本技术方案首次公开了一种垫状卷柏药材采用70％甲酸溶剂热回流提取制备总黄酮的方法以及HPLC指纹图谱检测方法，本发明专利技术方法制备的总黄酮含量高，建立的指纹图谱具有丰富的指纹特征信息，方法简便、重现性好、准确可靠，可有效鉴别垫状卷柏药材及其混淆品，为垫状卷柏的鉴别和全面质量控制提供依据。的鉴别和全面质量控制提供依据。
【技术实现步骤摘要】
垫状卷柏总黄酮提取制备及HPLC指纹图谱检测方法
[0001]本专利技术涉及一种中药材总黄酮提取制备及HPLC指纹图谱检测方法，更具体的说是垫状卷柏总黄酮提取制备以及垫状卷柏药材指纹图谱的质量控制方法，属于中药
技术介绍
[0002]垫状卷柏为卷柏科植物垫状卷柏Selaginellapulvinata（Hook，etGrev.）Maxim.的干燥全草。全年均可采收，除去须根和泥沙，晒干。卷柏为卷柏科植物卷柏的干燥全草。全年均可采收，除去须根和泥沙，晒干。现行国家标准如下：【性状】垫状卷柏须根多散生。中叶（腹叶）两行，卵状披针形，直向上排列。叶片左右两侧不等，内缘较平直，外缘常因内折而加厚，呈全缘状。
[0003]【鉴别】（1）本品粉末绿色至黄褐色。叶缘细胞狭长，向外突出呈齿状或长毛状。叶表皮细胞类方形或类长方形，垂周壁近平直，气孔不定式，多同向排列。孢子棕黄色或红棕色，类圆形或类三角形，直径17～77μm，表面具不规则瘤状突起。管胞为梯纹。
[0004]（2）取本品粉末2g，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇3ml使溶解，作为供试品溶液。另取卷柏对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇
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浓氨试液
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水（13:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝甲醇溶液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0005]【检查】水分不得过10.0%。
[0006]【含量测定】照高效液相色谱法（《中国药典》2020年版通则0512）测定。
[0007]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为330nm。理论板数按穗花杉双黄酮峰计算应不低于3000。
[0008]对照品溶液的制备取穗花杉双黄酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
[0009]供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0010]测定法分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0011]本品按干燥品计算，含穗花杉双黄酮（C
30
H
18
O
10
）不得少于0.30%。
[0012]【炮制】 垫状卷柏除去残留须根及杂质，洗净，切段，干燥。
[0013]【性状】 本品呈卷缩的段状，枝扁而有分枝，绿色或棕黄色，向内卷曲，枝上密生鳞片状小叶。叶先端具长芒。中叶（腹叶）两行，卵状矩圆形或卵状披针形，斜向或直向上排列，叶缘膜质，有不整齐的细锯齿或全缘；背叶（侧叶）背面的膜质边缘常呈棕黑色。气微，味淡。
[0014]【鉴别】【检查】【含量测定】同药材【性味与归经】辛，平。归肝、心经。
[0015]【功能与主治】活血通经。用于经闭痛经，癥瘕痞块，跌扑损伤。垫状卷柏炭化瘀止血。用于吐血，崩漏，便血，脱肛。
[0016]【用法与用量】5～10g。
[0017]【注意】孕妇慎用。
[0018]【贮藏】置干燥处。
[0019]中药中总黄酮的现有方法是用溶剂法提取黄酮类化合物，传统的方法包括冷浸法、渗漉法、回流法和煎煮法等；近年来超声提取法、微波提取法、酶辅助提取法等研究较多。新方法可提高黄酮的提取率,缩短提取时间，减少能耗和药材用量。另外，根据所测定样品的入药部位、培养基质以及药用辅料等因素，粉碎、提取、净化等方法相结合,用正交试验优选出最佳提取艺条件。碱性水溶液提取法，黄酮含量较低，原因可能是黄酮类化合物与钙结合成不溶性物质，不被溶出。此外，此法虽然经济，但污染严重，对生态环境会造成负面影响。水提法总黄酮含量虽有所提高，但提取液存放易腐败变质，后续的过漉、干燥等很费时间，原因是由于用水作提取溶剂，易把蛋白质、糖等易溶于水的成分浸提出来，因此易霉变。根据被提取物的极件及杂质特点来选择适合的提取溶剂。一般常用不同浓度的甲醇、乙醇作为提取溶剂。
[0020]现有技术关于垫状卷柏药材的HPLC指纹图谱的建立都未见报道，相关同类技术特征色谱峰较少，检测限过低。本次实验采用了与以往常规提取溶剂不同的70%甲酸进行加热回流的方式对垫状卷柏药材中的成分进行提取，提取液过新型材料JHE8水合镁铝硅酸盐色谱柱脱色，再用X
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5大孔吸附树脂吸附，用水洗脱，再用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，过微孔滤膜，进一步建立HPLC指纹图谱，该指纹图谱可有效识别垫状卷柏中的特征成分，方法稳定，辨识度高，该技术为垫状卷柏药材等含有垫状卷柏的相关药品或食品提供了一种良好的检测手段，对于其相关质量标准的建立有很好的贡献。
