反义寡核苷酸及其在抑制新冠病毒中的应用制造技术

本发明专利技术提出了一系列反义寡核苷酸序列，含有其的药物组合物或试剂盒以及抑制病毒复制的用途。所述反义寡核苷酸包括：SEQ ID NO：1～128任一所示的核苷酸序列中的至少13个连续核苷酸构成的核苷酸片段。利用本发明专利技术的反义寡核苷酸可以有效地抑制病毒的复制，降低细胞内病毒含量，起到治疗因病毒感染而引发的疾病的效果，尤其适用于新型冠状病毒的治疗。尤其适用于新型冠状病毒的治疗。

【技术实现步骤摘要】
反义寡核苷酸及其在抑制新冠病毒中的应用


[0001]本专利技术涉及医药领域。具体地，本专利技术涉及反义寡核苷酸及其在抑制新冠病毒中的应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒COVID
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19引起的严重急性呼吸道感染对全球健康构成了巨大威胁，目前，尚无针对新型冠状病毒感染的特效治疗方法，根据国家卫健委最新发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》中推荐的药物治疗方案，主要的药物治疗分为抗病毒治疗、抗菌(细菌和真菌)治疗和针对危重症患者的特殊治疗三大类。其中，明确给出的抗病毒药物包括α
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干扰素、洛匹那韦/利托那韦、利巴韦林、磷酸氯喹和阿比多尔；强调抗菌药物避免盲目或不恰当使用，尤其是广谱抗菌药物的联合使用，并未给出具体的药物品种；对于危重症患者的治疗，可考虑使用糖皮质激素和血必净。
[0003]目前针对新冠肺炎尚无特效抗病毒药物，所有的药物选择都是基于既往SARS和MERS 或其他新型流感病毒的治疗经验，其中所涉及到药物治疗的有效性和安全性仍有待在临床治疗和研究中进一步证实，积极的对症支持治疗仍是救治的关键。
[0004]3‑
胰凝乳蛋白酶样蛋白酶(3C
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like protease，3CLPro)是冠状病毒复制所必须的酶，可作为有效的抗病毒药物靶点。3CLPro是新型冠状病毒产生的主要的蛋白酶，冠状病毒大多数功能蛋白(非结构蛋白)由ORF1ab基因编码，先翻译成一个多蛋白体(7096aa)，再由3CLPro切割成多个有活性的蛋白如病毒复制蛋白RdRp。由于人体内没有与3CLPro类似切割位点的蛋白酶，可筛选出高特异性的抑制剂，具有更好的安全性。目前未有报道针对3CLPro的特异性小分子化药。
[0005]RNA依赖的RNA聚合酶(RNA
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dependent RNA polymerase,RdRp)是除逆转录病毒外的其他RNA病毒复制所必须的酶，复制形成新的病毒RNA。RdRp复制正义链，产生负义链，再以负义链为模板，生成大量的正义链，完成了RNA的复制。新的病毒RNA和通过水解酶产生的蛋白质结合，组装成了大量的新的病毒，释放出原宿主细胞。目前批准的核苷类似物(favipiravir和利巴韦林)和实验性核苷类似物(瑞德西韦和galidesivir)都是以此为靶点。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少在一定程度上解决了现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提出了反义寡核苷酸、含有其的药物组合物、试剂盒及其用途和抑制病毒复制的方法，利用该反义寡核苷酸可以有效地抑制病毒的复制，降低细胞内病毒含量，起到治疗因病毒感染而引发的疾病的效果，尤其适用于新型冠状病毒的治疗。
[0007]本专利技术提出了一种反义寡核苷酸(ASO)。根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸包括：SEQ ID NO：1～128任一所示的核苷酸序列中的至少13个连续核苷酸构成的核苷酸片段。
[0008]本专利技术针对3CLPro和RdRP分别设计了多条反义寡核苷酸，并测试了其对新型冠状病毒的抑制潜力，发现上述反义寡核苷酸可以有效地结合于病毒RNA的不稳定区域(如发卡结构、多分支环、膨胀环等)，尤其是新型冠状病毒，抑制复制关键基因3CLPro和RdRP 的表达，从而抑制病毒的复制，降低细胞内病毒含量。并且，上述序列与人基因组序列同源性低，因而不会干扰人正常基因的表达调控。由此，为病毒复制、治疗病毒感染所引发的疾病奠定了理论研究和临床应用基础，有望治疗新型冠状病毒引发的疾病，应用价值高。
[0009]根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸包括至少一个被修饰的核苷酸。由此，有助于核苷酸与病毒RNA结合。
[0010]根据本专利技术的实施例，所述被修饰的核苷酸选自下列至少之一：5'
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硫代磷酸酯基(PS) 的核苷酸、5
‑
