双特异性四价抗体及其制造和使用方法技术

一种双特异性四价抗体，其包含具有一对重链和一对轻链的IgG，和连接到重链或轻链的C或N端的两个scFv组分。所述双特异性四价抗体可具有对EGFR家族中两个不同成员的结合特异性。具有对EGFR家族中两个不同成员的结合特异性。具有对EGFR家族中两个不同成员的结合特异性。

【技术实现步骤摘要】
双特异性四价抗体及其制造和使用方法
[0001]本申请是2015年12月19日提交的中国专利技术专利申请(申请号：201580036408.7；专利技术名称：双特异性四价抗体及其制造和使用方法)的分案申请。
[0002]相关专利申请的交叉参考
[0003]本申请要求2014年12月22号提交的美国临时申请第62095348号，名称为“双特异性抗体”的优先权，该文件全部内容在此引入作为参考。
[0004]序列表
[0005]与本申请相关联的序列表是以文本格式代替纸件副本的形式来提供，并且以引用方式并入本说明书中。包含所述序列表的文本文件名是序列表_ST25_0003PCT2.txt。所述文本文件大约227KB，在2015年12月18号创建，并经由EFS
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Web进行电子提交。


[0006]本公开总体涉及抗体治疗试剂
，尤其涉及针对EGFR家族两个不同成员的双特异性四价抗体。

技术介绍

[0007]ErbB/HER受体家族成员例如EGFR、HER2、HER3、HER4的过量表达和/或失调，已经表明在癌症的肿瘤发生中起重要作用。EGFR或者HER2的突变和扩增产生异常生长信号，其激活促成肿瘤发生的下游信号途径。针对EGFR和HER2的治疗性抗体和小分子抑制剂已被批准用于癌症的治疗(Arteaga等人,Nature Reviews Clinical Oncology 9 16
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32,January 2012)。针对EGFR家族成员，如EGFR和HER2的单克隆抗体已经在结肠癌(Price等人.,The Lancet Oncology 15(6),Pages 569
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579,May 2014)、头颈部鳞状细胞瘤(Cohen,Cancer Treatment Reviews 40(2014)567
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577)、乳癌和胃癌(Arteaga等人,Nature Reviews Clinical Oncology 9 16
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32,January 2012)中表现出良好的临床反应。几种治疗性抗EGFR抗体，包括西妥昔单抗、帕尼单抗和尼妥珠单抗是已获准用于几种癌症包括转移性结肠直肠癌、头颈部鳞状细胞癌和神经胶质瘤的疗法(Price和Cohen,Curr Treat Options Oncol.2012Mar；13(l)：35
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46；Bode等人,Expert Opin Biol Ther.2012Dec；12(12):1649
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59)。令人遗憾的是最初对这些治疗剂反应的许多肿瘤由于对药剂的获得性抗性而最终发生进展(Jackman等人.J Clin Oncol 2010；8:357
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60)。因此仍然存在着对更好的癌症治疗方法需求。

