一种特异性识别巨细胞病毒的T细胞受体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及细胞免疫技术领域，尤其涉及一种特异性识别巨细胞病毒的T细胞受体及其应用。所述T细胞受体包含可变区Va和可变区Vβ，所述可变区Va的CDR3的氨基酸序列包括：ILSNNNDMR；所述可变区Vβ的CDR3的氨基酸序列包括：AWSVSDLLNTEAF。本发明专利技术提供的T细胞受体可以特异性结合HLA

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别巨细胞病毒的T细胞受体及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞免疫
，尤其涉及一种特异性识别巨细胞病毒的T细胞受体及其应用。

技术介绍

[0002]T细胞受体(T cell receptor,TCR)为免疫球蛋白超家族的异二聚体细胞表面蛋白，其与参与调节信号转导的CD3复合物的无变异蛋白相关联。
[0003]TCR存在α和β链的形式，其结构上相似但是具有完全不同的解剖学定位和可能的功能。天然异质二聚体α和β链TCR的胞外部分由两条多肽组成，每条多肽具有膜近侧恒定区和膜远侧可变区。每个恒定区和可变区均包括链内二硫键。本文所用的术语“可变区”应理解为包括某给定TCR的所有不包含在TCRα链的TRAC基因或TCRβ链的TRBC1或TRBC2基因所编码的恒定区内的氨基酸。可变区含有类似于抗体的互补决定区(complementarity determining region,CDR)的高度多态环。本文所使用的术语”特异性”或“抗原特异性”或对指定抗原”特异”指抗原识别构建体能特异性地结合并且免疫地识别所述抗原。过继性细胞免疫治疗(ACT)通过体外激活和扩增肿瘤特异或非特异性杀伤细胞达到抗肿瘤、抗感染或者治疗自身免疫疾病的目的。在体外利用病毒或者非病毒载体将特定抗原的特异TCR转导进入患者自体T细胞后，进一步在体外将特异性T细胞扩增至108-109级别后回输至患者体内，以达到治疗目的。
[0004]巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)是一种疱疹病毒组DNA病毒，由于被感染的细胞会发生肿大，因此被命名为巨细胞病毒。由于CMV感染的细胞还会形成巨大的核内包涵体，亦被称细胞包涵体病毒。CMV是人类最常见病原体之一，在人群中广泛流行，其在成人群体中的感染率可以高达50％-100％。在免疫系统正常的个体中，CMV的感染后通常不会出现任何临床症状，但是在无症状原发感染后，CMV病毒常常不能被完全清除，而在患者体内形成持续性地潜伏感染。如果携带CMV的个体免疫系统的功能被抑制，如艾滋病发病、器官移植后接受免疫抑制治疗，潜伏的CMV感染再度活化可导致严重甚至致死性疾病。
[0005]目前，针对CMV病毒，现有技术通常利用CMV特异性TCR制备TCR-T细胞，将其回输患者后，则可让CMV再活化的患者获得有效的即时抗病毒能力，清除本次再活的病毒。而接受CMV特异性TCR-T回输的患者还能获得持久的抗病毒能力，能显著降低随后再活化的机率。此外CMV的感染还可能与部分肿瘤的发病和进展有关。例如，一半的胶质细胞瘤组织中，可以检测到CMV-pp65抗原；初步的临床研究也显示CMV-pp65疫苗可延长脑胶质瘤患者的无进展生存期及总体生存率。因此，靶向CMV-pp65的TCR也有可能应用于治疗CMV相关的恶性肿瘤。

