共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于荧光探针技术领域，具体涉及一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用。具有较宽紫外吸收的FeOOH材料，可以通过FRET作用使CPNsPBOC

【技术实现步骤摘要】
共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于荧光探针
，具体涉及一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]丁酰胆碱酶(BChE)又拟称胆碱酯酶、假性胆碱酯酶和血清胆碱酯酶，是由肝脏合成的一种非特异性酯酶，能水解许多胆碱类生物分子。BChE是由肝脏细胞合成分泌进入血液，主要分布在肝脏、血清和淋巴液中，在血浆中的含量更高。BChE水解丁酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB黄色化合物，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可以反应胆碱酶的活力。与其姊妹酶乙酰胆碱酶(AChE)相比，可以通过测定血清中BChE的活性可以实现对肝细胞癌、有机磷中毒、帕金森氏症和阿尔茨海默氏症等多种疾病的诊断。因此，准确地检测BChE的含量对临床诊断具有重要意义。
[0004]然而，与各种测定AChE活性的方法相比，用于BChE活性测定的方法很少。目前，最常用和最普遍应用的方法是Ellman比色法，由于其方便易用的高通量分析。然而，其结果通常会受到血清样品含有的生物分子的干扰和试剂的不稳定性的影响，极大地限制了其实际应用。因此，建立具有一种性能稳定的和高抗干扰性能的新方法是非常具有前景和应用价值的。近年来，基于荧光技术的高灵敏度、高稳定性和高选择性，被认为是一种很有前途的方法。迄今为止，各种材料都被用作有效的淬灭剂，包括氧化石墨烯金属纳米粒子和过渡金属硫族化合物。过渡金属羟基氧化物(MOOH)作为一种二维纳米材料，具有优异的光吸收性能、高比表面积和良好的环境相容性，受到了广泛的关注。过渡金属羟基氧化物纳米材料(MOOH)具有氧化能力，可以通过还原物种转化为M
2+
。当MOOH遇到还原性物种时，纳米材料被分解，从而恢复探针的荧光。这些特性使MOOH纳米材料成为一种很有前途的荧光基团纳米猝灭剂。
[0005]但是专利技术人研究发现，现在过渡金属羟基氧化物检测限较大，检测灵敏度低，同时需要其他贵金属催化剂辅助使用，造价高。此外过渡金属羟基氧化物制成的荧光探针稳定性较差。

技术实现思路

[0006]基于上述现有技术的不足，本专利技术提供一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用，具有较宽紫外吸收的FeOOH材料，可以通过FRET作用使CPNsPBOC
‑
COOH产生荧光猝灭。在BChE和乙酰胆碱酯酶(ATCh)存在下，两者产生的酶解产物(一种硫代胆碱)能有效地降解FeOOH，使CPNsPBOC
‑
COOH的荧光恢复。经试验证明，CPNsPBOC
‑
COOH@FeOOH体系具有理想地荧光猝灭效率。FeOOH的大表面积和薄层结构为硫代胆碱的反应提供了丰
富的接触面积，最终会提高探针的灵敏度和选择性，检测范围较宽，为0.02～2.6μg/mL，LOD较低，为3.5ng/mL。
[0007]具体地，本专利技术是通过如下所述的技术方案实现的：
[0008]本专利技术第一方面，提供一种轭聚合物纳米粒子复合荧光探针，包括羧基化的共轭聚合物纳米粒子CPNs
PBOC
‑
COOH和过渡金属羟基氧化物。
[0009]本专利技术第二方面，提供一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针的制备方法，将CPNs
PBOC
‑
COOH与过渡金属羟基氧化物在室温下混合，避光反应，即得。
[0010]本专利技术第三方面，提供一种丁酰胆碱酶检测方法，包括：
[0011]将CPNs
PBOC
‑
COOH和过渡金属羟基氧化物在室温下孵育处理；
[0012]再加入丁酰胆碱酶和乙酰胆碱酯酶继续孵育；
[0013]对孵育处理后的溶液进行荧光定量检测。
[0014]本专利技术第四方面，提供一种共轭聚合物纳米粒子荧光探针在检测丁酰胆碱酶中的应用。
[0015]本专利技术一个或多个技术方案具有以下有益效果：
[0016](1)本专利技术提供了一种结构新颖的基于共轭聚合物纳米粒子和过渡金属羟基氧化物的荧光探针，可作为检测丁酰胆碱酶的荧光探针进行应用；该探针具有结构稳定性和良好的光学特性。
[0017](2)本专利技术中的荧光探针能够实现对丁酰胆碱酶的检测，并且进行了多种干扰物质的测试。该探针具有非常好的选择性和灵敏性，因此特别适于对丁酰胆碱酶的检测，检测范围较宽，为0.02～2.6μg/mL，LOD较低，为3.5ng/mL。因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
[0018]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。以下，结合附图来详细说明本专利技术的实施方案，其中：
[0019]图1为本专利技术实施例4FeOOH复合的聚合物纳米粒子的制备工艺及机理图；
[0020]图2为本专利技术实施例4CPNs
PBOC
‑
COOH@FeOOH加入不同浓度丁酰胆碱酶溶液(0～30μg/mL，最上面曲线为0μg/mL，最下面曲线为30μg/mL，中间每条均匀增加1.5μg/mL)后的荧光强度图；
[0021]图3为本专利技术实施例4CPNs
PBOC
‑
COOH溶液(1μg/mL)中添加不同浓度的FeOOH(最上面曲线为0μg/mL，最下面曲线为130μg/mL，中间均匀增加10μg/mL)的荧光光谱图；
[0022]图4为本专利技术实施例4CPNs
PBOC
‑
COOH溶液(1μg/mL)中添加不同浓度的FeOOH在550nm处的荧光强度曲线；
[0023]图5为本专利技术实施例5CPNs
PBOC
‑
COOH@FeOOH加入不同浓度丁酰胆碱酶溶液(0～30μg/mL)后的荧光强度变化趋势图；
[0024]图6为本专利技术实施例4共轭聚合物纳米粒子荧光探针对检测丁酰胆碱酶的选择性测试图。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0026]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0027]专利技术人研究发现，现在过渡金属羟基氧化物检测限较大，检测灵敏度低，同时需要其他贵金属催化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针，其特征在于，包括羧基化的共轭聚合物纳米粒子CPNs
PBOC
‑
COOH和过渡金属羟基氧化物。2.根据权利要求1所述的共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针，其特征在于，所述过渡金属羟基氧化物选自CoOOH、NiOOH和FeOOH中的至少一种。3.权利要求1或2所述的共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针的制备方法，其特征在于，将CPNs
PBOC
‑
COOH与过渡金属羟基氧化物在室温下混合，避光反应，即得；优选地，所述PBOC结构式为所述n为大于0的自然数，优选为大于45的自然数，进一步优选为50，所述PBOC结构单元分子量为689。4.权利要求1或2所述的共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针的制备方法，其特征在于，所述CPNs
PBOC
‑
COOH与过渡金属羟基氧化物的质量比为1:0.1
‑
130；优选地，所述避光反应时间为10
‑
20min，优选为15min。5.权利要求1或2所述的共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针的制备方法，其特征在于，所述羧基化的共轭聚合物纳米粒子CPNs
PBOC
‑
COOH的制备方法包括：将共轭聚合物PBOC与PSMA混合、超声形成均相溶液，加入超纯水超声、蒸发、浓缩、过滤获得上清液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张献，付雯，潘利，王秋波，卢倩，姚金水，马瑞健，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：