一种改性脱细胞心肌基质凝胶及其制备方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种改性脱细胞心肌基质凝胶及其制备方法，解决了现有脱细胞心肌材料在维持心肌活力、抑制心肌纤维化促进心肌再生、改善心脏功能等方面效果不佳的问题，一种改性脱细胞心肌基质凝胶，包括：脱细胞心肌基质，Agrin蛋白聚糖、Cathepsin D组织蛋白酶、Galectin 1半乳糖凝集素1、Annexin A6膜联蛋白A6、HSP47抑制剂，按照重量份计，所述的Agrin蛋白聚糖含量为所述脱细胞心肌基质含量的0.1

【技术实现步骤摘要】
一种改性脱细胞心肌基质凝胶及其制备方法


[0001]本专利技术涉及心肌梗死治疗的
，尤其是涉及一种改性脱细胞心肌基质凝胶及其制备方法。

技术介绍

[0002]心肌梗死是由于冠状动脉粥样斑块破裂形成血栓，突然阻塞冠状动脉，引起急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死，是冠心病中最为常见的类型。我国心肌梗死患病人数约250万,每年新发患者至少60万。该疾病具有发病突然、病情严重、致死率高的特点，已经成为我国人口死亡最主要的原因之一。心肌梗死发生后，出现心肌梗死区域。同时，炎性细胞浸润，炎性细胞分泌基质金属蛋白酶等降解活性物质使细胞外基质降解，梗死区域被瘢痕纤维组织替代，梗死边缘区心肌细胞由于失去细胞外基质支撑发生坏死或凋亡，进一步导致梗死区域扩展、室壁变薄、室壁瘤形成、心室扩张，室壁应力增加，加剧正常心肌细胞的功能损伤，负性心室重构进一步加重，最终导致心力衰竭、死亡。
[0003]心肌梗死的主要治疗原则是恢复心肌血供，减轻心肌缺血症状，改善心脏功能。目前主要治疗措施包括药物治疗，包括抗血小板、抗凝、硝酸酯类药物、b受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂等药物；心肌再灌注治疗，包括溶栓治疗、冠状动脉介入治疗；冠状动脉旁路移植术(冠脉搭桥术)。上述治疗手段极大提高了心肌梗死患者急诊救治率和长期生存率，但这些治疗方案由于无法维持心肌细胞活力、修复心肌，仅能延缓但不能阻止或逆转心室重构过程，因此仍有较高比例病患发展到心功能不全(心力衰竭)阶段，并最终发展到终末期心力衰竭，只能依靠心脏移植手段来治疗。
[0004]为此，人们一直在寻求新的治疗手段来修复受损心肌，以期抑制左心室负性重构，改善受损心脏功能。干细胞与组织工程的快速发展为心肌梗死治疗提供了新的选择。目前干细胞与组织工程在心肌梗死治疗方面的应用主要包括干细胞移植、组织工程心肌组织移植、生物材料单独应用等形式。生物材料在干细胞与组织工程应用中，一方面，可以作为载体或支架材料与干细胞或生物活性分子、药物等联合应用，另一方面部分生物材料本身具有一定的机械物理特性及部分生物活性，可以单独用于心肌梗死治疗应用。心肌梗死修复的生物材料主要包括合成材料、天然材料和生物(动物)源性材料。其中生物(动物)源性生物材料尤其是脱细胞心肌基质材料具有优异的细胞亲合性，能与宿主细胞形成生物特异性相互作用，具有修复心脏组织特异性，成为治疗心肌梗死领域研究最多的生物(动物)源性生物材料。基于脱细胞心肌基质材料，国外已开发出用于治疗心肌梗死的VentriGel
TM
脱细胞心肌基质材料产品，并完成临床试验I期，初步证实显示该材料的安全有效性，但该材料为经过胃蛋白酶等消化酶消化后的产物，其心脏组织特异性成分含量较低，另一方面脱细胞心肌基质材料由于本身的复杂性，仍含有不利于改善心脏的功能成分存在，其维持心肌活力、抑制心肌纤维化促进心肌再生、改善心脏功能等性能仍有待提升。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种改性脱细胞心肌基质凝胶及其制备方法，解决了现有脱细胞心肌材料在维持心肌活力、抑制心肌纤维化促进心肌再生、改善心脏功能等方面效果不佳的问题。
[0006]本专利技术的上述专利技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0007]一种改性脱细胞心肌基质凝胶，其特征在于，包括：
[0008]脱细胞心肌基质，Agrin蛋白聚糖、Cathepsin D组织蛋白酶、Galectin 1半乳糖凝集素1、Annexin A6膜联蛋白A6、HSP47抑制剂，按照重量份计，所述的Agrin蛋白聚糖含量为所述脱细胞心肌基质含量的0.1
‑
5％，所述的Cathepsin D组织蛋白酶含量为所述脱细胞心肌基质含量的0.5
‑
5％，所述的Galectin 1半乳糖凝集素1含量为所述的脱细胞心肌基质含量的0.1
‑
5％，所述的Annexin A6膜联蛋白A6含量为所述的脱细胞心肌基质含量的0.1
‑
5％，所述的HSP47抑制剂含量为所述的脱细胞心肌基质含量的0.1
‑
1％。
[0009]进一步地，所述的HSP47抑制剂为Col003抑制剂。
