本发明专利技术提供一种海木耳萃取物、其制备方法及用途；其中，该海木耳萃取物是经由包含取一海木耳(Sarcodia suiae)，在30～50℃的温度条件下进行萃取，将所得到的萃取液离心，过滤其上清液而获得；该海木耳萃取物具有加强鱼类的吞噬作用及提高鱼类免疫相关基因的表达量的功效，很适合用于提高鱼类免疫及抗病能力的用途。途。途。
【技术实现步骤摘要】
一种提高鱼类免疫及抗病能力的海木耳萃取物、其制备方法及用途
[0001]本专利技术是关于水产养殖领域，特别是关于提高鱼 类免疫能力及抗病能力的水产养殖领域。
技术介绍
[0002]鱼类为人类重要的蛋白质来源之一，鱼类之鱼获 依其来源，可分为捕捞及水产养殖两大类。由联合国粮食及 农业组织(Food and Agriculture Organization of the UnitedNations,FAO)所发布的《世界渔业和水产养殖状况》可知， 在过去20年，捕捞鱼获的成长量已呈停滞状态，现今鱼获增 长是以养殖鱼获为主，养殖鱼类已然在水产市场上占据重要 的一席之地。
[0003]然而，虽然鱼类的水产养殖方法已发展多年，但 在养殖时，仍常遭受因为鱼病而导致养殖成本增加和鱼获下 降等造成经济损失的状况。因此，在鱼类养殖过程中，需密 切注意并降低鱼病发生的机率。依据渔农自然护理署所发布 的资料可知，鱼病的成因包括环境中的病原体、不理想的水 体环境及鱼类免疫力下降等，据此可知，增强养殖鱼类的抗 病能力可成为防止鱼病发生的有力预防措施。因此，如何在 养殖过程中，提高鱼类的抗病及免疫能力，即成为水产养殖 领域急需解决的问题，也为本专利技术在此所要解决的问题。
[0004]中国台湾专利公开第201330779号虽公开一种红 藻萃取物用于提高甲壳类的免疫能力的应用。然而，甲壳类 为无脊椎动物，而鱼类为脊椎动物。脊椎动物具有免疫系统， 能对体外侵入的大型分子产生反应，如产生抗体或刺激活化 其白血球，而对该外来侵入者产生高度特异性免疫反应，并 消灭之，故为避免病原性微生物的侵袭，鱼类可以识别自体 与非自体组织，并有排除非自体组织的机制。而无脊椎的甲 壳类则为开放式循环系统，缺乏完整的特异性免疫，其免疫 机制以非特异性免疫反应为主，为立即而非缓慢诱发式的防 御反应，以应付病原入侵及扩散，甲壳类的防御反应主要由 血细胞(hemocytes)产生的酚氧化酶原激活系统 (prophenoloxidase system,proPO system)来完成。所以，因 鱼类与甲壳类免疫机制的差异，现有技术所公开的红藻萃取 物难以被直接应用于提高鱼类的免疫能力。
技术实现思路
[0005]为了提供一可用于预防鱼病发生的解决措施，发 明人投入研发与改良，历经长期的反复试验与尝试后，终于 找到可有效用于提高鱼类免疫能力的活性物质。
[0006]本专利技术目的在于提供一种海木耳萃取物的制备 方法，其包括：步骤一、取海木耳(Sarcodia suiae)在30～50℃的温度 条件下进行萃取，得到海木耳萃取液；步骤二、将该海木耳萃取液离心，过滤离心后所得的上 清液，以获得海木耳萃取物。
[0007]本专利技术的另一专利技术目的在于提供一种海木耳萃 取物，其包括使用如前所述的方
(Troche)或胶囊(Capsule)以及其他类似或适用本专利技术 的剂型。
[0023]本专利技术所述组合物，可进一步添加水产养殖添加 物，其包括但不限于疫苗、佐剂、免疫刺激物 (immunostimulant)；其中该免疫刺激物包含但不限于化学 合成物、糖类或糖类衍生物。
[0024]本专利技术所述组合物适合的施予途径包含但不限 于浸泡、喷洒、药浴、口服或注射。
[0025]本专利技术实施例所使用的海木耳(Sarcodia suiae) 可从市面上购得，本专利技术所属
中具有普通知识者也 可从天然海域取得本专利技术所指的海木耳。本专利技术实施例中用 于验证功效的细胞皆可于市面上购得或依据本专利技术所属技术 领域的普通知识从相对应的组织中分离而得。另外，除非另 有说明，本专利技术所用的材料皆市售易于取得。
[0026]本专利技术是以下面的实施例予以示范阐明，但本发 明不受下述实施例所限制。
[0027]实施例一、海木耳萃取物制备
