一种贵州疣螈多肽TK-CATH及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种贵州疣螈来源抗炎和促进伤口修复双功能多肽TK

【技术实现步骤摘要】
一种贵州疣螈多肽TK
‑
CATH及其编码基因和应用


[0001]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及一种贵州疣螈来源多肽TK
‑
CATH及其编码基因和应用。

技术介绍

[0002]多肽是一种由氨基酸组成的小分子蛋白质，具有多样的结构和活性。生物体内能够产生大量不同结构和活性的天然活性多肽分子，在生物体生存过程中发挥重要的作用。活性多肽具有分子量小、结构简单、活性强等优点，在不同领域具有很大的开发应用前景。
[0003]两栖动物皮肤裸露，没有鳞片、毛发等保护。其皮肤作为和外界接触的第一道屏障，通常会受到来自外界的侵袭，继而会使得皮肤遭受损伤，从而启动机体的自我修复显得至关重要。两栖动物皮肤富含大量天然活性多肽分子，到目前为止已从各种两栖类动物体内发现数百种不同的多肽分子，并且其数目还在不断增加。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种从贵州疣螈(Tylototriton kweichowensis)皮肤中发现的具有良好的抗炎和促进皮肤修复活性的新型多肽TK
‑
CATH，以及编码这条多肽的核酸序列。还发现了该多肽在多个领域中的新应用。
[0005]本专利技术所述贵州疣螈多肽TK
‑
CATH由55个氨基酸残基组成，分子量6196.99Da，等电点4.65，其氨基酸序列为：
[0006]Gly1Gly2Gln3Asp4Thr5Gly6Lys7Glu8Gly9Glu
10
Thr
11
Gly
12
Lys
13
Lys
14
Lys
15
Lys
16
Ser
17
[0007]Asp
18
Asn
19
Trp
20
Phe
21
Met
22
Asn
23
Leu
24
Leu
25
Asn
26
Lys
27
Phe
28
Leu
29
Glu
30
Leu
31
Ile
32
Gly
33
[0008]Leu
34
Lys
35
Glu
36
Ala
37
Gly
38
Asp
39
Asp
40
Ser
41
Glu
42
Pro
43
Phe
44
Cys
45
Phe
46
Thr
47
Cys
48
Ile
49
Phe
50
Asp
51
Met
52
Phe
53
Ser
54
Gln
55
(SEQ ID：1)，其中其中Cys
45
和Cys
48
之间形成一对分子内二硫键。
[0009]贵州疣螈多肽TK
‑
CATH编码基因通过从贵州疣螈皮肤提取总RNA，反转录合成第一链cDNA，采用长末端聚合酶链式反应(LD
‑
PCR)方法扩增第二链cDNA。
[0010]根据蝾螈科cathelicidins家族抗菌肽信号肽区的保守序列，人工设计合成正向引物5
’‑
TKCATH:5
’‑
ATGGAGGTCTGGCAGTGTGTGTTAT
‑3’
，反向引物为CLONTECH公司In
‑
Fusion SMARTer TM Directional cDNA Library Construction Kit中的3
’‑
PCR引物，其序列为5
’‑
CGGGGTACGATGAGACACCAT
‑3’
。PCR反应扩增，扩增完成后回收目的片段，将回收的目的片段连接到质粒载体上，转化感受态细胞，筛选挑取阳性菌落，进行核苷酸测序。
[0011]该贵州疣螈多肽TK
‑
CATH前体的编码基因由1011个核苷酸组成，其5
’
端至3
’
端序列为SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，编码贵州疣螈多肽TK
‑
CATH的为第385
‑
549位核苷酸。
[0012]贵州疣螈多肽TK
‑
CATH在制备皮肤创口修复药物中的应用。
[0013]贵州疣螈多肽TK
‑
CATH在制备抗炎药物中的应用。
[0014]贵州疣螈多肽TK
‑
CATH在制备保健品中的应用。
[0015]贵州疣螈多肽TK
‑
CATH在制备化妆品中的应用。
[0016]本专利技术中的贵州疣螈多肽TK
‑
CATH具有分子量小、人工合成简单、能促进皮肤创口修复、具有较强的抗炎活性且溶血活性极低的优点，具有广泛的应用前景。
附图说明
[0017]图1 TK
‑
CATH促进HaCAT细胞增殖；
[0018]图2 TK
‑
CATH促进HaCAT细胞迁移；
[0019]图3 TK
‑
CATH加速小鼠全层创面愈合；
[0020]图4 TK
‑
CATH对于LPS诱导的促炎因子分泌的影响。
具体实施方式
[0021]下面用实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0022]实施例1：
[0023]贵州疣螈多肽TK
‑
CATH编码基因克隆：
[0024]1)贵州疣螈皮肤总RNA提取：
[0025]①
取200mg贵州疣螈背部皮肤组织，放入研钵中加入液氮研磨成粉末，转移到EP管中，加入1ml总RNA提取缓冲液(Trizol，美国Life公司产品)，充分混匀，而后于4℃，12000rpm离心10min。
[0026]②
离心取上清，加入0.2ml氯仿溶液，剧烈混匀，室温放置10分钟，而后以4℃，12000rpm离心10分钟，弃除沉淀。
[0027]③
上清加入等体积的异丙醇，室温放置10分钟，以4℃，12000rpm离心10分钟，收集沉淀用75％(V/V)乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即为贵州疣螈皮肤总RNA。
[0028]2)贵州疣螈皮肤cDNA二链合成：采用CLONTECH公司In
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种贵州疣螈多肽TK
‑
CATH，其特征在于：所述的双功能多肽TK
‑
CATH由55个氨基酸残基组成，其氨基酸序列如SEQ ID：1所示，其中Cys
45
和Cys
48
之间形成一对分子内二硫键。2.根据权利要求1所述的贵州疣螈多肽TK
‑
CATH，其特征在于：所述的双功能多肽TK
‑
CATH的前体的编码基因由1011个核苷酸组成，自5
’
端至3
’
端的核苷酸序列如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：周江，罗暄巾，王义鹏，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：