一种测量补体蛋白C3表达量的方法技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及测量补体蛋白C3表达量的方法，具体涉及血清中补体蛋白C3的MRM/SRM靶向定量方法及其应用。该方法使用质谱检测和/或定量补体蛋白C3的肽段片段的含量，通过步骤：血清蛋白质的前处理，包括血清样品的收集，还原烷基化与酶解；MRM/SRM方法开发，包括C3蛋白标志性肽段的设计，同位素内标肽的合成，监测母子离子对的筛选以及LC-MRM条件的优化；临床血清样本中C3的MRM/SRM检测与数据分析。本方法可用于辅助胃癌的诊断、检测、病程监测以及预后评估。病程监测以及预后评估。

【技术实现步骤摘要】
JE.Complement C3 Is Activated in Human AD Brain and Is Required for Neurodegeneration in Mouse Models of Amyloidosis and Tauopathy.Cell Rep.2019Aug 20；28(8):2111-2123.e6.
[0011]7)Zhu D,Wang J,Ren L,Li Y,Xu B,Wei Y,Zhong Y,Yu X,Zhai S,Xu J,Qin X.Serum proteomic profiling for the early diagnosis of colorectal cancer.J Cell Biochem.2013 Feb；114(2):448-55.
[0012]8)Yuan K,Ye J,Liu Z,Ren Y,He W,Xu J,He Y,Yuan Y.Complement C3 overexpression activates JAK2/STAT3 pathway and correlates with gastric cancer progression.J Exp Clin Cancer Res.2020 Jan 13；39(1):9.
[0013]9)Ye J,Ren Y,Chen J,Song W,Chen C,Cai S,Tan M,Yuan Y,He Y.Prognostic Significance of Preoperative and Postoperative Complement C3 Depletion in Gastric Cancer:A Three-Year Survival Investigation.Biomed Res Int.2017；2017:2161840.。

