多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法，包括以下步骤：提取所述多糖核酸免疫调节药物中的核酸组分；对所述核酸组分进行测序得到样品测序数据；分析统计所述样品测序数据，得到所述核酸组分中CpG基序的出现频次；将所得频次数据与所述核酸组分供体生物的相应CpG基序频次的参比信息进行比较以确定质量。本发明专利技术的质量检测方法通过测序技术对多糖核酸免疫调节药物中的核酸片段进行测序，再利用生物信息学技术进行分析探讨，即可确定具有免疫活性的CpG结构在药物产品中的存在情况，从而用于阐述产品的核酸物质基础，实现产品质量的快速有效检测。若与生产企业制定的标准数据进行比对，还可有效地分辨产品真伪。还可有效地分辨产品真伪。还可有效地分辨产品真伪。

【技术实现步骤摘要】
多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法


[0001]本专利技术涉及医药
，特别是涉及一种多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法。

技术介绍

[0002]卡介菌多糖核酸注射液是在卡介苗素基础上，通过改进工艺生产得到的一种新型非特异性免疫调节剂，主要由核酸及多糖等多种免疫活性物质组成，解决了其它免疫调节剂大分子蛋白清除不全等缺点，使其更易于吸收，减少了过敏反应，副作用更小。20世纪70年代我国开始对卡介菌多糖核酸提取物进行免疫活性的研究，80年代末将其用于临床，现在相关的注射液产品已经畅销国内外30年，是免疫调节剂产品中的明星产品。卡介菌多糖核酸能双向调节机体细胞免疫和体液免疫功能，具有抗感染、抗变态反应、抗肿瘤等作用。除了广泛用于慢性支气管炎、哮喘和反复呼吸道感染的防治外，临床应用上也取得了一些新的进展，比如在肿瘤免疫治疗等领域。
[0003]目前，企业和国家标准中，该类型产品的质量只能通过核酸浓度来粗略判断，无法有效鉴定产品质量水平，或者需要通过细胞和动物实验来判断，费时费力。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要提供一种快速有效的多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法。
[0005]一种多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法，包括以下步骤：
[0006]提取所述多糖核酸免疫调节药物中的核酸组分；
[0007]对所述核酸组分进行测序得到样品测序数据；
[0008]分析统计所述样品测序数据，得到所述核酸组分中CpG基序的出现频次；
[0009]将所得频次数据与所述核酸组分供体生物的相应CpG基序频次的参比信息进行比较以确定质量。
[0010]专利技术人通过研究发现，多糖核酸免疫调节药物对超敏反应引起的各种过敏性疾病的优越调节作用，与药物的核酸物质中非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)序列结构密切相关。核酸组分中CpG基序的出现频次能够体现多糖核酸免疫调节药物的质量水平，从而可以作为该类药物产品的质量评价指标。本专利技术的质量检测方法通过测序技术对多糖核酸免疫调节药物中的核酸片段进行测序，再利用生物信息学技术进行分析探讨，比较核酸组分中CpG基序的出现频次与供体生物的相应CpG基序频次，即可确定具有免疫活性的CpG结构在药物产品中的存在情况，从而用于阐述产品的核酸物质基础，实现产品质量水平的快速有效检测。若与生产企业制定的标准数据进行比对，还可有效地分辨产品真伪。
[0011]在其中一个实施例中，所述CpG基序包括GACGTT、AACGTT、GTCGTT和TTCGTT中的一种或多种。
[0012]在其中一个实施例中，所述参比信息通过以下步骤获取：
[0013]获取所述供体生物的基因组测序数据；
[0014]分析统计所述基因组测序数据，得到所述供体生物的基因组中CpG基序的出现频次。
[0015]在其中一个实施例中，还包括以下步骤：根据所述样品测序数据和所述基因组测序数据得到所述核酸组分的全基因组覆盖倍数。
[0016]在其中一个实施例中，还包括以下步骤：
[0017]根据所述样品测序数据构建所述核酸组分中CpG基序的序列位置-出现频次曲线；
[0018]根据所述基因组测序数据构建所述供体生物的基因组中CpG基序的序列位置-出现频次曲线；
[0019]将所述核酸组分中CpG基序的序列位置-出现频次曲线与所述供体生物的基因组中CpG基序的序列位置-出现频次曲线进行比对。
[0020]在其中一个实施例中，所述多糖核酸免疫调节药物为卡介菌多糖核酸免疫调节药物，所述供体生物为结核分支杆菌。
[0021]在其中一个实施例中，还包括以下步骤：分析统计所述样品测序数据，得到片段有效率；所述片段有效率为可读片段数占总测序片段数的百分比。
