一种蛋白质免疫印迹膜再生液制造技术

本发明专利技术提出了一种蛋白质免疫印迹膜再生液，包括洗脱液和表面活性剂，所述洗脱液包括硅酸钠、酒石酸、植酸和甘氨酸，所述表面活性剂包括NP40、CHAPS和吐温20。本发明专利技术的再生液不含有蛋白质变性剂，在不损伤蛋白的基础上，剥离一抗和二抗，且多次使用后，洗脱率仍然很高，误差小，5次洗脱后，仍然能将膜上蛋白结合的抗体洗脱干净。洗脱干净。洗脱干净。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质免疫印迹膜再生液


[0001]本专利技术涉及抗体检测
，尤其涉及一种蛋白质免疫印迹膜再生液。

技术介绍

[0002]蛋白质免疫印迹，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样本中的某种蛋白质的方法。在通常的蛋白印迹检测过程中，承载了蛋白的印迹膜一次只能做一次免疫印迹检测，无法在同一张膜上同时再对内参蛋白进行检测，如果要进行内参蛋白的检测，只能再进行蛋白电泳转膜等同样的一系列蛋白免疫检测操作，不仅费时费事，还会导致重复上样及操作引起的印迹膜上蛋白状态的改变。现有的再生液中含有蛋白质变性剂，影响抗体或抗原分子，多次使用后洗脱率变低，误差大。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术提出了一种无毒、不损伤蛋白质、高效洗脱的蛋白质免疫印迹膜再生液。
[0004]本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供了一种蛋白质免疫印迹膜再生液，其特征在于，包括洗脱液、表面活性剂和纯化水。
[0005]在以上技术方案的基础上，优选的，所述再生液包括3％
‑
8％洗脱液、2％
‑
5％表面活性剂，余量为纯化水。
[0006]在以上技术方案的基础上，优选的，所述洗脱液包括硅酸钠、酒石酸、植酸和甘氨酸。
[0007]在以上技术方案的基础上，优选的，所述硅酸钠：酒石酸：植酸：甘氨酸的质量比为硅酸钠(4
‑
10)：(1
‑
5)：(3
‑
7)：(4
‑
8)。
[0008]在以上技术方案的基础上，优选的，所述酒石酸为L
‑
酒石酸。
[0009]在以上技术方案的基础上，优选的，所述表面活性剂包括NP40、CHAPS和吐温20。
[0010]在以上技术方案的基础上，优选的，所述NP40：CHAPS：吐温20的质量比为(1
‑
3)：(2
‑
4)：(1
‑
5)。
[0011]在以上技术方案的基础上，优选的，所述再生液的pH为3
‑
7。
[0012]在以上技术方案的基础上，优选的，一种蛋白质免疫印迹膜再生液的使用方法，包括如下步骤：
[0013]S1，用TBS
‑
T溶液清洗膜3次，每次5
‑
10min，清洗结束后将膜浸入上述再生液中，在20
‑
30℃条件下震荡孵育10
‑
30min；
[0014]S2，孵育完成后，取出膜，用TBS
‑
T溶液清洗膜3次，每次3
‑
5min，即可得到去除抗体的膜。
[0015]在以上技术方案的基础上，优选的，所述TBS
‑
T溶液包括30
‑
100mmol/L Tris
‑
HCl、50
‑
100mmol/L NaCl、30
‑
50mmol/L KCl和体积分数为0.05
‑
0.1％的吐温20，所述TBS
‑
T溶液的pH值为7
‑
8。
[0016]在以上技术方案的基础上，优选的，一种蛋白质免疫印迹膜再生液，所述再生液适用于去除以PVDF膜或NC膜为蛋白质固相载体的蛋白质免疫印迹膜上结合的一抗和二抗。
[0017]本专利技术的一种蛋白质免疫印迹膜再生液相对于现有技术具有以下有益效果：
[0018](1)本专利技术的再生液可实现一份样品一次转膜后多次印迹，可对同一膜进行5次以上的免疫印迹检测。
