一种液相色谱法测定饲料中六种抗球虫药物含量的方法技术

本发明专利技术涉及鸡饲料、预混料和饲料添加剂中氯羟吡啶、二硝托胺、尼卡巴嗪、磺胺喹恶啉、盐酸氯苯瓜和地克珠利6种抗球虫药的含量检测方法，主要步骤包括用0.1%三氯乙酸乙腈提取，50 mg PSA净化，甲醇：5 mmol/L乙酸铵水溶液体积比为8:2作为复溶液复溶，采用Agilent Extend

【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱法测定饲料中六种抗球虫药物含量的方法


[0001]本专利技术属于饲料中抗球虫类药物检测方法的构建，具体地涉及氯羟吡啶、二硝托胺、磺胺喹恶啉、氯苯胍、尼卡巴嗪和地克珠利在鸡饲料、预混料和饲料添加剂中的含量检测。

技术介绍

[0002]球虫病主要寄生于宿主肠道(鸡、鸭、鸽、牛、羊等)，肝脏(兔)，肾脏(鹅)等位置对其造成不同程度的损伤，是禽类养殖业的重大疾病之一，每年会造成上亿美元的损失。抗球虫药主要用于球虫病的预防用药，有提高饲料利用率，降低继发疾病风险，促生长等作用，难免会有不法商家利用此特性谋取更多的利益，导致抗球虫药的滥用。但是抗球虫药物有较大的的毒性，会随着食物链进入人体，也引起了极大的重视。
[0003]食品安全早已成为国际备受关注的问题，我国也制定了一些相关的政策要求。中华人民共和国农业农村部公告第246号明确规定废止仅有促生长用途的药物饲料添加剂等品种质量标准，允许添加地克利、尼卡巴嗪等种抗球虫药物，但要严格要求其质量标准。作为仅有的一类允许添加的药物，作为预混料添加在饲料中且作为食物链的源头对其质量控制尤为重要。只有严格按照国家标准添加，才能有效的推迟抗球虫药的耐药性及可以有效避免其毒性作用。国家标准多为单一药物的检测方法，相同时检测出多种药物需消耗大量的时间和费用。
[0004]饲料中多药都是高效液相色谱
‑
串联质谱检测，由于质谱仪的机制效应比较复杂，并且预混料中原料药的含量较高经多次稀释后检测，过程中难免造成药物的损失，影响最终检测结果的准确性，并且质谱检测方法较复杂对仪器要求较高，基层饲料兽药监察部门或者普通的药厂等不一定具备完善的仪器设备。反之，高效液相色谱常用于药物检测，该方法灵敏度高，操作简单，相比之下节约时间和成本，用于测高浓度的原料药检测准确性较质谱仪高。目前研究报道中未见利用高效液相色谱法对饲料中多种抗球虫原料药的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于通过构建高效液相方法检测鸡饲料、预混料和饲料添中氯羟吡啶、二硝托胺、磺胺喹恶啉、盐酸氯苯胍、尼卡巴嗪和地克珠利的含量。
[0006]本专利技术的目的是采取以下技术方案达到的：
[0007]一种液相色谱法测定饲料中六种抗球虫药物含量的方法，包括以下步骤：
[0008](1)准确称取1
±
0.01g研磨均匀的饲料于15mL聚丙烯离心管中，加入适量混合标准工作液，涡旋混匀后室温静置30min，待提取；
[0009](2)向离心管中加入5mL 0.1％三氯乙酸乙腈溶液，充分涡旋，超声10min，震荡30min，10000rpm离心10min，将上清液转移至另一个离心管中，残渣用5mL 0.1％三氯乙酸乙腈溶液重复提取一次，混匀离心后合并上清液待净化；
[0010](3)取1mL上述溶液转移至提前装有50mg PSA填料的2mL塑料离心管中，涡旋1min，10000rpm的条件下离心10min；
[0011](4)取净化后的1mL溶液至玻璃管中吹干，用甲醇与5mmol/L乙酸铵水溶液体积比为8:2的溶液复溶，经0.22μm滤膜待检测；
[0012](5)使用Agilent 1260高效液相色谱系统进行分析，色谱分离选用Agilent Extend
‑
C18色谱柱作为分析柱；流动相A为甲醇，B为5mmol/L乙酸铵水溶液，梯度洗脱；25℃；检测波长270nm和340nm，流速1mL/min；进样量20μL。
[0013]所述乙酸铵水溶液含0.5％甲酸。
[0014]所述Agilent Extend
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C18色谱柱：250mm
×
4.6mm i.d.,5μm。
