GPX4、NOX1和ACSL4在结直肠癌预后评价上的应用制造技术

本发明专利技术涉及GPX4、NOX1和ACSL4在结直肠癌预后评价上的应用。以所述GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物，基于GPX4、NOX1和ACSL4细胞表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价。与现有技术相比，本发明专利技术通过基于GPX4，NOX1和ACSL4的表达情况对结直肠癌评价的方法，即首先制成肿瘤组织芯片，然后进行免疫组化实验、免疫评分，根据免疫评分进行分组，最后基于GPX4，NOX1和ACSL4的表达情况和结直肠癌患者的预后建立铁死亡评分，针对不同染色评分水平可具体预测结直肠癌患者的3年，5年及7年生存率。通过本发明专利技术的方法进行统计与分析，基于GPX4、NOX1和ACSL4细胞表达在结直肠癌细胞浆的表达可以显著反映结直肠癌患者的预后，并具有统计学差异。有统计学差异。有统计学差异。

【技术实现步骤摘要】
GPX4、NOX1和ACSL4在结直肠癌预后评价上的应用


[0001]本专利技术属于结直肠癌预后评价
，尤其是涉及一种GPX4、NOX1和ACSL4在结直肠癌预后评价上的应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌作为常见的消化道恶性肿瘤，对人民的健康威胁不容小视。根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的全球肿瘤流行病统计数据(GLOBOCAN 2020)估计，2020年全球结直肠癌新发病例193.16万，死亡病例93.52万，分别位于所有恶性肿瘤的第三位和第二位。近几十年来，随着人民生活水平的提高及饮食结构的改变，结直肠癌的发生比例亦逐渐增多。
[0003]随着对结直肠癌研究的不断深入，结直肠癌预后已经较过去几十年呈改善趋势。然而，对于结直肠癌临床诊治而言，肿瘤分期依旧是重要的预后因素，早期结直肠癌和中晚期结直肠癌的预后存在较大异质性。
[0004]中国专利CN107622800A公开了一种用于结直肠癌肝转移疗效预测的数学模型，其给出了一个公式，公式涉及的因素包括ATP6V1B1、CUL9、ERBB2、LY6G6D、RBMXL3、PTCH1这六个基因的基因型，该专利说明对西妥昔单抗敏感人群进行筛选后，客观反应率提升显著，从而可以更好的用于治疗方式的预测。
[0005]中国专利CN103954757B公开了一种通过TEAD4细胞核阳性表达情况对结直肠癌评价的方法，即首先制成肿瘤组织芯片，然后进行免疫组化实验、免疫评分，根据免疫评分进行分组，最后按照TEAD4的细胞核着染情况将患者分为TEAD4细胞核阳性表达组和TEAD4细胞核阴性表达组，然后运用统计学方法分析两组病人的临床特征以及总生存期的差异。该种通过结直肠癌免疫学指标TEAD4细胞核阳性表达情况对结直肠癌患者的临床特征和总体预后进行评价的方法，即根据结直肠癌患者肿瘤组织中TEAD4细胞核阳性表达的情况可以直接确定患者的临床特征和预后信息。
[0006]然而现有技术中，并没有通过结直肠癌标志物基于GPX4、NOX1和ACSL4细胞表达对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价的方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种GPX4、NOX1和ACSL4在结直肠癌预后评价上的应用。
[0008]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0009]本专利技术提供一种GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，所述GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物，基于GPX4、NOX1和ACSL4细胞表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价。
[0010]本专利技术提供一种GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，具体方法为：
[0011]a.制作蜡块和组织芯片；
[0012]b.组织芯片包埋；
[0013]c.脱蜡水化；
[0014]d.抗原修复并封闭；
[0015]e.GPX4，NOX1，ACSL4一抗抗体过夜孵育；
[0016]f.洗片后二抗室温孵育，显色放大液；
[0017]g.孵育后DAB显色；
[0018]h.苏木精染核，固定；
[0019]i.脱水至腊，切片保持；
[0020]j.结果读片；
[0021]k.统计分析：所有数据均使用SPSS统计软件包(22.0；SPSS Inc.，Chicago，Illinois，USA)进行统计分析，OS的计算及分析使用Kaplan
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Meier方法进行，危险因素表示为危险比[HR,95％置信区间(Confidence interval，CI)]，P值小于0.05被定义为有统计显著性。
[0022]在本专利技术的一个实施方式中，蜡块具体制作方式如下：材料新鲜；所取的组织块的大小约为2.0cm
×
2.0cm
×
0.3cm；用刀片切取大小约为0.8cm
×
0.8cm
×
