一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管制造技术

本实用新型专利技术涉及分子生物学及临床检验技术领域，具体是一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，包括管体、管盖和管体内的超滤膜。超滤膜呈倒圆锥形置于所述管体内，超滤膜顶部嵌入管体底部的凹槽；管体内壁设有固定所述超滤膜上沿的凸起。通过结合超速离心法和超滤法，将超滤膜设置为倒圆锥形进行细胞上清液离心来提取外泌体，简化了管体的结构和外泌体提取的步骤，提高了外泌体提取效率。提高了外泌体提取效率。提高了外泌体提取效率。

【技术实现步骤摘要】
一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管


[0001]本技术涉及分子生物学及临床检验
，具体是一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管。

技术介绍

[0002]外泌体是一种由活细胞分泌，直径在40
‑
150nm，具有双层脂质膜结构的小囊泡，它在机体内广泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等各种体液中。目前主要使用的外泌体提取方法主要为超速离心法、超滤法、密度梯度离心法、试剂盒提取、免疫磁珠法等，但超速离心法和超滤法应用较为普遍。
[0003]超速离心法大体包含4个步骤：(1)低速离心去除残留细胞；(2)高速离心去除细胞碎片；(3)0.22μm滤膜过滤去除大直径囊泡；(4)超速离心沉淀外泌体，为提高纯度可选用蔗糖密度梯度离心。但超速离心法也有操作耗时长、分离效率低、仪器昂贵等缺点。
[0004]超滤法是将溶剂及小分子物质过滤到膜的另一侧，而将相对大分子物质截留在超滤膜上，以达到分离的目的。外泌体直径范围40～150nm，最常见的过滤膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔径，可用于收集大于800nm、400nm或200nm物质，也有设计成微柱多孔硅纤毛结构以分离40
‑
100nm外泌体。但超滤法的过滤膜上容易形成死细胞残体和蛋白质等多种物质的堆积，堵塞的可能性大，影响过滤效率，更会导致外泌体的粘附，从而造成损失。而且，过滤时的压力和剪切力，可能会使外泌体变形受损。
[0005]目前市面上的离心过滤装置，结构复杂，生产不够便利，且容易造成提取的外泌体破损，提取效率低。

技术实现思路

[0006]针对上述问题，本技术提出了结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，结合超速离心法和超滤法，实现简化外泌体提取步骤以及管体结构的目的。
[0007]本技术提出的技术方案如下：一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，包括管体、管盖和管体内的超滤膜；所述超滤膜孔径在0.15
‑
0.30μm之间，呈倒圆锥形置于所述管体内，所述超滤膜顶部嵌入所述管体底部的凹槽口；所述管体内壁设有固定所述超滤膜上沿的凸起，当离心机旋转时，可确保超滤膜不会脱落。
[0008]进一步作为本技术技术方案的改进，所述超滤膜为孔径0.22μm的超滤膜。
[0009]进一步作为本技术技术方案的改进，所述凸起为呈环形均匀分布在所述管体内壁的三个凸点，即可达到固定超滤膜的目的。
[0010]进一步作为本技术技术方案的改进，所述凹槽为凸起的中空环形凹槽。
[0011]进一步作为本技术技术方案的改进，所述凸点与所述凹槽为所述管体内部一体注塑成型，以强化该部分的结构强度。
[0012]进一步作为本技术技术方案的改进，所述管盖与所述管体的顶端管口采用螺纹连接或卡扣连接。
[0013]采用本技术方案所达到的有益效果为：
[0014]1、通过将超滤膜设置为倒圆锥形，使得超滤膜斜置，低速离心时大分子沉积在超滤膜底部，但不堵塞超滤膜上部，避免了现有技术的超滤膜垂直放置，而使超滤膜孔被细胞或者生物大分子堵塞的问题，从而影响外泌体分离率。
[0015]2、通过在管体内壁设置几个凸点，以及在管体底部设置凹槽，使得超滤膜和管体之间的连接稳固，保证超滤膜在离心时不会晃动脱落，造成提取失败，与现有技术相比，少量的凸点在达到同样固定超滤膜的作用下，更加节省材料、简便。
附图说明
[0016]图1为本技术平面结构剖视图。
[0017]1管体，2超滤膜，3凸点，4凹槽
具体实施方式
[0018]为了使本领域技术人员更好地理解本技术的技术方案，下面结合附图对本技术进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本技术的保护范围有任何的限制作用。
[0019]应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。
[0020]需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，或者是该技术产品使用时惯常摆放的方位或位置关系，仅是为了便于描述本技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本技术的限制。
[0021]此外，术语“水平”、“竖直”、“悬垂”等术语并不表示要求部件绝对水平或悬垂，而是可以稍微倾斜。如“水平”仅仅是指其方向相对“竖直”而言更加水平，并不是表示该结构一定要完全水平，而是可以稍微倾斜。
[0022]在本技术的描述中，还需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“设置”、“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本技术中的具体含义。
[0023]如图1所示，外泌体提取离心管包括管体1、管盖和管体1内的超滤膜2；所述超滤膜2孔径在0.15
‑
0.30μm之间，呈倒圆锥形置于所述管体1内，所述超滤膜2顶部嵌入所述管体1底部的凹槽4；所述管体1内壁设有固定所述超滤膜2上沿的凸起3，当离心机旋转时，可确保超滤膜2不会脱落。
[0024]优选的，所述超滤膜2为孔径0.22μm的超滤膜。
[0025]优选的，所述凸起3为呈环形均匀分布在所述管体1内壁的三个凸点3，即可达到固定超滤膜2的目的。
[0026]优选的，所述凹槽4为凸起3的中空环形凹槽4。
[0027]优选的，所述凸点3与所述凹槽4为所述管体1内部一体注塑成型，以强化该部分的结构强度。
[0028]优选的，所述管盖与所述管体1的顶端管口采用螺纹连接或卡扣连接。
[0029]本技术的使用原理是：在对离心管进行低速离心操作时，细胞及细胞残骸，以及生物大分子可以直接沉降到超滤膜2底部，该步骤利用了超速离心法的第一步；当继续加大离心速度时，溶液中的外泌体受离心力作用可以直接穿过0.22um的超滤膜2，进入离心管管体1底部，该步骤利用了超滤法；当取出超滤膜2时，离心管管体1内剩下的就是所需要的外泌体提取物。
[0030]以上仅是本技术的优选实施方式，应当指出，由于文字表达的有限性，而客观上存在无限的具体结构，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本技术原理的前提下，还可以做出若干改进、润饰或变化，也可以将上述技术特征以适当的方式进行组合；这些改进润饰、变化或组合，或未经改进将技术的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均应视为本技术的保护范围。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，其特征在于：包括管体、管盖和管体内的超滤膜；所述超滤膜孔径在0.15
‑
0.30μm之间，呈倒圆锥形置于所述管体内，所述超滤膜顶部嵌入所述管体底部的凹槽；所述管体内壁设有固定所述超滤膜上沿的凸起。2.根据权利要求1所述的结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，其特征在于：所述超滤膜为孔径0.22μm的超滤膜。3.根据权利要求1所述的结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：周卿，
申请(专利权)人：华夏源细胞工程集团股份有限公司，
类型：新型
国别省市：