用于控制白色念珠菌感染的反义寡聚物制造技术

本公开涉及反义寡聚物在治疗或疗法白色念珠菌感染中的用途。本公开进一步描述了反义寡聚物在反义治疗中用于抑制白色念珠菌从酵母到丝状体的形态转化的用途。母到丝状体的形态转化的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于控制白色念珠菌感染的反义寡聚物


[0001]本公开涉及反义寡聚物在治疗或疗法白色念珠菌(Candida albicans)感染中的用途。特别地，使用反义寡聚物靶向参与白色念珠菌从酵母到丝状体(filamentous form)形态转化的特异性基因。
[0002]本公开进一步描述了反义寡聚物在反义治疗中用于抑制白色念珠菌从酵母到丝状体的形态转化的用途。

技术介绍

[0003]念珠菌物种通常作为共生微生物存在，但它们也可以作为具有引起浅表和全身感染能力的机会致病菌。由于老年人口和免疫受损患者数量的增加以及留置医疗器械的广泛使用，念珠菌感染(Candida infection)的发病率在过去几年显著增加。白色念珠菌感染仍然是所有念珠菌物种感染中最普遍的；所有念珠菌感染中大约有47％是由念珠菌引起的。
[0004]作为双态性真菌，白色念珠菌从共生体转变为致病菌的能力主要是由于其在酵母菌和菌丝相之间进行形态转换的能力，这一特性对其穿透人体组织并逃离宿主免疫系统的能力至关重要。这种能力极大地促进了其致病性。白色念珠菌每年造成约400,000人死亡，其最棘手的毒力因子之一是其形成丝状体的能力。
[0005]在过去的几年里，重要的技术进步促进了对白色念珠菌从酵母到丝状体的形态转化的分子生物学的研究。这些进步包括基因组和转录组序列数据的可用性，这些数据对于鉴定和表征与白色念珠菌双态性相关的基因至关重要。一些工作已经证明EFG1、HWP1和HYR1基因作为白色念珠菌丝状形成的诱导物的重要性[1]。
[0006]尽管广泛的研究致力于发展新的治疗策略，但仅有限数量的药物可用于对抗浅表性和侵袭性念珠菌感染。实际上，目前临床上仅使用靶向三种不同真菌代谢途径的四种分子类别来治疗念珠菌相关的全身感染：多烯类、唑类和棘白菌素类。其他几类药物，例如吗啉类和烯丙胺类，由于全身施用时疗效不佳或副作用严重，因此仅用作局部药剂[2]。念珠菌多药耐药性的增加、新药的稀缺以及念珠菌物种从共生真菌向病原真菌过渡转换的高可塑性导致念珠菌病病例数量的增加。尽管过去几年疗法取得了进展，但抗真菌药物的开发速度仍然落后于真菌感染的速度。此外，由于毒性问题，这些化合物中的大多数作为全身性药物的潜力有限。
[0007]这些因素构成了临床问题，导致高发病率和死亡率(30
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37％)以及与患者住院时间延长相关的更高经济成本。住院患者与念珠菌血症相关的平均费用为每次发作性症状5700至85000欧元。这些证据强调需要新的策略来管理白色念珠菌感染。
[0008]反义疗法(AST)为治疗许多人类疾病带来了巨大希望。AST的基础概念相对简单：使用特定mRNA的互补序列，其可以抑制后者的表达并诱导DNA向蛋白质翻译的“阻断”。反义寡聚物(ASO)是与靶标mRNA互补的短链核酸[16]。ASO通常由具有基因特异性的未修饰或化学修饰分子的13
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25个核苷酸的短序列组成。此外，近年来，已经开发了ASO化学修饰以增强核酸酶抗性，延长组织半衰期、亲和力和效力，并降低特异性毒性。目前有三代ASO。第一代
包含硫代磷酸酯骨架修饰，其特征在于非桥连磷酸氧被硫原子取代。开发第二代以增强核酸酶抗性并增加对靶标mRNA的结合亲和力。为此，将2'
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O
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甲基和2'
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O
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甲氧乙基(2
’‑
O
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methoexyethyl)糖修饰添加到核苷酸的2'位的OH基团。大量研究记录了使用AST作为研究靶标人类蛋白质的生物化学工具[3]。这种方法已被提议作为细菌感染的抗生素治疗的替代方法。福米韦生(商品名Vitarvene)是一种S
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oligo，是唯一获得FDA批准的靶向微生物的反义治疗剂。福米韦生在1998年被批准用于治疗巨细胞病毒诱导的视网膜炎。靶向细菌的早期工作发现，经修饰的ASO抑制沙门氏菌(Salmonella)、李斯特菌(Listeria)、布鲁氏菌(Brucella)、假单胞菌(Pseudomonas)、葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌(Streptococcus)和埃希氏菌(Escherichia)的生长[4]。尽管事实是在过去十年中一直在开发用于控制细菌生长的ASO，但用于控制白色念珠菌)生长的基于反义的应用稀少且未得到充分利用[5]。
[0009]文献WO2014144024(A1)公开了生产念珠菌细胞Hyhr1表面蛋白片段的方法。该文献进一步公开了该蛋白质用于针对真菌感染的治疗和免疫的用途。
[0010]文献AU2016244238(A1)公开了Hyhr1表面蛋白作为用于免疫的靶点(主动和被动)以及作为播散性念珠菌病的预防性治疗的用途。
[0011]文献US2019030141(A1)公开了用于免疫的念珠菌细胞表面蛋白Als3和Hyr1及其组合的片段。
[0012]文献CN107304429(A)公开了抑制剂如小分子化合物下调Nuo2蛋白或抑制毒力因子相关基因(ALS3、HWP1和/或ECE1基因表达)的基因的用途。
[0013]文献US2017298349(A1)公开了调节念珠菌的HWP1和ALS3表达的基因间非编码RNA分子。该文献进一步公开了非编码RNA分子及其互补分子在调节HWP1或ALS3表达以及调节念珠菌的粘附、酵母到菌丝相转变或生物膜发育中的用途。其目的是预防或治疗念珠菌病。
[0014]文献US2005244861(A1)公开了调节白色念珠菌中的HWP1表达所需的核酸以及这些核酸在鉴定抑制HWP1的表达的试剂中的用途。
[0015]文献CN1730654(A)公开了ASO序列用于对抗白色念珠菌感染的用途。具体地，该文献公开了针对白色念珠菌I型内含子核酶的核心假结的ASO序列，因此强烈抑制白色念珠菌的剪切反应性。
[0016]公开这些事实是为了说明本公开解决的技术问题。