0.3cm的组织块。放入一次性塑料包埋框中，记号笔做好标记，脱水步骤是将含有组织的塑料包埋框依顺序放入不同浓度梯度的乙醇中；通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍；组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。将塑料包埋框放入烘箱中含有熔化石蜡的容器内。融化后的石蜡倒入不锈钢包埋框，打开塑料包埋框，用加温的镊子将浸蜡后的组织材料块切面朝下放入不锈钢包埋框，待蜡液表层凝固即迅速冷却，完全凝固后即做成含有组织块的蜡块。制作的蜡块应平整，自此蜡块制作完成。
[0023]在本专利技术的一个实施方式中，组织芯片包埋的方法为：
[0024]挑选出具有随访资料的不同发展阶段的肿瘤组织蜡块，根据HE切片对石蜡标本中有代表性的点进行标记，包括典型的肿瘤和相应的正常组织，以构建肿瘤组织芯片；TMA受体蜡块制备：取97.5克莱卡石蜡+2.5克蜂蜡(2.5％)混合，制成长36mm*宽26mm*高17mm的空白蜡块，在该蜡块20mm
×
16mm范围内设计10
×
7点组织陈列。组织四周预留0.5cm
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0.7cm空间，用组织仪打孔制成TMA蜡块；在组织芯片制作机上用细针对受体蜡块打孔，孔径以1～1.5mm比较适宜，同样在供体蜡块上标记的相应部位打孔采集组织芯。孔径同样为1～1.5mm；将组织芯转移到受体模块的孔中，每个组织芯之间的间距以0.2mm为佳；为了防止在打点、切片、染色或免疫组化过程中出现漏点，滑片及掉片现象，每个样本可以上样1
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2个点；将构建好的TMA芯片蜡块放在相宜的塑料盒子内，并严密固定防止移位。放入55℃温箱中约10分钟，在蜡将要完全溶解前，取出室温下冷却，使受体模块的蜡与新插入的小圆柱状组织溶为一体，取下蜡块，于4℃冰箱中保存备用；切片前，蜡块需在4℃中预冷4h左右，然后夹在切片机上进行修正，等修到全部组织完整为止。用
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20℃预冷冰袋贴在蜡块上5
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10min左右，快速连续切片30
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50张左右，再用冰袋冷冻组织块，或直接在冰冻切片机内进行，直至将组织切完为止。将4μm连续切片分别漂在凉水中，让其自然展开，按顺序将切片转移至45℃的温水中展片2min左右，将其贴在浸有APES切片黏合剂的载玻片上晾干，60℃中烤片3min左右，58℃中继续烤片18h，
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20℃保存备用。
[0025]在本专利技术的一个实施方式中，脱蜡水化的方法为：脱蜡利用二甲苯，水化通过梯度的酒精进行，具体为：组织切片依次经过二甲苯洗涤2次，每次10分钟、无水乙醇洗涤2次，每次5分钟、95％酒精洗涤2次，每次5分钟、75％酒精洗涤2次，每次5分钟，使组织切片表面的石蜡脱掉并充分水化，之后用自来水冲洗切片1min，用PBS缓冲液洗1分钟
×
3次。
[0026]在本专利技术的一个实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，所述GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物，基于GPX4、NOX1和ACSL4细胞表达情况对结直肠癌患者的临床特征和预后进行评价。2.根据权利要求1所述的一种GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，具体方法为：a.制作蜡块和组织芯片；b.组织芯片包埋；c.脱蜡水化；d.抗原修复并封闭；e.GPX4，NOX1，ACSL4一抗抗体过夜孵育；f.洗片后二抗室温孵育，显色放大液；g.孵育后DAB显色；h.苏木精染核，固定；i.脱水至腊，切片保持；j.结果读片；k.统计分析：所有数据均使用SPSS统计软件包进行统计分析，OS的计算及分析使用Kaplan
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Meier方法进行，危险因素表示为危险比[HR,95％置信区间(Confidence interval，CI)]，P值小于0.05被定义为有统计显著性。3.根据权利要求2所述的一种GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，根据多因素分析结果，应用R语言软件建立基于Logistic回归的淋巴结转移概率预测列线图。4.根据权利要求2所述的一种GPX4、NOX1和ACSL4作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用，其特征在于，采用校准度曲线评价模型预测结局发生概率与实际观测概率一致程度，以一致性指数表示。5.一种验证GPX4、NOX1、ACSL4细胞表达情况与结直肠癌患者的临床特征和预后生存率的关系的方法，其特征在于，首先制成肿瘤组织芯片，然后进行免疫组化实验、免疫评分，根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕洋，汤文涛，郑鹏，徐宇秋，林奇，许剑民，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：