一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法和试剂盒技术

本发明专利技术属于生物医药检测技术领域，具体涉及一种针对性的检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法和试剂盒。该方法基于细菌在M9基本培养基中不能生长的特性，使细菌利用待测物质，结合不同浓度抗生素对细菌杀灭情况不同，细菌残存情况呈现相应梯度变化，因而可以用来检测化合物提高抗生素对细菌的杀菌效率，相比较于现有的最小抑菌浓度(MIC)方法，可以准确、有效评价促进抗生素杀菌效率提高的化合物的作用；并且操作简单，结果易观察，比利用试管法来检测化合物提高抗生素对细菌的杀菌效率，具有更好的操作性。有更好的操作性。有更好的操作性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医药检测
更具体地，涉及一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)是测量抗菌药物的抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18至24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度，并广泛用于对细菌耐药性和抗生素杀菌效率的评价中。MIC的检测原理是利用抗生素能够抑制在特定培养基中生长的细菌，通过比较细菌的数量，确定抗生素的最低抑菌浓度。实验时，加入肉眼无法看见的细菌数量：如果抗生素抑制其生长，细菌难以生长，则无法观察到细菌；如果抗生素不能抑制其生长，细菌可以生长，则可以观察到细菌；其抑制细菌至无法观察的最小抗生素浓度即为最低抑菌浓度。
[0003]如中国专利申请CN105358982A公开了一种用于快读确定细菌对抗生素的敏感性或耐药性的方法，该方法在MIC检测原理的基础上，基于对相应于该细胞壁合成抑制抗生素的剂量的细胞增大的评价，来快速确定细菌对抗生素的敏感性或耐药性。但是，基于目前常规或改进的MIC检测方法，对于促进抗生素杀菌效率提高的物质都较难测定。如新近研究发现一些生物细胞代谢物(往往指分子量小于1000的化合物)可以显着增加抗生素的杀菌作用，并且都已经通过实验证明这些生物细胞代谢物具有促进抗生素杀菌的效果，但是采用常规MIC检测方法检测时，这些生物细胞代谢物添加后，对抗生素的MIC却没有明显的影响。因此，迫切需要提供一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术缺少测定促进抗生素杀菌效率提高的物质方法的缺陷和不足，提供一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法。
[0005]本专利技术的目的是提供一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法。
[0006]本专利技术另一目的是提供所述检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法构建的试剂盒。
[0007]本专利技术另一目的是提供所述试剂盒在检测促进抗生素杀菌效率提高的物质中的应用。
[0008]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0009]专利技术人在实践中发现了许多小分子细胞代谢物(分子量小于1000的化合物)可以显著增加抗生素的杀菌作用，达到协同提高杀菌效率的效果。但是当采用常规的MIC方法测定对比小分子细胞代谢物和抗生素杀菌效率及单独抗生素杀菌效率时，其效果无明显的差异。专利技术人经过大量的创造性研究发现，常规的MIC方法采用的是富含营养的LB培养基，细菌已经从LB培养基中获取充足的营养，往往不会利用待测的小分子细胞代谢物，所以采用常规的MIC方法无法测出小分子细胞代谢物是否可以促进抗生素杀菌效率提高。因此，本发
明提供了以下专门检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法。
[0010]一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法，将肉眼可见的细菌、待测物质、抗生素加入M9培养基中培养作为实验组，以相同条件下未加入待测物质作为对照组；肉眼无法观察到细菌的最低抗生素浓度为最低杀菌浓度(MKC，minimum killing concentration)，对照组最低杀菌浓度/实验组最低杀菌浓度≥2判定待测物质促进抗生素杀菌效率提高，为阳性。
