一种特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用，所述纳米抗体具有至少一种以下所示的互补决定区：如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1；如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2；和如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3。此纳米抗体具有针对蛋白激酶p38δ独特的抗原互补决定区，对蛋白激酶p38δ显示出了高度特异的结合活性，且不与p38MAPK的其他家族蛋白p38α、p38γ和p38δ发生交叉反应。同时本申请的纳米抗体具有突出的热稳定性和酸碱稳定性。热稳定性和酸碱稳定性。热稳定性和酸碱稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性结合蛋白激酶p38
δ
的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，且特别涉及一种特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用。

技术介绍

[0002]p38δ是p38 MAPK家族中的一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，主要参与调控细胞外刺激与细胞内应答之间的信号转导。p38 MAPK家族共有四个成员，即p38α、p38β、p38γ以及p38δ。虽然所有的p38 MAPKs在序列及结构上都高度保守，但是他们在生理和病理环境中的功能却不尽相同。其中，p38α和p38β广泛表达于各种细胞和组织，调控细胞的基本生命活动。例如：p38α在白细胞、肝、脾、小脑、骨髓、甲状腺及胎盘中具有较高的表达水平；p38β主要在脑和心脏中进行表达。而p38γ和p38δ的表达具有组织细胞特异性，并受严格的调控，p38γ主要在骨骼肌中表达；p38δ的表达主要在肺、肾、肠、唾液腺的表皮细胞及睾丸、卵巢、肾上腺和垂体。近年来研究揭示，p38δ在多种疾病的发生发展中发挥重要的调控功能，如糖尿病、免疫疾病、神经退行性疾病、癌症等。p38δ是潜在的疾病诊断生物标志物及治疗靶点。在药物研发方面，由于p38 MAPKs蛋白间高度保守，开发不与其他p38 MAPK蛋白交叉反应的p38δ特异性抑制剂较为困难，因此至今尚无有效的p38δ抑制剂。
[0003]纳米抗体是源于重链抗体可变区域的小分子抗体，其分子量约为15kDa，具有亲和力高、稳定性强、组织相容性好以及易筛选、易制备等特点，近年来在治疗型药物抗体、临床检测型抗体、科研运用型抗体等方面得到了广泛的研究与发展。纳米抗体主要是由4个保守的骨架区(FR)和3个抗原互补决定区(CDR)依次交叉串联形成，其中，抗原互补决定区(CDR)是抗原识别及抗原结合的主要执行部位。所以纳米抗体的筛选关键在于获得可以介导与抗原特异性结合的互补决定区。纳米抗体中的互补决定区根据其在整个抗体中的位置不同，可以依次分为三个独立区域，即互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)。与传统抗体相比，纳米抗体互补决定区的氨基酸序列较长，使得其可以深入抗原较为隐匿的结构中与其相互作用。纳米抗体还具有良好的热稳定性和酸碱稳定性，这为其在检测、治疗等领域的应用提供了传统抗体所无法比拟的优越性。因此，若提供一种能够特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体，对于以p38δ为生物标志物和治疗靶点的疾病诊断、治疗提供了新的思路和研究方向。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体，此纳米抗体具有针对蛋白激酶p38δ独特的抗原互补决定区，对蛋白激酶p38δ显示出了高度特异的结合活性，且不与p38 MAPK的其他家族蛋白p38α、p38β和p38δ发生交叉反应。同时本申请的纳米抗体具有突出的热稳定性和酸碱稳定性。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供编码所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体的
核酸。
[0006]本专利技术的第三目的在于提供含有所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体的核酸的表达载体。
[0007]本专利技术的第四目的在于提供含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0008]本专利技术的第五目的在于提供特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备用于检测蛋白激酶p38δ的试剂盒中的应用。
[0009]本专利技术的第六目的在于提供特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备治疗或预防与蛋白激酶p38δ调控作用相关的疾病药物中的应用。
[0010]本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0011]本专利技术提出一种特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体，所述纳米抗体具有至少一种以下所示的互补决定区：如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1；如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2；和如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3。
[0012]根据一种优选实施方式，所述纳米抗体具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。
[0013]本专利技术还提供了一种编码所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体的核酸，所述核酸能够编码至少一种以下所示的氨基酸序列：如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列；如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列；和如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列。
[0014]根据一种优选实施方式，所述核酸具有至少一种以下所示的编码序列：如SEQ ID NO.4所示的编码序列；如SEQ ID NO.5所示的编码序列；和如SEQ ID NO.6所示的编码序列。
[0015]根据一种优选实施方式，所述核酸具有如SEQ ID NO.8所示的编码序列。
[0016]本专利技术还提供了一种含有所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体的核酸的表达载体，所述表达载体包括原核生物表达载体、真核生物表达载体或体外表达载体系统。
[0017]根据一种优选实施方式，所述表达载体为pET22b。
[0018]本专利技术还提供了一种含有所述的表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核生物或真核生物。
[0019]本专利技术还提供了所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备用于检测蛋白激酶p38δ的试剂盒中的应用。
[0020]本专利技术还提供了所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备治疗或预防与蛋白激酶p38δ调控作用相关的疾病药物中的应用。
[0021]基于上述技术方案，本专利技术的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体、核酸、表达载体、宿主细胞及其应用至少具有如下技术效果：
[0022]本专利技术特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体具有至少一种以下所示的互补决定区：如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1；如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2；和如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3。使得该纳米抗体具有针对蛋白激酶p38δ独特的抗原互补决定区，对蛋白激酶p38δ显示出了高度特异的结合活性，且不与p38 MAPK的其他家族蛋白p38α、p38β和p38γ发生交叉反应。同时本申请的纳米抗体具有突出的热稳定性和酸碱稳定性。为检测蛋白激酶p38δ以及治疗与蛋白激酶p38δ调控作用相关的疾病提供了新方向。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0024]图1为本专利技术实施例1中p38γ和p38δ的表达与纯化的示意图，其中图1A示出了表达载体pET28a
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p38γ/p38δ
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有至少一种以下所示的互补决定区：如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1；如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2；和如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3。2.根据权利要求1所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。3.一种编码权利要求1或2所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体的核酸，其特征在于，所述核酸能够编码至少一种以下所示的氨基酸序列：如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列；如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列；和如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，所述核酸具有至少一种以下所示的编码序列：如SEQ ID NO.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：张臣良，毕锋，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：