[0022]在其中一个实施例中，提取所述核酸组分的方法包括以下步骤：将所述多糖核酸免疫调节药物与BA Buffer混合均匀后，转移至核酸纯化柱，离心后弃去接液管中液体；向核酸纯化柱加入G Binding Buffer，离心后弃去接液管中液体；向核酸纯化柱加入Wash Buffer，离心后弃去接液管中液体；再向纯化柱中加Elution Buffer，室温温育，然后离心并收集接液管中液体。
[0023]在其中一个实施例中，所述核酸组分采用第二代宏测序技术进行测序。
[0024]在其中一个实施例中，所述核酸组分的测序方法包括以下步骤：将所述核酸组分经过Covaris随机打断成350bp～500bp的DNA片段，采用TruSeq DNA LT Sample Prep kit试剂盒进行建库，DNA片段经过末端修复、加ployA尾、加测序接头、纯化和PCR扩增完成文库构建，然后利用测序仪进行双端测序，获得所述样品测序数据。
附图说明
[0025]图1为卡介菌基因组和卡介菌多糖核酸注射液的核酸物质电泳图；其中a为卡介菌基因组核酸电泳图(泳道1)，泳道2为分子量Marker DL10k，b为不同批次注射液的核酸物质提取纯化前后电泳图；
[0026]图2为卡介菌基因组中CpG基序的分布图；
[0027]图3为卡介菌基因组中四种CpG基序的频次及比例图；
[0028]图4为卡介菌多糖核酸注射液与卡介菌基因组核酸序列比对覆盖频次比较分析；
[0029]图5为以100000bp为间距分析的卡介菌多糖核酸注射液核酸物质中四种CpG基序出现的频次情况；
[0030]图6为不同核酸处理组对细胞因子释放能力比较。
具体实施方式
[0031]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相
反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0032]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0033]本专利技术一实施例的一种多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法，包括以下步骤S1～S4：
[0034]S1、提取多糖核酸免疫调节药物中的核酸组分。
[0035]S2、对核酸组分进行测序得到样品测序数据。
[0036]S3、分析统计样品测序数据，得到核酸组分中CpG基序的出现频次。
[0037]S4、将所得频次数据与核酸组分供体生物的相应CpG基序频次的参比信息进行比较以确定质量。
[0038]专利技术人通过研究发现，多糖核酸免疫调节药物对超敏反应引起的各种过敏性疾病的优越调节作用，与药物的核酸物质中非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)序列结构密切相关。核酸组分中CpG基序的出现频次能够体现多糖核酸免疫调节药物的质量水平，从而可以作为该类药物产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多糖核酸免疫调节药物的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取所述多糖核酸免疫调节药物中的核酸组分；对所述核酸组分进行测序得到样品测序数据；分析统计所述样品测序数据，得到所述核酸组分中CpG基序的出现频次；将所得频次数据与所述核酸组分供体生物的相应CpG基序频次的参比信息进行比较以确定质量。2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述CpG基序包括GACGTT、AACGTT、GTCGTT和TTCGTT中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述参比信息通过以下步骤获取：获取所述供体生物的基因组测序数据；分析统计所述基因组测序数据，得到所述供体生物的基因组中CpG基序的出现频次。4.根据权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于，还包括以下步骤：根据所述样品测序数据和所述基因组测序数据得到所述核酸组分的全基因组覆盖倍数。5.根据权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于，还包括以下步骤：根据所述样品测序数据构建所述核酸组分中CpG基序的序列位置-出现频次曲线；根据所述基因组测序数据构建所述供体生物的基因组中CpG基序的序列位置-出现频次曲线；将所述核酸组分中CpG基序的序列位置-出现频次曲线与所述供体生物的基因组中CpG基序的序列位置-出现频次曲线进行比对。6.根据权利要求3所述的质量检测方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：周云喜，谢安，童春义，杨胜梅，务勇圣，黄胜，徐向平，刘斌，
申请(专利权)人：九芝堂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：