技术实现思路

[0006]为了至少解决一种现有技术存在的技术问题，本专利技术提供一种特异性识别巨细胞病毒的T细胞受体及其应用。
[0007]第一方面，本专利技术提供一种T细胞受体，所述T细胞受体包含可变区Va和可变区Vβ，所述可变区Va的CDR3的氨基酸序列包括：ILSNNNDMR；所述可变区Vβ的CDR3的氨基酸序列包括：AWSVSDLLNTEAF。
[0008]进一步地，所述可变区Va包括如下互补决定区：
[0009]CDR1：TISGTDY(SEQ ID NO:1)；CDR2：GLTSN(SEQ ID NO:2)；CDR3：ILSNNNDMR(SEQ ID NO:3)；所述可变区Vβ包括如下互补决定区：
[0010]CDR1：GTSNPN(SEQ ID NO:4)；CDR2：SVGIG(SEQ ID NO:5)；CDR3：AWSVSDLLNTEAF(SEQ ID NO:6)。
[0011]进一步地，所述可变区Va包括如SEQ ID NO:7所述的氨基酸序列；和/或，所述可变区Vβ包括如SEQ ID NO:11所述的氨基酸序列。
[0012]进一步地，所述可变区Va位于所述T细胞受体的TCR alpha序列，所述TCR alpha序列包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；和/或，所述可变区Vβ位于所述T细胞受体的TCR beta序列，所述TCR beta序列包括如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
[0013]进一步地，所述T细胞受体和巨细胞病毒pp65表位特异性结合。
[0014]第二方面，本专利技术提供一种核酸，所述核酸用于编码权利要求1-4任一项所述T细胞受体。
[0015]进一步地，所述核酸包括：用于编码可变区Va的核苷酸序列SEQ ID NO:9以及用于编码可变区Vβ的核苷酸序列SEQ ID NO:13。
[0016]本专利技术进一步地提供一种生物材料，所述生物材料包含所述核酸，所述生物材料为表达盒、载体或转基因细胞。
[0017]进一步地，所述转基因细胞为可以表达特异性结合巨细胞病毒pp65表位的T细胞受体的T细胞。
[0018]本专利技术进一步提供一种药物组合物，所述药物组合物含有所述T细胞受体。
[0019]本专利技术进一步提供所述T细胞受体，所述核酸，所述生物材料在制备用于抑制巨细胞病毒的药物或用于检测巨细胞病毒的试剂中的应用
[0020]本专利技术具备如下有益效果：
[0021]本专利技术提供的T细胞受体可以特异性结合巨细胞病毒的pp53位点，在实际应用时杀伤效率达到40％以上。本专利技术提供的T细胞受体可以在T细胞中稳定表达，表达水平高，杀伤效率高，可以应用于抑制CMV相关的恶性肿瘤的药物中，在针对CMV病毒的治疗或和CMV病毒相关的治疗中具有重要意义。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1提供的流式细胞术检测和分选HLA-A0201递呈CMV-pp65
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特异性T细胞的结果图；
[0023]图2为本专利技术实施例1构建的慢病毒TCR表达载体示意图；
[0024]图3为本专利技术实施例1提供的使用T2细胞系作为递呈抗原肽的靶细胞，比较负载了不同摩尔浓度CMV-pp65
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多肽后，T2细胞刺激A9B2 TCR-T细胞表达CD107a的水平和细胞内IFNγ的水平的结果；
[0025]图4为本专利技术实施例2提供的A9B2 TCR-T细胞的杀伤活性和特异性检测结果。
pp65
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肽负载T2细胞刺激表达A9B2 TCR的TCR-T细胞8小时。
[0039](3)利用人源CD107a和IFNγ特异性抗体染色肽负载T2细胞刺激后的A9B2 TCR的TCR-T细胞，分析不同浓度抗原体活化A9B2TCR-T的能力。结果如图3所示：A9B2 TCR可以被从-5M至-8M的多肽有效激活，提示A9B2 TCR对CMV-pp65
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肽具有非常高的亲和力，-8M的多肽负载细胞即可显著地激活表达本专利技术TCR的T细胞。
[0040]实施例2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T细胞受体，其特征在于，所述T细胞受体包含可变区Va和可变区Vβ，所述可变区Va的CDR3的氨基酸序列包括：ILSNNNDMR；所述可变区Vβ的CDR3的氨基酸序列包括：AWSVSDLLNTEAF。2.根据权利要求1所述的T细胞受体，其特征在于，所述可变区Va包括如下互补决定区：CDR1：TISGTDY；CDR2：GLTSN；CDR3：ILSNNNDMR；和/或，所述可变区Vβ包括如下互补决定区：CDR1：GTSNPN；CDR2：SVGIG；CDR3：AWSVSDLLNTEAF。3.根据权利要求2所述的T细胞受体，其特征在于，所述可变区Va包括如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；和/或，所述可变区Vβ包括如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的T细胞受体，其特征在于，所述可变区Va位于所述T细胞受体的TCR alpha序列，所述TCR alpha序列包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；和/或，所述可变区Vβ位于...

【专利技术属性】
技术研发人员：王江华，蒋栋，谢兴旺，王雪艳，李雅真，翟佳慧，史云强，毕晶磊，
申请(专利权)人：北京可瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：