[0019](2)本专利技术的再生液不含有蛋白质变性剂，在不损伤蛋白的基础上。剥离一抗和二抗，且多次使用后，洗脱率仍然很高，误差小，5次洗脱后，仍然能将膜上蛋白结合的抗体洗脱。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为本专利技术蛋白免疫印迹实验中的抗体孵育后胶片显影图；
[0022]图2为本专利技术实施例一的免疫印迹膜再生液对抗体的洗脱效果图；
[0023]图3为本专利技术实施例二的免疫印迹膜再生液对抗体的洗脱效果图；
[0024]图4为本专利技术实施例三的免疫印迹膜再生液对抗体的洗脱效果图；
[0025]图5为本专利技术实施例四的免疫印迹膜再生液对抗体的洗脱效果图；
[0026]图6为本专利技术实施例五的免疫印迹膜再生液对抗体的洗脱效果图。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施方式，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实验试剂均为实验室常规原料及试剂。
[0029]实施例一
[0030]一种蛋白质免疫印迹膜再生液包括3％洗脱液、2％表面活性剂，余量为纯化水。
[0031]洗脱液包括硅酸钠、酒石酸、植酸和甘氨酸；其中硅酸钠：L
‑
酒石酸：植酸：甘氨酸的质量比为硅酸钠4：1：3：4。
[0032]表面活性剂包括NP40、CHAPS和吐温20；其中NP40：CHAPS：吐温20的质量比为1：2：1。
[0033]再生液的pH为3。
[0034]实施例二
[0035]一种蛋白质免疫印迹膜再生液包括8％洗脱液、5％表面活性剂，余量为纯化水。
[0036]洗脱液包括硅酸钠、酒石酸、植酸和甘氨酸；其中硅酸钠：L
‑
酒石酸：植酸：甘氨酸的质量比为硅酸钠10：5：7：8。
[0037]表面活性剂包括NP40、CHAPS和吐温20；其中NP40：CHAPS：吐温20的质量比为3：4：
5。
[0038]所述再生液的pH为7。
[0039]实施例三
[0040]一种蛋白质免疫印迹膜再生液包括5％洗脱液、3％表面活性剂，余量为纯化水。
[0041]洗脱液包括硅酸钠、酒石酸、植酸和甘氨酸；其中硅酸钠：L
‑
酒石酸：植酸：甘氨酸的质量比为硅酸钠5：4：6：7。
[0042]表面活性剂包括NP40、CHAPS和吐温20；其中NP40：CHAPS：吐温20的质量比为2：2：3。
[0043]所述再生液的pH为4。
[0044]实施例四
[0045]一种蛋白质免疫印迹膜再生液包括3％洗脱液、4％表面活性剂，余量为纯化水。
[0046]洗脱液包括硅酸钠、酒石酸、植酸和甘氨酸；其中硅酸钠：L
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质免疫印迹膜再生液，其特征在于，包括洗脱液、表面活性剂和纯化水，按照质量百分比计算，所述再生液包括3％
‑
8％洗脱液、2％
‑
5％表面活性剂，余量为纯化水。2.如权利要求1所述的一种蛋白质免疫印迹膜再生液，其特征在于，所述洗脱液包括硅酸钠、酒石酸、植酸和甘氨酸，所述硅酸钠：酒石酸：植酸：甘氨酸的质量比为硅酸钠(4
‑
10)：(1
‑
5)：(3
‑
7)：(4
‑
8)。3.如权利要求1所述的一种蛋白质免疫印迹膜再生液，其特征在于，所述酒石酸为L
‑
酒石酸。4.如权利要求1所述的一种蛋白质免疫印迹膜再生液，其特征在于，所述表面活性剂包括NP40、CHAPS和吐温20，所述NP40：CHAPS：吐温20的质量比为(1
‑
3)：(2
‑
4)：(1
‑
5)。5.如权利要求1所述的一种蛋白质免疫印迹膜再生液，其特征在于，所述再生液的pH为3
‑
7。6.一种蛋白质免疫印迹膜再生液的使用方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：金小峰，
申请(专利权)人：武汉百齐生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：