下调RBMS1表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及下调RBMS1表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用，属于诊断试剂盒技术领域。本发明专利技术提供了下调RBMS1表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。本发明专利技术所述应用有助于实现治疗肺癌的药物的制备。于实现治疗肺癌的药物的制备。于实现治疗肺癌的药物的制备。

【技术实现步骤摘要】
shN2引物对包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的RBMS1 shN2
‑
F和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的RBMS1 shN2
‑
R。
[0015]本专利技术提供了下调RBMS1表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。下调RBMS1表达的试剂能够用于制备治疗肺癌的药物、下调RBMS1表达的试剂能够用于制备抑制肺癌细胞生长和/或增殖的药物、抑制肺癌成瘤能力的药物、抑制肺癌转移和/或侵袭的药物以及抑制与癌症转移相关信号通路的药物中的应用，此外，检测RBMS1表达量的试剂能够用于检测肺癌早期诊断的检测试剂盒，有助于实现临床上对肺癌的早期发现和预后的预测。试验结果表明，本专利技术利用蛋白质免疫印迹分析，相比肺癌患者的正常组织，RBMS1在肺癌组织中高表达，组织芯片免疫组化发现RBMS1肺癌病人组织中高表达，且高表达RBMS1的肺癌患者总生存期更短(p<0.01)。利用蛋白质免疫印迹分析，与正常肺成纤维细胞相比，RBMS1肺癌细胞中呈高表达。构建稳定低表达RBMS1人肺癌细胞株，通过生长曲线和平板克隆实验结果表明敲低RBMS1能够明显抑制肺癌细胞的生长和克隆形成能力(增殖)。利用Dox诱导RBMS1敲降的稳转细胞系，通过裸鼠皮下移植瘤实验结果表明敲低RBMS1能抑制裸鼠成瘤能力。利用稳定低表达RBMS1人肺癌细胞株，通过transwell实验结果表明敲低RBMS1抑制H1299肺癌细胞的转移和侵袭能力。探究具体机制发现敲低RBMS1能显著抑制铁死亡相关因子SLC7A11的表达，进一步通过GSH
‑
Glo Glutathione Assay试剂盒发现敲低RBMS1下调肺癌细胞内谷胱甘肽(GSH)水平，而升高肺癌细胞内脂质过氧化的水平，进一步证实下调RBMS1促进erastin诱导细胞铁死亡。在敲低RBMS1的细胞中回复SLC7A11的表达可以回复细胞的生长及平板克隆形成能力以及裸鼠皮下移植瘤生长。
附图说明
[0016]图1为本专利技术提供的RBMS1在肺癌患者组织中的表达情况图；其中，A为western blot检测RBMS1在肺癌患者正常组织(N)与癌组织(T)中的表达情况图；B为应用免疫组织化学方法检测RBMS1在人肺癌组织(NSCLC)及邻近正常组织(Normal)中的表达情况的代表图；C为统计RBMS1在人肺癌组织(NSCLC)及邻近正常组织(Normal)免疫组化结果；D为RBMS1表达水平与肺癌患者总生存期的相关性结果图；
[0017]图2为本专利技术提供的通过western blot检测RBMS1在不同细胞系中的蛋白表达量结果图；
[0018]图3为本专利技术提供的利用pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1/2敲低RBMS1抑制H1299肺癌细胞增殖能力结果图；其中，A为通过western blot检测利用pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1/2敲低H1299细胞RBMS1(RBMS1 shN1，RBMS1 shN2)的效果验证，pLKO.1空载细胞作为对照(Empty Vector)，GAPDH作为内参；B为敲低RBMS1对细胞生长曲线的影响；C为敲低RBMS1对H1299肺癌细胞平板克隆形成能力的影响；
[0019]图4为本专利技术提供的利用pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1/2敲低RBMS1对A549肺癌细胞增殖能力的影响；其中，A为通过western blot检测利用pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1/2敲低A549细胞RBMS1(RBMS1 shN1，RBMS1 shN2)的效果验证，pLKO.1空载细胞作为对照(Empty Vector)，GAPDH作为内参；B为敲低RBMS1对细胞生长曲线的影响；C为敲低RBMS1对A549肺癌细胞平板克隆形成能力的影响；
[0020]图5为本专利技术提供的利用pLKO.1
‑
Tet
‑
On
‑
RBMS1
‑
sh1载体在H1299细胞中敲低
RBMS1对裸鼠皮下移植瘤生长的影响结果图；其中，A为western blot检测通过pLKO.1
‑
Tet
‑
On
‑
RBMS1
‑
sh1载体构建的Dox诱导的H1299稳转细胞RBMS1的表达情况；B为Dox诱导敲低RBMS1对裸鼠皮下移植瘤生长的影响结果；C为B图中裸鼠皮下移植瘤的重量统计图；D为裸鼠皮下移植瘤的体积；
[0021]图6为本专利技术提供的通过transwell实验检测RBMS1对H1299肺癌细胞体外迁移和侵袭能力的影响结果图；其中，A为通过Transwell(无基质胶)实验检测敲低RBMS1对H1299肺癌细胞迁移能力的影响；B为迁移效率的统计图；C为通过Transwell(有基质胶)实验敲低RBMS1对H1299肺癌细胞侵袭能力的影响；D为侵袭效率的统计图；
[0022]图7为本专利技术提供的western blot检测RBMS1敲低(pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1和pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh2)对SLC7A11、ACSL4、AIFM2和GPX4蛋白表达的影响图；其中，A为H1299细胞中敲低RBMS1对SLC7A11、ACSL4、AIFM2和GPX4蛋白表达的影响；B为A549细胞中敲低对SLC7A11、ACSL4、AIFM2和GPX4蛋白表达的影响；
[0023]图8为本专利技术提供的通过GSH
‑
Glo Glutathione Assay试剂盒检测敲低RBMS1(pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1和pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh2)对H1299细胞内谷胱甘肽(GSH)水平的影响；
[0024]图9为本专利技术提供的通过BODIPY 581/591 C11探针检测敲低RBMS1(pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1和pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh2)对H1299细胞脂质过氧化的影响；
[0025]图10为本专利技术提供的敲低RBMS1对铁死亡诱导剂erastin(Era)诱导细胞铁死亡的影响；其中，A为对照组(不加erastin，
‑
Era)、3μMerastin(+Era)组、以及erastin(3μM)+Ferrostatin
‑
1(Ferr
‑
1)(2μM)(+Era+Ferr
‑
1)组分别处理敲低RBMS1的H1299(pLKO.1
‑
RBMS1
‑
sh1和pLKO.1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.下调RBMS1表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。2.下调RBMS1表达的试剂在制备抑制肺癌细胞生长和/或增殖的药物中的应用。3.下调RBMS1表达的试剂在制备抑制肺癌成瘤能力的药物中的应用。4.下调RBMS1表达的试剂在制备抑制肺癌细胞转移和/或侵袭的药物中的应用。5.下调RBMS1表达的试剂在制备抑制铁死亡相关因子SLC7A11的表达的药物中的应用。6.下调RBMS1表达的试剂在制备促进erastin诱导细胞铁死亡的药物中的应用。7.下调RBMS1表达的试剂在制备下调肺癌细胞内谷胱甘肽水平和/或升高肺癌细胞内脂质过氧化水平的药物中的应用。8.检测RBMS1表达量的试剂在制备肺癌诊断试剂盒中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪洋，张文静，祁旸凡，张金瑞，赵瑾瑶，孙玉，赵庆芝，白璐，智莉莉，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：