一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法，包括步骤一；第一单体初步聚合，形成粒径单分散的微球，步骤二；第一单体进一步交联聚合，扩大微球的粒径，步骤三；进一步地引入第二单体和第三单体进行聚合，将两种功能官能团聚合在微球上，步骤四；清洗，将反应体系中的溶剂、分散剂以及多余的单体等除去。本发明专利技术克服了现有技术的不足，设计合理，结构紧凑，本发明专利技术通过多步分散聚合法，获得含有复合功能官能团的强阳离子交换色谱填料。可以避免现有离子交换色谱填料中单一官能团可能产生的蛋白分离度较差或者部分变异蛋白无法分离以及柱效较低的情况。填料的制备方法简单易于操作，填料的离子交换容量可控。填料的离子交换容量可控。填料的离子交换容量可控。

【技术实现步骤摘要】
一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法


[0001]本专利技术涉及糖化血红蛋白层探测
，具体涉及一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法。

技术介绍

[0002]糖化血红蛋白(GHb)是红细胞中的血红蛋白与血清中的糖类相结合的产物。它是通过缓慢、持续及不可逆的糖化反应形成，其含量的多少取决于血糖浓度以及血糖与血红蛋白接触时间，而与抽血时间、患者是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。GHb由HbA1a、HbA1b、HbA1c组成,其中HbA1c约占70％,且结构稳定,目前HbA1c是评价糖尿病患者长期血糖控制状况的“金标准”，在糖尿病治疗及其并发症监测中具有重要价值。
[0003]高效液相糖化血红蛋白检测系统实现的是对HbA1c的定量检测。根据高效液相色谱法(HPLC)的工作原理，在离子交换法对糖化血红蛋白的检测分析中，高效液相分析仪、洗脱试剂、层析柱、校准品等对检测结果都会产生影响，而其中层析柱对于糖化血红蛋白的分离能力起着非常重要的作用。
[0004]血红蛋白变异体是影响HbA1c检测和结果解读的重要因素之一,层析柱对于变异体及GHb的各组分的分离能力不足的话，可能导致结果产生偏差。例如，若层析柱填料上所带的官能团不能将HbF、L
‑
HbA1c和HbA1c完全分离，当某些临床样本HbF或L
‑
HbA1c异常的情况下，会造成HbA1c测值假性增高，导致测试结果不准确。
[0005]为此，我们提出一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于解决或者至少缓解现有技术中存在的问题。
[0007]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：
[0008]一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0009]步骤一；第一单体初步聚合，形成粒径单分散的微球，称取10
‑
15份的第一单体、2
‑
5份的引发剂和5
‑
10份的稳定剂加入70
‑
83份的介质中，均匀溶解后在60
‑
75℃水浴加热的情况下搅拌反应2
‑
3h，
[0010]步骤二；第一单体进一步交联聚合，扩大微球的粒径，称取2
‑
10份的第一单体、1
‑
5份的交联剂、2
‑
5份的引发剂和5
‑
10份的稳定剂，溶解均匀后加入步骤一的聚合体系中继续水浴加热搅拌反应2
‑
3h，
[0011]步骤三；进一步地引入第二单体和第三单体进行聚合，将两种功能官能团聚合在微球上，称取2
‑
10份的第二单体和第三单体的混合物、1
‑
5份的引发剂，溶解均匀后加入前面的反应体系中继续水浴加热搅拌反应12
‑
16h，
[0012]步骤四；清洗，将反应体系中的溶剂、分散剂以及多余的单体等除去，通过离心设备，将沉淀的聚合的微球用乙醇和纯化水重复离心和清洗工序2
‑
3遍，再通过干燥得到含有复合功能官能团的强阳离子交换色谱填料。
[0013]可选地，所述第一单体为甲基丙烯酸甲酯、苯乙烯、甲基丙烯酸缩水甘油酯中的一种或几种任意组合使用。
[0014]可选地，所述第二单体为2
‑
丙烯酰胺
‑2‑
甲基丙磺酸，苯乙烯磺酸钠、烯丙基磺酸钠中的一种或几种任意组合使用。
[0015]可选地，所述第三单体为丙烯酸、4
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戊烯酸、3
‑
甲基肉桂酸、5
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己烯酸、3
‑
丁烯酸中的一种或几种任意组合使用。
[0016]可选地，所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯中的一种或几种任意组合使用。
[0017]可选地，所述引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异丁酸二甲酯、过氧化苯甲酰、过氧化二酰中的一种或几种任意组合使用。