技术实现思路

[0017]本公开描述了ASO靶向参与白色念珠菌从酵母到丝状体的形态转化的特异性基因的用途。本公开进一步描述了ASO在AST抑制白色念珠菌从酵母到丝状体的形态转化中的用途。
[0018]ASO是合成寡聚物，其沉默特异性基因的表达。这种特异性通过避免对其他共生念珠菌物种的非预期影响并通过最大限度地减少交叉耐药性的可能性，赋予优于广谱抗真菌药的优势。此外，序列特异性和ASO的短长度对人类基因表达的风险也很小。这种方法的另一个重要优点是能够几乎消除或显著减少发现新抗真菌药所需的时间，从而将潜在可用靶标的范围扩大到任何酵母中具有已知碱基序列的任何基因，例如白念珠菌。
[0019]到目前为止，还没有鉴定、设计和合成的ASO来靶向白色念珠菌毒力所需的非必需
基因，即参与从酵母到丝状)毒力所需的非必需基因，即参与从酵母到丝状体的形态转化的基因。将ASO应用于一组涉及白色念珠菌菌株最棘手的毒力因子之一的基因，使我们不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的寡聚物，作为白色念珠菌(C.albicans)丝状形成阻断剂，所述分离的寡聚物包含：选自由以下序列组成的列表的至少一个序列：SEQ ID 7、SEQ ID 8、SEQ ID 9或它们的组合；或者所述序列的变体，其中基于所述序列的全部核苷酸的同一性，所述序列的变体与所选择的序列具有至少95％的同一性。2.一种分离的寡聚物，用于在药物中使用，所述分离的寡聚物包含：选自由以下序列组成的列表的至少一个序列：SEQ ID 7、SEQ ID 8、SEQ ID 9或它们的组合；或者所述序列的变体，其中基于所述序列的全部核苷酸的同一性，所述序列的变体与所选择的序列具有至少95％的同一性。3.根据前述权利要求所述的分离的寡聚物，用于在白色念珠菌相关感染的治疗或疗法中使用。4.根据前述权利要求所述的分离的寡聚物，用于在阴道感染和/或口腔感染的治疗或疗法中使用。5.根据前述权利要求所述的分离的寡聚物，其中基于所述序列的所有核苷酸的同一性，所述序列与所选择的序列具有至少96％的同一性；优选地具有至少97％的同一性、至少98％的同一性、至少99％的同一性或完全相同。6.一种包含至少两种分离的寡聚物的组合的组合物，作为控制白色念珠菌丝状形成阻断剂，所述组合物包...

【专利技术属性】
技术研发人员：索尼亚，
申请(专利权)人：米尼翁大学，
类型：发明
国别省市：