[0015]本专利技术旨在建立一种新的、简便的、重复性好的高效液相色谱检测法快速测定鸡饲料、预混料和饲料添加中六种抗球虫药的分析方法。
附图说明
[0016]图1是不同提取液。
[0017]图2是不同含量三氯乙酸乙腈。
[0018]图3是不同吸附剂。
[0019]图4是不同用量PSA。
[0020]图5是不同复溶液。
[0021]图6
‑
13是6种药物在不同基质中的色谱图。
[0022]其中图5中：A、乙腈：5mmol/L乙酸铵水溶液体积比为8:2；B、乙腈：5mmol/L乙酸铵水溶液体积比为5:5；C、甲醇：5mmol/L乙酸铵水溶液体积比为2:8；D、甲醇：5mmol/L乙酸铵水溶液体积比为5:5；E、甲醇：5mmol/L乙酸铵水溶液体积比为8:2。
[0023]图6
‑
13中：1号峰氯羟吡啶、2号峰二硝托胺、3号峰磺胺喹恶啉、4号峰盐酸氯苯胍、5号峰尼卡巴嗪、6号峰地克珠利。
具体实施方式
[0024]下面通过实施例和附图对本专利技术加以说明。
[0025]一种液相色谱法测定饲料中六种抗球虫药物含量的方法，包括以下步骤：准确称取1g(
±
0.01g)研磨均匀的饲料于15mL聚丙烯离心管中，加入适量混合标准工作液，涡旋混匀后室温静置30min，待提取。向离心管中加入5mL 0.1％三氯乙酸乙腈溶液，充分涡旋，超声10min，震荡30min，10000rpm离心10min，将上清液转移至另一个离心管中，残渣用5mL 0.1％三氯乙酸乙腈溶液重复提取一次，混匀离心后合并上清液待净化。取1mL上述溶液转移至提前装有50mg PSA填料的2mL塑料离心管中，涡旋1min，10000rpm的条件下离心10min。取净化后的1mL溶液至玻璃管中吹干，用甲醇：5mmol/L乙酸铵水溶液(含0.5％甲酸)＝8:2溶液复溶，经0.22μm滤膜待检测。使用Agilent 1260高效液相色谱系统(Agilent，DAD)进行分析，色谱分离选用Agilent Extend
‑
C18(250mm
×
4.6mm i.d.,5μm)色谱柱作为分析柱；流动相A为甲醇，B为5mmol/L乙酸铵水溶液(含0.5％甲酸)，梯度洗脱，洗脱梯度如表1；柱温25℃；检测波长270nm和340nm，流速1mL/min；进样量20μL。
[0026]表1洗脱梯度
[0027][0028]本专利技术是通过以下实验得出的：
[0029]1、溶液及样品制备：
[0030](1)标准储备液(1mg/mL)：称取二硝托胺对照品，置于10mL容量瓶中，用甲醇配制成1mg/mL的标准储备液；分别称取氯羟吡啶、尼卡巴嗪、磺胺喹恶啉、氯苯胍和地克珠利对照品，分别置于10mL容量瓶中，用少量二甲基亚砜(DMSO)完全溶解后乙腈定容至10mL配制成1mg/mL的标准储备液；标准储备液置于
‑
20℃避光保存，有效期6个月。
[0031](2)标准工作液(100μg/mL)：将上述标准储备液稀释后，分别准确移取1mL于10mL容量瓶中用色谱乙腈定容本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱法测定饲料中六种抗球虫药物含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）准确称取1
ꢀ±ꢀ
0.01 g研磨均匀的饲料于15 mL聚丙烯离心管中，加入适量混合标准工作液，涡旋混匀后室温静置30 min，待提取；（2）向离心管中加入5 mL 0.1% 三氯乙酸乙腈溶液，充分涡旋，超声10 min，震荡30 min，10000 rpm离心10 min，将上清液转移至另一个离心管中，残渣用5 mL 0.1% 三氯乙酸乙腈溶液重复提取一次，混匀离心后合并上清液待净化；（3）取1 mL上述溶液转移至提前装有50 mg PSA填料的2 mL塑料离心管中，涡旋1 min，10000 rpm的条件下离心10 min；（4）取净化后的1 mL 溶液至玻璃管中吹干，用甲醇与5 mmol/L乙酸铵水溶液体积比为8...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕世明，廖书丹，宋旭琴，谭艾娟，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：