技术实现思路

[0008]本公开提供了双特异性四价抗体。双特异性四价抗体可以包括具有两条重链和两条轻链的免疫球蛋白G(IgG)部分，以及与重链或轻链的C或N末端共价连接的两个scFv部分。IgG部分可具有与EGFR家族第一成员结合的特异性。scFv部分可具有与EGFR家族第二成员结合的特异性。IgG部分和两个scFv部分共价连接以作为双特异性四价抗体起作用。为使本公开的目的和有益效果更加清楚，下面将结合相应的附图详细阐述优选实施例。
附图说明
[0009]现在参考附图详细描述本公开的优选实施例，其中类似的参考标号表示类似的元件。
[0010]图1是示出了实例二价单特异性免疫球蛋白G(IgG)抗体的结构域结构的图。
[0011]图2是示出了根据本专利技术的一个实施例，包含IgG部分和2个scFv部分的实例四价双特异性抗体的结构域的图。
[0012]图3示出了实例四价双特异性抗体1X1、1X2、1X3、1X4、1X4.2、1X5和1X6的结构域结构图。
[0013]图4示出了SI
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1X4和SI
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1X4.2之间的VH结构域序列比较，示出了5个氨基酸差异。
[0014]图5和6是示出了利用BLI的单体EGFR结合的图。
[0015]图7、8和9是示出了双特异性ELI结合的图。
[0016]图10是示出了二聚EGFR ELISA的图。
[0017]图11示出了SI
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1C5.2和SI
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1X4.2与单体EGFR通过Octet分析的结合动力学。
[0018]图12示出了SI
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1X抗体与A431细胞结合的流式细胞仪分析。
[0019]图13示出了SI
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1X抗体与BxPC3细胞结合的流式细胞仪分析。
[0020]图14示出了SI
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1X4.2抗体与Fadu细胞结合的流式细胞仪分析。
[0021]图15示出了SI
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1X4.2抗体与A431细胞结合的流式细胞仪分析。
[0022]图16示出了SI
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1X抗体对A431细胞增殖的作用。
[0023]图17示出了SI
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1X抗体对A431细胞增殖的作用。
[0024]图18示出了SI
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1X抗体对BxPC3细胞增殖的作用。
[0025]图19示出了SI
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1X抗体对BxPC3细胞增殖的作用。
[0026]图20示出了SI
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1X4.2抗体对Fadu细胞增殖的作用。
[0027]图21示出了SI
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1X4.2抗体对A431细胞增殖的作用。
[0028]图22示出了SI
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1X抗体对Fadu细胞的ADCC活性。
[0029]图23示出了SI
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1X抗体对NCI
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H1975细胞的ADCC活性。
[0030]图24示出了SI
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1X抗体的热熔性以展示其热稳定性。
[0031]图25示出SI
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1X抗体在七天时间内的血浆稳定性。
[0032]图26是示出经EGFR包被的ELISA用于大鼠PK研究的结果图。
[0033]图27是示出经HER3包被的ELISA用于大鼠PK研究的结果图。
[0034]图28是示出夹心ELISA用于大鼠PK研究的结果图。
[0035]图29是示出小鼠异种移植研究中平均肿瘤体积对天数的曲线图
[0036]图30是示出小鼠异种移植研究中相对体重对周数的曲线图。
具体实施方式
[0037]本公开提供了较目前已知的抗EGFR抗体，具有更优异治疗特性或者疗效的双特异性四价抗体。在一个实施例中，抗体靶向EGFR家族的两个成员，包括但不限于EGFR和HER3。双特异性四价抗体可同时抑制EGFR和HER3介导的信号传导，因而克服本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID NO 71的氨基酸序列。18.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体，其中所述IgG部分具有对HER3的结合特异性，并且所述单链Fv结构域具有对EGFR的结合特异性；其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 76的氨基酸序列，并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 71的氨基酸序列。19.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体，其中所述抗体抑制癌细胞生长。20.一种编码根据权利要求1所述的抗体的分离的核酸。21.一种表达载体，其包含根据权利要求20所述的分离的核酸。22.根据权利要求21所述的表达载体，其中所述载体可在细胞中表达。23.一种宿主细胞，其包含根据权利要求20所述的核酸。24.一种宿主细胞，其包含根据权利要求23所述的表达载体。25.根据权利要求24所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞。26.一种产生抗体的方法，其包含培养根据权利要求23
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25中任一项所述的宿主细胞，从而产生所述抗体。27.一种包含根据权利要求1所述的抗体和细胞毒性剂的免疫偶联物。28.一种包含根据权利要求1所述的双特异性四价抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。29.根据权利要求28所述的药物组合物，其进一步包含放射性同位素、放射性核素、毒素、治疗剂、化学治疗剂或其组合。30.一种药物组合物，其包含根据权利要求29所述的免疫偶联物和药学上可接受的载剂。31.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体在制备治疗受试者癌症的药物中的用途。32.根据权利要求31所述的用途，其中所述癌症包含表达EGFR家族...

【专利技术属性】
技术研发人员：高泽人，菲尔，
申请(专利权)人：四川百利药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：