甲基化胞嘧啶核苷酸(5
‑
mC)、2'
‑
O
‑
甲基(2'
‑
OMe)修饰的核苷酸、2'
‑
O
‑2‑
甲氧乙基(2'
‑
MOE)修饰的核苷酸、2'
‑
氟代(2'
‑
F)修饰的核苷酸、3'
‑
氮取代(3'
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NP)修饰的核苷酸、锁核酸(LNA)、吗啉代核苷酸(PMO)、多肽核苷酸(PNA)。由此，以便于核苷酸特异性识别并结合于病毒上。
[0011]5'
‑
硫代磷酸酯基(PS)的结构为：
[0012]经过锁核酸(LNA)修饰的鸟嘌呤(GL)、腺嘌呤(AL)、胸腺嘧啶(TL)、5
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甲基化胞嘧啶核苷酸(5mCL)的结构分别如下所示：
[0013][0014][0015]根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸的长度至少为16个核苷酸。由此，以便于核苷酸特异性识别并结合于病毒上。
[0016]根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸的长度为16～25个核苷酸。由此，以便于核苷酸特异性识别并结合于病毒上。
[0017]根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸靶向作用于3CLPro蛋白(例如SEQ ID NO： 148所示核苷酸编码的蛋白)或RdRp蛋白(例如SEQ ID NO：149所示核苷酸编码的蛋白)。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸靶向作用于SEQ ID NO：135～137任一所示的核苷酸序列。
[0019]根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸具有如SEQ ID NO：138～142任一所示的核苷酸序列。
[0020]根据本专利技术的实施例，所述反义寡核苷酸靶向作用于SEQ ID NO：143～147任一所示的核苷酸序列。
[0021]在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了一种药物组合物。根据本专利技术的实施例，所述药物组合物包括：前面所述的反义寡核苷酸；以及药学上可接受的辅料。由此，根据本专利技术实施例的药物组合物可以用于抑制复制关键基因的表达，从而抑制病毒的复制，降低细胞
内病毒含量，用于治疗感染病毒所引发的疾病，尤其是新冠病毒的治疗。
[0022]在本专利技术的又一方面，本专利技术提出了一种试剂盒。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒包括：前面所述的反义寡核苷酸。由此，根据本专利技术实施例的试剂盒可以用于抑制复制关键基因的表达，从而抑制病毒的复制，降低细胞内病毒含量，尤其适用于抑制新冠病毒复制。进一步地，可以采用该试剂盒对是否感染病毒(尤其是新型冠状病毒)进行诊断，具体地，将上述反义寡核苷酸与细胞接触，测定接触前后细胞中的3CLPro或RdRP基因表达量变化，若该基因表达量降低，则表明其表达受到抑制，可以初步判断细胞中含有病毒(尤其是新型冠状病毒)。
[0023]在本专利技术的又一方面，本专利技术提出了一种抑制病毒复制的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将前面所述反义寡核苷酸与病毒接触。通过将前述反义本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸包括：SEQ ID NO：1～128任一所示的核苷酸序列中的至少13个连续核苷酸构成的核苷酸片段。2.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸包括至少一个被修饰的核苷酸；任选地，所述被修饰的核苷酸选自下列至少之一：5'
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硫代磷酸酯基的核苷酸、5
‑
甲基化胞嘧啶核苷酸、2'
‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸、2'
‑
O
‑2‑
甲氧乙基修饰的核苷酸、2'
‑
氟代修饰的核苷酸、3'
‑
氮取代修饰的核苷酸、锁核酸、吗啉代核苷酸、多肽核苷酸；任选地，所述反义寡核苷酸靶向作用于3CLPro蛋白或RdRp蛋白；任选地，所述反义寡核苷酸靶向作用于SEQ ID NO：135～137任一所示的核苷酸序列；任选地，所述反义寡核苷酸具有如SEQ ID NO：138～142任一所示的核苷酸序列；任选地，所述反义寡核苷酸靶向作用于SEQ ID NO：143～147任一所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈平，王芮，徐娟，陈璞，
申请(专利权)人：纳肽得青岛生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：