[0021]大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以有选择地通过物理吸附水溶液中的有机物，是20世纪60年代发展起来的新型有机高聚物吸附剂，已在环保、食品、医药等领域得到了广泛的应用。大孔树脂型号不同，分离纯化性能也不同。
[0022]JHE8水合镁铝硅酸盐是利用天然非金属矿
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水合镁铝硅酸盐经过科学配方和按照特殊工艺加工制成的一种高效脱色产品，具有独特的三维空间链式结构，以及特殊的针、棒纤维状晶体形态，其独特的结构赋予了产品特殊的物理化学性质，具有较高的脱色性能、吸附性能、悬浮性能、粘接性能等，且属全天然矿物，可自然降解，无毒无害，无刺激性，对环境无污染，产品广泛用于医药行业、酿造工业、食品工业、油脂工业、化学工业等。
技术实现思路
[0023]本专利技术在于提供一种中药材总黄酮提取制备及HPLC指纹图谱检测方法，更具体的说是垫状卷柏总黄酮提取制备以及垫状卷柏药材指纹图谱的质量控制方法，以及提取溶剂、提取方式对垫状卷柏药材影响的研究。为实现此目的，本专利技术通过对垫状卷柏药材高效液相色谱指纹图谱的研究，提出了一种更好的垫状卷柏药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使垫状卷柏药材的质量控制更加完善和科学。本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种中药总黄酮提取制备方法，其特征在于：中药用70%甲酸进行热回流提取，提取液滤过，过新型材料JHE8水合镁铝硅酸盐色谱柱脱色，再用X
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5大孔吸附树脂吸附，用水洗脱，再用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥，即得总黄酮提取物。
[0024]一种卷柏或垫状卷柏总黄酮提取制备方法，其特征在于：卷柏或垫状卷柏用70%甲酸进行热回流提取，提取液滤过，过新型材料JHE8水合镁铝硅酸盐色谱柱脱色本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种中药总黄酮提取制备方法，其特征在于：中药用70％甲酸进行热回流提取，提取液滤过，过新型材料JHE8水合镁铝硅酸盐色谱柱脱色，再用X
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5大孔吸附树脂吸附，用水洗脱，再用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥，即得总黄酮提取物。2.一种卷柏或垫状卷柏总黄酮提取制备方法，其特征在于：卷柏或垫状卷柏用70％甲酸进行热回流提取，提取液滤过，过新型材料JHE8水合镁铝硅酸盐色谱柱脱色，再用X
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5大孔吸附树脂吸附，用水洗脱，再用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥，即得卷柏或垫状卷柏总黄酮提取物。3.根据权利要求2所述一种卷柏或垫状卷柏总黄酮提取制备方法，其特征在于：总黄酮提取物中同时含有穗花杉双黄酮等11个特征成分，具体检测条件如下：采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：在0～23分钟内，流动相乙腈
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0.2％甲酸溶液的体积比由6:94梯度增加至8:92，在23～60分钟内，流动相乙腈
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0.2％甲酸溶液的体积比由8:92梯度增加至50:50，在60～65分钟内，流动相乙腈
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0.2％甲酸溶液的体积比由50:50梯度减少至6:94，在65～75分钟内，流动相乙腈
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0.2％甲酸溶液的体积比保持6:94，柱温为30℃；流速为每分钟1.0ml；检测波长为270nm；所述指纹图谱中有11个共有峰，编号依次为1～11：共有峰的峰号(相对保留时间)为：1(0.106)，2(0.199)，3(0.261)，4(0.283)，5(0.388)，6(0.488)，7(0.530)，8(0.587)，9(0.622)，10(0.978)，11(1.000)；峰11为穗花杉双黄酮。4.根据权利要求2所述一种卷柏或垫状卷柏总黄酮提取制备方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：孔倩倩，李凯，李振鹏，吴立民，路杰，王杰，胡星吉，
申请(专利权)人：五源本草山东健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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