模板-引物核酸分子、聚合酶活性测定方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种聚合酶活性测定方法及试剂盒。本发明专利技术所提供的模板

【技术实现步骤摘要】
模板
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引物核酸分子、聚合酶活性测定方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种聚合酶活性测定方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]聚合酶又称多聚酶，是专门生物催化合成脱氧核糖核酸和核糖核酸的一类酶的统称。目前，市场上常见的聚合酶活性测定方法主要是放射性同位素标记结合凝胶电泳，但是同位素存在辐射，对人体有害，实验过程中所有的试剂、耗材等均需专门处理，否则会污染环境。
[0003]因此，如何建立一种不依赖同位素标记的聚合酶活性测定方法具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术的目的之一在于提供一种模板
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引物核酸分子，所述模板
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引物核酸分子包括模板链和引物链；所述模板链包括与引物链配对的模板配对区和单链区，所述单链区为多个重复单元组成的单链核苷酸序列，所述重复单元是长度为1～10bp的单链核苷酸序列，所述引物链的碱基序列为gcagagag，具体如SEQ ID NO:1所示。
[0005]作为本专利技术的一种优选地实施方式，所述单链区的长度为30～70bp。
[0006]作为本专利技术的一种优选地实施方式，所述重复单元为ac或cgt或gag或aagc或ccat或aagga或cgaac或tctcgc或cctctt或ctacgcaa或tagaaaaa或gccactgtat或atccttatct。
[0007]本专利技术的目的之二在于提供一种聚合酶活性测定方法，包括以下步骤：/>[0008](1)制备反应体系进行聚合酶的延伸反应，所述反应体系包括模板
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引物核酸分子、待测聚合酶、底物和缓冲液；
[0009](2)终止反应并加入双链DNA染料；
[0010](3)检测反应体系中反应产物结合双链DNA染料产生的第一荧光强度；
[0011](4)根据第二荧光强度与参照品的量的标准曲线，将第一荧光强度换算呈对应的参照品的量，以所述参照品的量表征所述待测聚合酶活性；
[0012]其中，所述参照品为由两条单链核苷酸序列完全互补配对形成的双链核酸分子，第二荧光强度为所述参照品结合双链DNA染料产生的荧光强度。
[0013]作为本专利技术的一种优选地实施方式，所述聚合酶延伸反应开始前还包括热启动步骤。
[0014]作为本专利技术的一种优选地实施方式，所述双链DNA染料为Sybr Green I或PicoGreen。
[0015]本专利技术的目的之三在于提供一种检测聚合酶活性的试剂盒，所述试剂盒包括上述的模板
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引物核酸分子。
[0016]本专利技术所提供的模板
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引物核酸分子，能够用于聚合酶活性的测定，且其能够避免单链区形成二级结构从而导致活性测定不准确的问题，本专利技术所提供的聚合酶活性检测方法，无需涉及到同位素标记等，安全无毒，成本低。
具体实施方式
[0017]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0018]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，但不止用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0019]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0020]实施例1
[0021]本实施例提供一种模板
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引物核酸分子，模板
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引物核酸分子包括模板链和引物链；模板链包括与引物链配对的模板配对区和单链区，单链区为多个重复单元组成的单链核苷酸序列，重复单元的长度为1～10bp的单链核苷酸序列，引物链条的碱基序列为gcagagag，具体如SEQ ID NO:1所示。
[0022]其中重复单元可以为ac或cgt或gag或aagc或ccat或aagga或cgaac或tctcgc或cctctt或ctacgcaa或tagaaaaa或gccactgtat或atccttatct。
[0023]更具体地为：
[0024]2bp重复序列为：
[0025]acacacacacacacacacacacacacacctctctgc，如SEQ ID NO:2所示；
[0026]3bp重复序列为：
[0027]cgtcgtcgtcgtcgtcgtcgtcgtcgtcgtcgtcgtctctctgc，如SEQ ID NO:3所示；或gaggaggaggaggaggaggaggaggaggaggagctctctgc，如SEQ ID NO:4所示。
[0028]4bp重复序列为：
[0029]aagcaagcaagcaagcaagcaagcaagcaagcaagcaagcaagcctctctgc,如SEQ ID NO:5所示；或ccatccatccatccatccatccatccatccatccatccatccatccatctctctgc，如SEQ ID NO:6所示。
[0030]5bp重复序列为：
[0031]aaggaaaggaaaggaaaggaaaggaaaggaaaggaaaggactctctgc，如SEQ ID NO:7所示；或cgaaccgaaccgaaccgaaccgaaccgaaccgaaccgaacctctctgc，如SEQ ID NO:8所示。
[0032]6bp重复序列为：
[0033]tctcgctctcgctctcgctctcgctctcgctctcgcctctctgc，如SEQ ID NO:9所示；或cctcttcctcttcctcttcctcttcctcttcctcttctctctgc，如SEQ ID NO:10所示。
[0034]8bp重复序列为：
[0035]ctacgcaactacgcaactacgcaactacgcaactacgcaactacgcaactctctgc，如SEQ ID NO:11所示；或tagaaaaatagaaaaatagaaaaatagaaaaatagaaaaatagaaaaactctctgc，如SEQ ID NO:12所示。
[0036]10bp重复序列为
[0037]gccactgtatgccactgtatgccactgtatgccactgtatgccactgtatgccactgtatctctctgc，如SEQ ID NO:13所示；或atccttatctatccttatctatccttatctatccttatctatccttatctatcct
tatctctctctgc，如SEQ ID NO:14所示。
[0038]上述模板
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引物核酸分子由武汉金开瑞引物生物工程有限公司合成。
[0039]实施例2<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种模板
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引物核酸分子，其特征在于，所述模板
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引物核酸分子包括模板链和引物链；所述模板链包括与引物链配对的模板配对区和单链区，所述单链区为多个重复单元组成的单链核苷酸序列，所述重复单元是长度为1～10bp的单链核苷酸序列，所述引物链的碱基序列为gcagagag，具体如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的模板
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引物核酸分子，其特征在于，所述单链区的长度为30～70bp。3.根据权利要求1所述的模板
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引物核酸分子，其特征在于，所述重复单元为ac或cgt或gag或aagc或ccat或aagga或cgaac或tctcgc或cctctt或ctacgcaa或tagaaaaa或gccactgtat或atccttatct。4.一种聚合酶活性测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备反应体系进...

【专利技术属性】
技术研发人员：李旻，齐利芬，童灿，张晓英，黄思强，李乔乔，骆显，
申请(专利权)人：武汉康昕瑞基因健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：