[0010]一种改性脱细胞心肌基质凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0011]S1:制备脱细胞心肌基质；
[0012]S2:制备脱细胞心肌基质预凝胶
[0013]S3:制备改性脱细胞心肌基质凝胶。
[0014]进一步地，所述的S1步骤包括以下分步骤：
[0015]S11:取得猪心，剥离内膜和外膜，及能剥离的脂肪、神经、血管等组织。在
‑
80℃冰箱中冷冻至变硬，用片肉机切成片状；
[0016]S12:用灭菌水洗涤3次，每次震荡30min；
[0017]S13:0.05％胰酶+0.025％EDTA，37℃消化3～8h，消化至组织变薄，变透明时停止；
[0018]S14:置于3％triton x100水溶液中，震荡24h；
[0019]S15:加入4％脱氧胆酸钠水溶液，震荡24h；
[0020]S16:水洗4～6次，去除脱细胞试剂；
[0021]S17:冻干获得脱细胞心肌基质。
[0022]进一步地，所述的S2步骤包括以下分步骤：
[0023]S21:将心肌脱细胞基质通过冻干、机械方式粉碎制备成粉末状；
[0024]S22:将心肌脱细胞基质粉末通过酶解或酸溶，经过揽拌消化后获得心肌脱细胞基质消化液，并于4℃低温存储备用；
[0025]S23:添加碱性物质调节pH值在7.4后、添加PBS缓冲液调节盐离子浓度至溶液成胶，得到脱细胞心肌基质预凝胶。
[0026]进一步地，其特征在于，所述的S2步骤中制备得到的脱细胞心肌基质预凝胶中心肌脱细胞基质的含量为0.1mg
‑
30mg/ml。
[0027]进一步地，所述的S3步骤包括以下分步骤：
[0028]S31:将Agrin蛋白聚糖、Cathepsin D组织蛋白酶、Galectin 1半乳糖凝集素1、Annexin A6膜联蛋白A6、HSP47抑制剂添加到步骤S2制备得到的脱细胞心肌基质预凝胶；
[0029]S32:通过升高温度至37℃和/或加入交联剂进行交联后，得到改性脱细胞心肌基质凝胶。
[0030]进一步地，所述的交联剂为以下的一种或多种：戊二醛、EDC、京尼平。
[0031]综上所述，本专利技术的有益技术效果为：
[0032](1)本专利技术相对于现有脱细胞心肌基质凝胶，具有相对高含量的Agrin蛋白聚糖；Cathepsin D(CTSD)组织蛋白酶；Galectin 1(LGALS1)半乳糖凝集素1；Annexin A6(ANXA6)膜联蛋白A6；，可为心肌梗死治疗提供促进心肌细胞再生、保护缺血心肌、调控免疫细胞、抗炎作用、维持心肌收缩能力等强化功能；
[0033](2)本专利技术相对于现有脱细胞心肌基质凝胶，具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改性脱细胞心肌基质凝胶，其特征在于，包括：脱细胞心肌基质，Agrin蛋白聚糖、Cathepsin D组织蛋白酶、Galectin 1半乳糖凝集素1、Annexin A6膜联蛋白A6、HSP47抑制剂，按照重量份计，所述的Agrin蛋白聚糖含量为所述脱细胞心肌基质含量的0.1
‑
5％，所述的Cathepsin D组织蛋白酶含量为所述脱细胞心肌基质含量的0.5
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5％，所述的Galectin 1半乳糖凝集素1含量为所述的脱细胞心肌基质含量的0.1
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5％，所述的Annexin A6膜联蛋白A6含量为所述的脱细胞心肌基质含量的0.1
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5％，所述的HSP47抑制剂含量为所述的脱细胞心肌基质含量的0.1
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1％。2.根据权利要求1所述的改性脱细胞心肌基质凝胶，其特征在于，所述的HSP47抑制剂为Col003抑制剂。3.一种改性脱细胞心肌基质凝胶的制备方法，其特征在于，制备的是权利要求1或2所述的改性脱细胞心肌基质凝胶，包括以下步骤：S1:制备脱细胞心肌基质；S2:制备脱细胞心肌基质预凝胶S3:制备改性脱细胞心肌基质凝胶。4.根据权利要求3所述的改性脱细胞心肌基质凝胶的制备方法，其特征在于，所述的S1步骤包括以下分步骤：S11:取得猪心，剥离内膜和外膜，及能剥离的脂肪、神经、血管等组织。在
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80℃冰箱中冷冻至变硬，用片肉机切成片状；S12:用灭菌水洗涤3次，每次震荡30min；S13:0.05...

【专利技术属性】
技术研发人员：全大萍，杨习锋，陈诗浩，陈嘉欣，刘云奇，白莹，殷胜利，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：