两种代谢标志物单独或联合在制备诊断克罗恩病的试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了两种代谢标志物单独或联合在制备诊断克罗恩病的试剂盒中的应用。本发明专利技术提供的代谢标志物去氧胆酸和棕榈酰胺可以单独或两个联合诊断区分健康人和克罗恩病患者，诊断准确率高，因而具有开发制备成诊断克罗恩病的试剂盒的前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
两种代谢标志物单独或联合在制备诊断克罗恩病的试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物化学领域，涉及代谢标志物在疾病诊断方面的应用，具体涉及两种代谢标志物单独或联合在制备诊断克罗恩病的试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]克罗恩病(Crohn
’
s disease)是一种可发生于胃肠道任何部位的炎症性肠病，导致慢性、复发性、进行性和破坏性透壁炎症。患者通常表现为慢性腹痛、腹泻、梗阻、肛周病变等。目前，克罗恩病的诊断基于临床病史、体格检查和辅助诊断测试，对医生的经验水平要求较高。
[0003]生物标志物可以作为反映生物体结构和功能发生改变的信号指标，用于检测复杂疾病的发生和进展。近年来“组学”领域的生物标志物作为辅助手段用于预先、准确、灵敏地判断出疾病发生情况，取得了较好的效果。多个生物标志物联合诊断可以区分疾病的类型以及疾病所处的阶段，辅助临床治疗。而且以血清标志物为例，该方法具有简便、快速、经济且相对无创的优点而被广泛采用，对患者非常友好。
[0004]本专利技术发现了对克罗恩病具有较高诊断准确率的代谢标志物，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供两种代谢标志物单独或联合在制备诊断克罗恩病的试剂盒中的应用。
[0006]本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：
[0007]去氧胆酸(deoxycholic acid)、棕榈酰胺(palmitic amide)单独或联合在制备诊断克罗恩病的试剂盒中的应用。
[0008]一种诊断克罗恩病的试剂盒，含有检测去氧胆酸或/和棕榈酰胺的检测试剂。
[0009]有益效果：
[0010]本专利技术发现，代谢标志物deoxycholic acid和palmitic amide可以单独或联合诊断区分健康人和克罗恩病患者，诊断准确率高，因而具有开发制备成诊断克罗恩病的试剂盒的前景。另外，本专利技术提供的诊断指标为血清代谢物，只需要采取少量血液即可检测，基本无创。
附图说明
[0011]图1为两种血清代谢物在健康受试者和克罗恩病患者血清中的含量水平比较；
[0012]图2为deoxycholic acid区分健康受试者vs克罗恩病的ROC曲线；
[0013]图3为palmitic amide区分健康受试者vs克罗恩病的ROC曲线；
[0014]图4为deoxycholic acid联合palmitic amide区分健康受试者vs克罗恩病的ROC曲线。
具体实施方式
[0015]下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。
[0016]实施例1：代谢标志物对克罗恩病的诊断效能
[0017]一、实验样本和试剂
[0018]收集江苏省中医院158例健康受试者和158例克罗恩病患者。健康受试者为体检健康的正常人，克罗恩病患者根据WHO克罗恩病诊断标准(文献：吴开春,梁洁,冉志华,等.炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2018年,北京)[J].中华消化杂志,2018,38(05):292
‑
311.)纳入。各组患者的年龄、性别和体重指数匹配，无显著性差异。按表1将各组受试者或患者随机分为训练集样本和验证集样本。
[0019]表1训练集样本和验证集样本样本数量
[0020] 健康受试者(HCS)克罗恩病患者(CD)训练集115106验证集4352总样本数158158
[0021]排除标准：
①
合并有其他肛肠科疾病；
②
合并有心血管、肝、肾和造血系统、糖尿病等严重原发疾病以及精神病患者；
③
正在使用口服激素或者免疫抑制剂等其他治疗药物；
④
妊娠期、哺乳期妇女；
⑤
患有精神疾病不能合作者；
⑥
近1个月内参加其它临床试验者；
⑦
不愿接受本研究者。
[0022]主要实验试剂：氯代苯丙氨酸；乙腈；甲醇；甲酸；超纯水。
[0023]二、实验方法
[0024]1、血清样本的采集及储存
[0025]采集健康受试者和患者清晨空腹外周血并将其置于不含抗凝剂的试管内，在室温下自然凝集30
‑
60min，待血液凝固，以2000rpm速度离心10min，小心吸取上层清亮血清液体于无菌冻干管中，标记后放入
‑
80℃冰箱储存备用。
[0026]2、LC
‑
MS技术测定血清中目标代谢物的含量水平
[0027]检测仪器：Agilent technologies 1290infinity液相色谱仪；AB Sciex Triple TOF 4600质谱检测器。
[0028]样本处理：取血清样品分装成每例45μL，离心数秒后，加入3倍量乙腈沉淀蛋白，涡旋数秒后，静置3h。于4℃以13000r离心10min，取上清153μL并挥干，再用120μL 50％乙腈溶液复溶，离心后取80μL于进样小瓶中待测。CD和HCS样本的分析顺序是随机的，质控样本每批次注射一次，每批10个样本。
[0029]以各样本中目标血清代谢物的检测峰面积代表其含量水平。
[0030]3、数据处理方法
[0031]训练集中，运用Logistic回归建立目标血清代谢物回归方程，产生一组新变量logit[P]，对该新变量进行ROC曲线分析，并根据ROC曲线得到最佳cut
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off值；验证集中，根据SPSS25.0软件给出的预测概率计算目标血清代谢物的诊断准确率。
[0032]三、实验结果
[0033]1、目标血清代谢物在健康受试者和克罗恩病患者血清中含量水平的差异
[0034]训练集中，代谢物去氧胆酸和棕榈酰胺在健康受试者和克罗恩病患者血清中的含量水平存在明显差异，如图1所示。
[0035]2、目标血清代谢物对健康受试者vs克罗恩病的诊断区分效能
[0036]2.1训练集构建回归方程
[0037]在训练集中，以各样本的血清代谢物去氧胆酸含量水平为自变量，以组别(健康受试者、克罗恩病患者)为应变量，构建得到回归方程logit[p]＝
‑
0.346+2.575X1，其中：X1为去氧胆酸的含量水平。
[0038]在训练集中，以各样本的血清代谢物棕榈酰胺含量水平为自变量，以组别(健康受试者、克罗恩病患者)为应变量，构建得到回归方程logit[p]＝
‑
0.382+2.734X1，其中：X1为棕榈酰胺的含量水平。
[0039]在训练集中，以各样本的血清代谢物去氧胆酸和十六碳酰胺的含量水平为自变量，以组别(健康受试者、克罗恩病患者)为应变量，构建得到回归方程logit[p]＝
‑
0.247+1.570X1+1.686X2，其中：X1为去氧胆酸的含量水平，X2为十本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.去氧胆酸、棕榈酰胺单独或联合在制备诊断克罗恩病的试剂盒中的应用。2.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘史佳，徐民民，刘欢欢，单进军，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：