层祖细胞，即中胚层谱系的祖细胞(PML)、免疫调节祖(iMP)细胞和免疫肿瘤学中胚层祖(ioMP)细胞。PML在PCT/GB2012/051600(公布为WO 2013/005053)中公开。iMP细胞在PCT/GB2015/051673(公布为WO 2015/189587)中公开。ioMP细胞在PCT/GB2016/052447(公布为WO 2017 025729)中公开。

技术实现思路

[0006]本专利技术涉及一种先前尚未鉴定或分离的新的细胞类型——中胚层杀伤(MK)细胞。这种MK细胞在其组成、功能和特性方面与MSC、MPC、PML、iMP细胞和ioMP细胞截然不同，其赋予增强的细胞毒性和调节自然杀伤(MK)细胞的能力。MK细胞能够直接杀死癌细胞，即癌细胞的细胞毒性。MK细胞能够引发/激活NK细胞(即增加NK细胞的增殖和/或细胞毒活性)。MK优选能够将免疫细胞吸引至炎症位点。MK细胞以NK细胞命名，因为它显示出类似的自然杀伤特性，但它是由中胚层细胞工程化而来的组织，如骨髓。这种MK细胞在组成、功能和特性方面与NK细胞截然不同。
[0007]令人惊奇地，专利技术人已鉴定了具有特异性标记物表达模式的新的中胚层杀伤(MK)细胞。特别地，所述MK细胞表达CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277。所述MK细胞可以表达CD16和CD96。所述MK细胞不表达CD34和CD45。所述MK细胞可以不表达CD56。
[0008]本专利技术所述MK细胞可以从单核细胞(MNC)中分离，如骨髓MNC或外周血MNC。所述MK
细胞能够在体外和体内增加NK细胞的细胞毒活性。MK细胞本身能够在体外和体内杀死癌细胞。这显示在实施例中。
[0009]因此，本专利技术提供了一种中胚层杀伤(MK)细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述细胞不表达可检测水平的CD34和CD45。
[0010]本专利技术还提供了一种中胚层杀伤(MK)细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD16、CD96、CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述细胞不表达可检测水平的CD34、CD45和CD56。
[0011]本专利技术还提供：
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两种或更多种本专利技术所述的MK细胞的群体；
[0013]‑
本专利技术所述的MK细胞的群体，其中，所述群体中超过约15％的细胞表达可检测水平的CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD34和CD45；
[0014]‑
本专利技术所述的MK细胞的群体，其中，所述群体中超过约15％的细胞表达可检测水平的CD16、CD96、CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD34、CD45和CD56；
[0015]‑
MK细胞的群体，其中
[0016](i)所述群体中至少约20％的细胞表达可检测水平的CD112，
[0017](ii)所述群体中至少约80％的细胞表达可检测水平的CD137L，
[0018](iii)所述群体中至少约20％的细胞表达可检测水平的CD178，
[0019](iv)所述群体中至少约50％的细胞表达可检测水平的CD253，并且
[0020](v)所述群体中至少约50％的细胞表达可检测水平的CD277，
[0021]并且其中
[0022](a)所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD34，并且
[0023](b)所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD45。
[0024]‑
MK细胞的群体，其中
[0025](i)所述群体中至少约15％的细胞表达可检测水平的CD16，
[0026](ii)所述群体中至少约50％的细胞表达可检测水平的CD96，
[0027](iii)所述群体中至少约20％的细胞表达可检测水平的CD112，
[0028](iv)所述群体中至少约80％的细胞表达可检测水平的CD137L，
[0029](v)所述群体中至少约20％的细胞表达可检测水平的CD178，
[0030](vi)所述群体中至少约50％的细胞表达可检测水平的CD253，并且
[0031](vii)所述群体中至少约50％的细胞表达可检测水平的CD277，
[0032]并且其中
[0033](a)所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD34，
[0034](b)所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD45，并且
[0035](c)所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD56。
[0036]‑
一种药物组合物，包含：(a)本专利技术所述MK细胞的群体和(b)药学上可接受的载体或稀释剂；
[0037]‑
一种生成本专利技术所述MK细胞的群体的方法，包括：(a)在诱导单核细胞(MNC)分化为免疫调节祖(iMP)细胞的条件下培养MNC，(b)在低氧条件下和在允许iMP细胞粘附并分化为MK细胞的条件下，在包含一种或多种核糖核苷、一种或多种脱氧核糖核苷和血小板裂解物的培养基中培养iMP细胞；
[0038]‑
一种生成本专利技术所述MK细胞的群体的方法，包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种中胚层杀伤(MK)细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述细胞不表达可检测水平的CD34和CD45。2.根据权利要求1所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD16、CD96、CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述细胞不表达可检测水平的CD34、CD45和CD56。3.根据权利要求1或2所述的MK细胞，其中，所述细胞不表达可检测水平的CD14。4.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD25。5.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD136。6.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD155。7.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD183。8.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD205。9.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD332。10.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞(a)不表达可检测水平的CD102和/或CD127，(b)不表达可检测水平的CD104，(c)不表达可检测水平的CD50、CD62E、CD62L和CD62P中的一种或多种，或(d)(a)至(c)的任意组合。11.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD328。12.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞MK细胞表达可检测水平的CD158d、CD158i、CD160、CD314和CD337中的一种或多种。13.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD159c。14.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述细胞表达可检测水平的CD158b2、CD158f和CD159a中的一种或多种。15.根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞，其中，所述MK细胞分泌可检测水平的(a)趋化因子(C
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X
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C基序)配体1(CXCL1也称为GROa)，(b)白细胞介素
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12(IL
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12)，(c)可溶性IL
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2受体(IL
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2Ra)，(d)IL
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8，(e)可溶性TRAIL和(f)IL
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6中的一种或多种。16.两种或更多种根据前述权利要求中任一项所述的MK细胞的群体。17.MK细胞的群体，其中，所述群体中超过约15％的细胞表达可检测水平的CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD34和CD45。18.根据权利要求16所述的MK细胞的群体，其中，所述群体中超过约15％的细胞表达可检测水平的CD16、CD96、CD112、CD137L、CD178、CD253和CD277，并且其中，所述群体中约5％或更少的细胞表达可检测水平的CD34、CD45和CD56。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：细胞治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：