药物对映异构体检测用衍生化处理方法及测定方法、应用技术

本发明专利技术公开了药物对映异构体检测用衍生化处理方法及测定方法、应用。将衍生化处理方法用于磷酸西格列汀原料药及制剂中异构体检测时，采用高效液相色谱法进行检测，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以三乙胺水溶液为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为每分钟1.5ml，检测波长为340nm；样品配制采用反相系统溶解，并采用Marfey试剂进行衍生化处理。本发明专利技术不仅磷酸西格列汀原料药与对映异构体具有较高分离度，且能解决现有检测技术供试品配制时间较长、重现性较差、成本高的问题，其专属性强、准确性强、精密度高、耐用性好，且操作方便，在实际生产中能够有效控制原料药及制剂的质量。原料药及制剂的质量。原料药及制剂的质量。

【技术实现步骤摘要】
药物对映异构体检测用衍生化处理方法及测定方法、应用


[0001]本专利技术涉及药物分析
，具体涉及药物对映异构体检测用衍生化处理方法及测定方法、应用。

技术介绍

[0002]EP10.0、USP40中收载了磷酸西格列汀原料药及制剂中对映异构体的检测方法，但在实际检测中仍存在问题，对映异构体和主峰的虽然分离度较好，但采用手性分离的色谱柱柱为硅胶表面涂布直链淀粉(色谱柱250mm
×
4.6mm，5μm)的正相型色谱柱，而色谱条件中流动相中加入0.1％的水，并且供试品配制时采用的稀释剂也加入了10％的水。众所周知，正相手性柱不能使用水作为流动相，也不能用水溶解样品。否则柱子也会受到损伤。在磷酸西格列汀原料药及制剂实际检测中，尤其是检测制剂样品时，手性色谱柱柱效极易降低，柱压极易升高，导致色谱柱无法使用，会影响对映异构体的检测。从而导致检测成本增加。
[0003]公告号为CN 109580833 A的专利公开了一种磷酸西格列汀原料及制剂中对映异构体的测定方法，其公开了一种采用手性冠醚硅胶为填充剂，以高氯酸溶液和乙腈混合溶液为流动相；样品配制用水溶剂磷酸西格列汀原料及制剂。该方法采用手性冠醚硅胶为填充剂，避免样品配制用水对色谱柱的损伤。该方法快速，整个分离过程15min，且两种组分的分离度均大于1.5，符合相关色谱法对分离度的要求。但该方法仍不是很好，方法中“取磷酸西格列汀原料溶于稀释剂中并稀释至浓度1mg/mL的溶液，再将该溶液直接放入
‑
80℃放置2h，然后在25
‑
28℃下放置1h，得供试品溶液。供试品配制时间较长，重现性较差，手性冠醚硅胶为填充剂的色谱柱价格昂贵，检测成品仍较高。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供药物对映异构体检测用衍生化处理方法，将该衍生化处理方法用于磷酸西格列汀原料药及制剂中S
‑
对映异构体检测，不仅原料药与对映异构体具有较高分离度，且能解决现有检测技术供试品配制时间较长、重现性较差、成本高的问题。
[0005]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0006]药物对映异构体检测用衍生化处理方法，向待衍生化溶液中加入采用Marfey试剂溶液，再加入碳酸氢钠溶液，密封反应瓶，将反应瓶在35℃～55℃下恒温水浴0.5小时～1.5小时，进行混合和衍生，再加入盐酸溶液，充分混合以停止反应。
[0007]药物对映异构体检测用衍生化处理方法用于磷酸西格列汀原料药及制剂中对映异构体的检测。
[0008]磷酸西格列汀原料药及制剂中对映异构体的测定方法，采用高效液相色谱法进行检测，色谱条件为：
[0009]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以三乙胺水溶液为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为每分钟1.5ml
±
0.1ml，检测波长为340nm
±
2nm；
[0010]样品配制采用反相系统溶解，并采用Marfey试剂进行衍生化处理。
[0011]本专利技术所述Marfey试剂为手性试剂，为[Nα
‑
(2,4
‑
二硝基
‑5‑
氟苯基)
‑
L
‑
丙氨酰胺]。
[0012]本专利技术的样品配制采用反相系统溶解磷酸西格列汀原料及制剂，通过引入手性试剂Marfey试剂[Nα
‑
(2,4
‑
二硝基
‑5‑
氟苯基)
‑
L
‑
丙氨酰胺]对样品进行柱前衍生，不仅能够有效缩短样品配制时间，且重现好，同时，供试品溶液具有较高的稳定性。
[0013]本专利技术采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，相比手性冠醚硅胶，具有价格低廉的优势降低了成本。