[0018]可选地，所述稳定剂为聚乙烯醇、聚氧乙烯、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基丙基纤维素、聚天冬酸氨钠中的一种或几种任意组合使用。
[0019]可选地，所述介质为乙醇、甲醇、甲苯、去离子水中的一种或几种任意组合使用。
[0020]可选地，所述步骤三混合物中第二单体：第三单体的比例为20:80—80:20。
[0021]可选地，在经步骤四清洗处理时，需要步骤三反应完成后的反应液降温到室温。
[0022]本专利技术实施例提供了一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法。具备以下有益效果：
[0023]本专利技术提供一种糖化血红蛋白层析柱微球填料制备方法，在填料的合成过程中，在微球上引入羧酸基团与磺酸基团两种功能官能团，通过调节两种官能团在微球上所占有的比例，解决填料的色谱柱分析检测结果的分离度与峰形不理想的技术问题。本专利技术提供的填料制备方法，能够合成出粒径分散的微球填料，实现糖化血红蛋白高效液相色谱检测过程中HbF、L
‑
HbA1c和HbA1c等蛋白良好的分离效果及分离柱效。
[0024]本专利技术通过多步分散聚合法，获得含有复合功能官能团的强阳离子交换色谱填料。可以避免现有离子交换色谱填料中单一官能团可能产生的蛋白分离度较差或者部分变异蛋白无法分离以及柱效较低的情况。填料的制备方法简单易于操作，填料的离子交换容量可控。
附图说明
[0025]图1为经过本专利技术制备方法得到层析柱在检测时产生的色谱图。
具体实施方式
[0026]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法，包括如下步骤：
[0028]步骤一；第一单体初步聚合，形成粒径单分散的微球。称取10
‑
15份的第一单体、2
‑
5份的引发剂和5
‑
10份的稳定剂加入70
‑
83份的介质中，均匀溶解后在60
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75℃水浴加热的情况下搅拌反应2
‑
3h。
[0029]步骤二；第一单体进一步交联聚合，扩大微球的粒径。称取2
‑
10份的第一单体、1
‑
5份的交联剂、2
‑
5份的引发剂和5
‑
10份的稳定剂，溶解均匀后加入步骤一的聚合体系中继续水浴加热搅拌反应2
‑
3h。
[0030]步骤三；进一步地引入第二单体和第三单体进行聚合，将两种功能官能团聚合在微球上。称取2
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一；第一单体初步聚合，形成粒径单分散的微球，称取10
‑
15份的第一单体、2
‑
5份的引发剂和5
‑
10份的稳定剂加入70
‑
83份的介质中，均匀溶解后在60
‑
75℃水浴加热的情况下搅拌反应2
‑
3h，步骤二；第一单体进一步交联聚合，扩大微球的粒径，称取2
‑
10份的第一单体、1
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5份的交联剂、2
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5份的引发剂和5
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10份的稳定剂，溶解均匀后加入步骤一的聚合体系中继续水浴加热搅拌反应2
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3h，步骤三；进一步地引入第二单体和第三单体进行聚合，将两种功能官能团聚合在微球上，称取2
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10份的第二单体和第三单体的混合物、1
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5份的引发剂，溶解均匀后加入前面的反应体系中继续水浴加热搅拌反应12
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16h，步骤四；清洗，将反应体系中的溶剂、分散剂以及多余的单体等除去，通过离心设备，将沉淀的聚合的微球用乙醇和纯化水重复离心和清洗工序2
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3遍，再通过干燥得到含有复合功能官能团的强阳离子交换色谱填料。2.如权利要求1所述的一种糖化血红蛋白层析柱用填料的制备方法，其特征在于：所述第一单体为甲基丙烯酸甲酯、苯乙烯、甲基丙烯酸缩水甘油酯中的一种或几种任意组合使用。3.如权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，冯巧芳，彭伟，邹丽洁，林滔，刘岩，
申请(专利权)人：无锡市凯奥善生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：