[0028]使用固液萃取法(solid-liquid extraction,SLE) 制备海木耳萃取物。具体做法如图1所示，取海木耳(Sarcodia suiae)，将其冻干、磨成粉末后，得到海木耳粉末；将该海 木耳粉末，以海木耳粉末与水为1g：10～30mL的比例溶于水 后，置于30～50℃的水浴中萃取1～5小时，得到海木耳萃取液， 其中该海木耳粉末与水以1g：20mL的比例为最佳，其中该 萃取以置于40℃的水中萃取3小时为最佳；接着，将该海木耳 萃取液以14000rpm离心10～30分钟(以20分钟为最佳)，取其 上清液，以0.2μm过滤器过滤并冻干后，即可得到海木耳萃 取物(Sarcodia suiae extraction,SSE)。
[0029]由前述方法所获得的海木耳萃取物，在经NMR 检测等检测法检验分析后，可知其糖/醣类成分如表1所示。海 木耳萃取物的成分以多糖为主，除此之外，还含有多酚、类 黄酮、类胡萝卜素及叶绿素等功能性成分。
[0030]表1
[0031]将依前述方法所得的海木耳萃取物溶解后，使用 无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)调节至所需浓度，用于后续 实施例中。
[0032]实施例二、细胞安全性试验
[0033]使用L-15培养基(含10％胎牛血清)将从台湾鲷 肝脏及脾脏分离的巨噬细胞的细胞数目调整为1
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106细胞/ 毫升(cells/mL)后，分别于28℃预培养24小时，使细胞固 定于96孔细胞培养盘中。将不同浓度的海木耳萃取物(10、 100及100μg/mL)和固定好的细胞一起共培养12或24小时， 并以没有添加海木耳萃取物的细胞作为对照组(控制组)， 接着使用商业细胞活性测试试剂盒(cell counting Kit-8, CCK-8)观察细胞是否有细胞凋亡情形发生。
[0034]细胞安全性试验结果如图2所示，以不同浓度的 海木耳萃取物处理肝脏巨噬细胞(图2(A))和脾脏巨噬细 胞(图2(B))，仅有最高浓度(1000μg/mL)的海木耳萃取 物对细胞有些许活性抑制的情形，较低浓度的海木耳萃取物 对细胞皆无毒性。
[0035]实施例三、海木耳萃取物对免疫能力的影响测试 (一)
[0036]鱼类的免疫系统机制可分成特异性免疫系统 (specific immune system)及非特异性免疫系统 (non-specific immune system)，其中非特异性免疫系统又包 含由单核细胞(monocyte)及巨噬细胞(macrophage)等主导 的吞噬作用(phagocytosis)。本专利技术利用体外试验测试海木 耳萃取物对巨噬细胞，包含由台湾鲷肝脏及脾脏分离出来的 巨噬细胞、及THK细胞(Tilapia Head Kidney cell line，来自 罗非鱼头肾的黑色素巨噬细胞相关细胞系)的吞噬作用的影 响，作为评估海木耳萃取物是否能提高鱼类免疫能力的依据。
[0037]吞噬作用试验：使用L-15培养基(含10％胎牛 血清)将从台湾鲷肝脏及脾脏分离出来的巨噬细胞以及THK 细胞的细胞数目调整为1
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种海木耳萃取物的制备方法，其包含：步骤一、取海木耳(Sarcodia suiae)，在30～50℃的温度条件下进行萃取，得到海木耳萃取液；步骤二、将所述海木耳萃取液离心，过滤离心后所得的上清液，以获得海木耳萃取物。2.一种海木耳萃取物，其包含使用如权利要求1所述的方法制备而得的海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物具有提高鱼类抗病或免疫能力的功效。3.一种组合物，其包含如权利要求2所述的海木耳萃取物。4.如权利要求3所述的组合物，其中所述组合物为水产类医药组合物或饲料组合物。5.一种海木耳萃取物用于提高鱼类抗病或免疫能力的用途，其包含对...
【专利技术属性】
技术研发人员：李柏苍，李孟洲，冉繁华，许思维，
申请(专利权)人：台湾海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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