[0011]本专利技术一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法，以仅能维持细菌正常生存而无法生长，组分明确且不含营养组分的M9培养基作为测定时的培养基，加入数量多的肉眼可见的细菌，测定待测物质和抗生素的最低杀菌浓度(而不是常规MIC方法中加入少量肉眼无法观察的细菌，测定其最低抑菌浓度，两者测定原理存在显著的差异)。在此培养条件下，细菌没有其他营养组分可以摄取，只能依靠添加的待测物质，细菌应用待测物质，即可体现其是否可以促进抗生素杀菌效率提高。检测时，如果抗生素杀灭全部或部分细菌，则肉眼无法观察到细菌；如果抗生素不能杀灭全部细菌，则肉眼可以观察到细菌。
[0012]另外，需要说明的是本专利技术建立的方法与目前检测最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration，MBC)的方法并不相同。MBC是指能够杀灭培养基内细菌(即杀死99.9％供试微生物)的最低浓度，其往往是在采用微量肉汤稀释酶标板法测定MIC的基础上，对最低抑菌浓度以下的孔点板进行活菌计数，加入的细菌数量和采用的培养基与MIC测定一致，因此，与本申请的原理和方法均不相同。
[0013]进一步地，所述培养的条件为选择细菌的最适生长温度，孵育8～24小时。
[0014]更进一步地，所述肉眼可见的细菌计数为5
×
106CFU～4
×
107CFU。
[0015]进一步地，所述细菌包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、肠球菌和所述细菌的耐药菌。
[0016]更进一步地，所述抗生素为裂解细菌的杀菌型抗生素，而非抑制细菌生长型抗生素。
[0017]优选地，所述抗生素包括青霉类抗生素、头孢类抗生素、碳青霉烯类抗生素；所述抗生素可以裂解杀死细菌。
[0018]优选地，所述青霉类抗生素包括但不限于氨苄青霉素、阿莫西林或替莫西林。
[0019]优选地，所述头孢类抗生素包括但不限于头孢唑林、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、头孢吡肟、头孢匹罗、头孢噻肟或头孢克肟。
[0020]优选地，所述碳青霉烯类抗生素包括但不限于美罗培南。
[0021]进一步地，所述待测物质为生物活性小分子，分子量小于1000。如氨基酸、葡萄糖、果糖和丙酮酸等。
[0022]进一步地，所述M9培养基由选择Na2HPO4、KH2PO4、NH4Cl、NaCl、K2HPO4、KH2PO4和(NH4)2SO4中两种以上盐与水制成。
[0023]另外的，本专利技术还提供了一种所述检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法构建的试剂盒。
[0024]另外的，本专利技术还提供了所述试剂盒在检测、筛选促进抗生素杀菌效率提高的物质中的应用。
[0025]本专利技术具有以下有益效果：
[0026]本专利技术首创性地提供了一种针对性的检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法，基于细菌在M9基本培养基中不能生长的特性，使细菌利用待测物质，结合不同浓度抗生素对细菌杀灭情况不同，细菌残存情况呈现相应梯度变化，因而可以用来检测化合物提高抗生素对细菌的杀菌效率，相比较于现有的最小抑菌浓度(MIC)方法，可以准确、有效评价促进抗生素杀菌效率提高的化合物的作用；并且操作简单，结果易观察，比利用试管法来检测化合物提高抗生素对细菌的杀菌效率，具有更好的操作性。
附图说明
[0027]图1为实施例1中谷氨酰胺可提高临床耐药大肠埃希菌对氨苄青霉素的敏感性实验数据统计图。
具体实施方式
[0028]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测促进抗生素杀菌效率提高的物质的方法，其特征在于，将肉眼可见的细菌、待测物质、抗生素加入M9培养基中培养作为实验组，以相同条件下未加入待测物质作为对照组；肉眼无法观察到细菌的最低抗生素浓度为最低杀菌浓度，对照组最低杀菌浓度/实验组最低杀菌浓度≥2判定待测物质促进抗生素杀菌效率提高，为阳性。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述培养的条件为选择细菌的最适生长温度，孵育8～24小时。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述肉眼可见的细菌计数为5
×
106CFU～4
×
107CFU。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述细菌包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、...

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠，彭博，彭宣宪，蒋明，陶建军，项娟娟，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：