技术实现思路

[0014]本专利技术的目的是提供一种测量血清中补体蛋白C3表达量的方法。
[0015]针对上述技术问题，本专利技术提供了一种血液中补体蛋白C3的定量检测方法，该方法是基于对补体蛋白C3标志性肽段的质谱靶向定量检测，又叫质谱多反应检测/选择性反应检测(Multiple Reaction Monitoring/Selected Reaction Monitoring，MRM/SRM)。本专利技术的针对补体蛋白C3的MRM/SRM检测不仅可应用于血液中补体蛋白C3的定量检测，也可应用于其他临床以及科研模型样本例如血液，脑脊液，组织切片，培养的细胞，组织中补体蛋白C3的定量检测。
[0016]本专利技术提供了一种测量血清中补体蛋白C3表达量的方法，包括使用质谱检测和/或定量来自所述血清中蛋白质消化物的补体蛋白C3的肽段片段的含量，其中所述水平是相对水平或绝对水平。
[0017]所述的蛋白质消化物包括蛋白酶消化物和胰蛋白酶消化物。
[0018]其中，所述质谱包括三重四级杆质谱，Q-TOF质谱，串联离子阱质谱，MALDI-TOF质谱，QE-Orbitrap质谱。
[0019]其中，使用的质谱模式是选择反应检测(Selected Reaction Monitoring, SRM)或多反应检测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)。
[0020]其中，所述补体蛋白C3的肽段片段是指补体蛋白C3标志性肽段VLLDGVQNPR(SEQ ID NO 1)以及合成的序列完全一致，但是被同位素标记了的重标内标肽。
[0021]所述重标内标肽包括含有一种或多种同位素标记的一个或多个氨基酸残基的序列与补体蛋白C3标志性肽段VLLDGVQNPR完全一致的合成多肽。
[0022]其中,所述生物样品包括血液样品，血液样品，血清/血浆/血液样品，脑脊液样品，唾液样品，流泪样品，腹水样品，淋巴液样品，肺积液样品，细胞或实体组织样品。
[0023]其中,所述实体组织样品包括临床/基础研究中取得的新鲜或福尔马林固定的各种人体组织，例如多种上皮组织，多种脏器组织，多种神经组织等。
[0024]其中,所述蛋白质补体蛋白C3的质谱检测/定量是通过MRM/SRM检测样品中补体蛋
白C3的标志性肽段VLLDGVQNPR的MRM/SRM特征峰面积以及掺入样品的浓度已知的重标同位素内标肽VLLDGVQNPR的MRM/SRM特征峰面积性，根据两者峰面积的比例关系，计算出样品中补体蛋白C3的相对/绝对含量。
[0025]所述的标志性肽段VLLDGVQNPR的分子量为1110.27，在溶液中主要呈现二价态。合成的同位素内标肽VLLDGVQNPR的二价肽质荷比为560.82，在溶液中主要呈现二价态，与内源标志性肽段的分子量相差8Da。
[0026]所述对补体蛋白C3的代表性肽段VLLDGVQNPR的MRM/SRM检测，特征峰面积计算是通过检测代表性肽段VLLDGVQNPR母离子与其产生的特定子离子碎片组成的母子离子对组合(Transition)实现的。对重标同位素内标肽VLLDGVQNPR的MRM/SRM检测，特征峰面积计算是通过检测重标同位素内标肽VLLDGVQNPR母离子与母离子产生的特定子离子碎片组成的母子离子对组合(Transition)实现的。
[0027]所述标志性肽段VLLDGVQNPR的母子离子对组合(Transition)为555.82/898.47，555.82/785.39，555.82/514.27；重标同位素内标肽VLLDGVQNPR的母子离子对组合(Transition)为560.82/908.48，560.82/795.40，560.82/524.80。
[0028]其中，所述的补体蛋白C3的MRM/SRM靶向质谱检测的优化后的参数为：去簇电压(Declustering Potential)设为Skyline预测值，Q1/Q3四级杆设为0.7FWHM，喷雾电压2500V，根据喷雾情况而定，帘气25p.s.i，pause设为5ms，dwell time设为50ms。
[0029]其中，所述的血液中补体蛋白C3的MRM/SRM靶向检测/定量可用于胃癌的检测，诊断，病程监测以及预后评估。
[0030]其中，所述生物样品中蛋白质补体蛋白C3的MRM/SRM靶向检测/定量用作胃癌的诊断，病程检测，预后的辅助参考指标。
[0031]本专利技术所述的测定测量基于对补体蛋白C3的标志性肽段的靶向检测。可进行标志性肽段/补体蛋白C3的绝对定量以及补体蛋白C3在不用样本中的相对/定量。
[0032]本专利技术首先根据补体蛋白C3的蛋白质序列，依据一定标准，筛选出一条补体蛋白C3的标志性肽段。然后合成一段序列与该标志性肽段序列完全一样的重标同位素标记的内标肽。该内标肽含有一种或多种同位素标记的一个或多个氨基酸残基。
[0033]本专利技术对补体蛋白C3的MRM/SRM检测依赖于串联质谱分析技术。通过串联质谱，靶向检测补体蛋白C3的标志性肽段以标志性肽段碎裂产生的离子碎片。通过检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测量补体蛋白C3表达量的方法，其特征在于，包括使用质谱检测和/或定量补体蛋白C3的肽段片段的含量；所述的含量是绝对含量或者相对含量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的质谱包括三重四级杆质谱，Q-TOF质谱，串联离子阱质谱，MALDI-TOF质谱或者QE-Orbitrap质谱。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的质谱的模式是选择反应检测或多反应检测。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的补体蛋白C3的肽段片段是序列如SEQ ID NO 1所示的补体蛋白C3标志性肽段，以及被同位素标记、序列相同的重标内标肽。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的重标内标肽是一个或多个氨基酸残基被一种或多种同位素标记的、序列与SEQ ID NO 1相同的多肽。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法检测的生物样品包括血液样品，血液样品，血清/血浆/血液样品，脑脊液样品，唾液样品，流泪样品，腹水样品，淋巴液样品，肺积液样品，细胞或实体组织样品。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的实体组织样品包括临床/基础研究中取得的新鲜或福尔马林固定的各种人体组织。8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的实体组织样品是多种上皮组织，多种脏器组织或者多种神经组织。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用该方法检测的样本中包括蛋白质消化物。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用该方法检测的样本中含有蛋白酶消化物或者胰蛋白酶消化物。11.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：血清蛋白质的前处理；MRM/SRM方法开发；和/或样本中C3的MRM/SRM检测与数据分析。12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的血清蛋白质的前处理包括血清样品的收集和/或还原烷基化与酶解。13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的MRM/SRM方法开发包括C3蛋白标志性肽段的设计，同位素内标肽的合成，监测母子离子对的筛选和/或LC-MRM条件的优化。14.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟凡，张扬，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：