[0014]综上，本专利技术与现有技术相比，不仅原料药与杂质具有较高分离度，且能解决现有检测技术供试品配制时间较长、重现性较差、成本高的问题。
[0015]且本专利技术专属性强、准确性强、精密度高、耐用性好，且操作方便，在实际生产中能够有效控制原料药及制剂的质量。
[0016]进一步地，流动相A为0.5％～1.0％三乙胺水溶液，并用采用酸性溶液调节pH值至1.0～3.0。
[0017]进一步地，酸性溶液为磷酸。
[0018]进一步地，梯度洗脱的具体过程如下表所示：
[0019][0020]进一步地，样品配制采用稀释剂溶解样品，所述样品包括供试品、磷酸西格列汀对照品和西格列汀S
‑
对映异构体对照品。
[0021]进一步地，稀释剂为水和乙腈按体积比1:1混合的溶液。
[0022]进一步地，衍生化处理的具体过程如下：
[0023]将待衍生化溶液转移至反应瓶中，加入采用Marfey试剂溶液，再加入碳酸氢钠溶液，密封反应瓶，将反应瓶在35℃～55℃下恒温水浴0.5小时～1.5小时，进行混合和衍生，再加入盐酸溶液，充分混合以停止反应。
[0024]碳酸氢钠溶液提供反应条件，加入盐酸溶液是为了终止反应。
[0025]进一步地，Marfey试剂溶液与待衍生化溶液的摩尔比为1～2，所述Marfey试剂溶液的浓度为5g/L。
[0026]进一步地，碳酸氢钠溶液与盐酸溶液的摩尔比为1:1，所述盐酸溶液与碳酸氢钠溶液的浓度均为1mol/L。
[0027]Marfey试剂加入量对成分含量影响如表1所示：
[0028]表1
[0029]Marfey试剂加入量主成分含量(％)异构体含量(％)0.8ml99.7280.2721.0ml99.7290.2711.2ml99.7280.2721.5ml99.7280.272
[0030]由表1可知，由于Marfey试剂的加入量0.8ml是摩尔比1:1的加入量，当加入量过量时，对检测结果基本无影响，但是，Marfey试剂过少可能影响检测结果中异构体的含量的准确性。
[0031]进一步地，包括以下步骤：
[0032]S1、样品配制：
[0033]供试品溶液：取供试品，用稀释剂溶解并稀释制成每1ml中含西格列汀6mg的溶液，摇匀，取适量离心，取上清液；
[0034]系统适用性溶液：分别精密称取磷酸西格列汀对照品和西格列汀异构体对照品，用稀释剂溶解并稀释制成每1ml中含西格列汀6mg、异构9μg的混合溶液，
[0035]所述稀释剂为水和乙腈按体积比1:1混合的溶液；
[0036]S2、衍生化处理：
[0037]将待衍生化溶液转移至反应瓶中，加入采用于Marfey试剂溶液，再加入碳酸氢钠溶液，密封反应瓶，将反应瓶在35℃～55℃下恒温水浴0.5小时～1.5小时，进行混合和衍生，再加入盐酸溶液，充分混合以停止反应；
[0038]所述待衍生化溶液包括供试品溶液、系统适用性溶液和空白溶液；
[0039]衍生化处理中温度对成分含量影响如表2所示：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.药物对映异构体检测用衍生化处理方法，其特征在于，向待衍生化溶液中加入采用Marfey试剂溶液，再加入碳酸氢钠溶液，密封反应瓶，将反应瓶在35℃～55℃下恒温水浴0.5小时～1.5小时，进行混合和衍生，再加入盐酸溶液，充分混合以停止反应。2.如权利要求1所述药物对映异构体检测用衍生化处理方法用于磷酸西格列汀原料药及制剂中S
‑
对映异构体的检测。3.磷酸西格列汀原料药及制剂中S
‑
对映异构体的测定方法，采用高效液相色谱法进行检测，其特征在于，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以三乙胺水溶液为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为每分钟1.5ml
±
0.1ml，检测波长为340nm
±
2nm；样品配制采用反相系统溶解，并采用Marfey试剂进行权利要求1所述的衍生化处理。4.根据权利要求3所述的西格列汀原料药及制剂中S
‑
对映异构体的测定方法，其特征在于，所述流动相A为0.5％～1.0％三乙胺水溶液，并用采用酸性溶液调节pH值至1.0～3.0。5.根据权利要求4所述的西格列汀原料药及制剂中S
‑
对映异构体的测定方法，其特征在于，所述酸性溶液为磷酸。6.根据权利要求3所述的西格列汀原料药及制剂中S
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对映异构体的测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱的具体过程如下表所示：7.根据权利要求3所述的西格列汀原料...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯舟，刘瑞霖，赵永龙，熊尧，樊娇娇，
申请(专利权)人：四川制药制剂有限公司，
类型：发明
国别省市：