一种检测抗蛋白酶体亚基α1-IgG抗体的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测抗蛋白酶体亚基α1

【技术实现步骤摘要】
Qian，Roehrl Michael H，Wang J，et al.Proteomic profiling of antibody
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inducing immunogens in tumor tissue identifies Proteasome subunit alpha type 1，LAP3，ANXA3，and maspin as colon cancer markers.Journal[J]Oncotarget Volume 9，Issue 3.2018.PP 3996
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4019.)。
[0005]但目前关于Proteasome subunit alpha type 1的表达情况和Proteasome subunit alpha type1的自身抗体的存在情况在肾病综合征中未见报道。另外现有技术中，没有涉及基于靶点Proteasome subunit alpha type 1或其自身抗体作为一种血清学标志物在自身免疫性肾病综合征中的应用。通过检测血清抗Proteasome subunit alpha type 1
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IgG抗体鉴别出自身免疫性肾病综合征的研究是空白的。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种检测抗蛋白酶体亚基α1
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IgG抗体的试剂盒，是一种基于靶点Proteasome subunit alpha type 1及其相应自身抗体的检测试剂盒。所述试剂盒可通过与抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1(特别根据序列识别号SEQ ID NO.1所示)的免疫反应对来自组织(肾活检组织)或体液(特别是血液、血浆、血清)中的自身抗体进行检测。
[0007]本专利技术所述试剂盒由抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1、固相载体、标记抗体如酶标记或化学发光剂标记或生物素标记的二抗、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、底物显色剂、洗涤液、标准品、阳性质控品、阴性质控品组成。
[0008]所述抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1的序列如SEQ ID NO.1所示：MFRNQYDNDVTVWSPQGRIHQIEYAMEAVKQGSATVGLKSKTHAVLVALKRAQSELAAHQKKILHVDNHIGISIAGLTADARLLCNFMRQECLDSRFVFDRPLPVSRLVSLIGSKTQIPTQRYGRRPYGVGLLIAGYDDMGPHIFQTCPSANYFDCRAMSIGARSQSARTYLERHMSEFMECNLNELVKHGLRALRETLPAEQDLTTKNVSIGIVGKDLEFTIYDDDDVSPFLEGLEERPQRKAQPAQPADEPAEKADEPMEH。
[0009]本专利技术的Proteasome subunit alpha type 1抗原蛋白可以是融合蛋白，使用具有某些生物学或物理功能的标签，特别是N
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末端或C
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末端。这些标签的存在有利于抗原蛋白纯化，固定，沉淀。在一个优选的实施方案中，标签是能够特异性结合配体的序列或结构域，例如，所述标签肽选自：GST标签、c
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Myc标签、His标签、Flag标签或生物素标签。
[0010]根据本专利技术，所述抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1固定于固相载体上，利用物理吸附或共价键结合或化学结合将Proteasome subunit alpha type 1抗原蛋白通过直接的方式固定于固相载体上。优选的固相载体包括：硝酸纤维素膜、磁珠、酶标微孔板。
[0011]本专利技术一个实施方案中，所述标准品和阳性质控品，标准品和阳性质控品为重组人抗标签肽免疫球蛋白G或其片段、或从病人血清中提取抗Proteasome subunit alpha type 1
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IgG抗体作为阳性质控品和标准品，健康体检者血清为阴性质控品。
[0012]根据本专利技术，所述抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1可表达于细菌如大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞中。
[0013]根据本专利技术，所述抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1经Ni柱亲和层析、分子筛层析、离子交换层析、疏水柱纯化。
[0014]根据本专利技术，所述生物样本为包含自身抗体的样品，选自全血、血清、血浆、尿液、淋巴液、胸腹水。优选为哺乳动物(人类)血清。
[0015]所述检测试剂盒还包括底物显色剂、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、洗涤液。所述底物显色剂为TMB、AMPPD、4
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MUP、BCIP；所述抗原稀释液为含有163mM NaCL、1％TritonX
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100的1x PBS pH7.4；所述样品稀释缓冲液为含有10％BSA的0.01M PBS pH7.4；所述抗体稀释液为含有1M D
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glucose、2％甘油、0.35％Tween20的0.01M PBS pH7.4；所述洗涤液为：含有163mM NaCL、10％甘油、1％TritonX
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100的1x PBS pH7.4。
[0016]在一个优选实施方案中，如本文中所述“固定”是指与Proteasome subunit alpha type 1抗原蛋白不溶于水的固相载体结合，该固相载体或支持物不溶于水，更优选地通过共价键合，静电相互作用，疏水相互作用、或通过二硫键相互作用，最优选通过一个或多个共价键。固定可以是直接固定方式，例如通过过滤，离心或层析，将固定化的分子与不溶性载体一起从水溶液中分离出来。还包括可逆或不可逆的方式固定Proteasome subunit alpha type 1抗原蛋白。例如，抗原蛋白通过可裂解的共价键(如可添加含硫醇的试剂来裂解的二硫键)固定于载体，这种固定是可逆的。另外，如抗原蛋白通过在水性溶液中不会裂解的共价键(通过环氧化物基团与将赖氨酸侧链偶联至亲和柱的胺基团的反应形成的键)固定于载体，则固定是不可逆的。固定还可以是间接方式：如固定对所述抗原蛋白具有特异性亲和力的抗体，然后形成抗原蛋白
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抗体复合物以达到固定的效目的。
[0017]本专利技术所述的抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1固定方法为直接包被法：(1)抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1通过物理吸附方式或非共价键结合到硝酸纤维素膜或聚苯乙烯微孔板上；(2)带有羧基功能团的磁微粒与抗原蛋白Proteasome subunit alpha type1的氨基结合，抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1通过化学偶联方式结合在磁微粒上。
[0018]本专利技术所选的标记抗体可以是辣根过氧化物酶(Horsera本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测抗蛋白酶体亚基α1
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IgG抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由抗原蛋白Proteasome subunit alpha type 1、固相载体、标记抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、底物显色剂、洗涤液、标准品、阳性质控品、阴性质控品组成。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述抗原蛋白Proteasome subunit alpha type1的序列如SEQ ID:1所示。3.根据权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于，所述标记抗体为酶标记、化学发光剂标记或生物素标记的二抗。4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述的抗原蛋白Proteasome subunit alpha type1上带有标签肽，所述的标签肽包括：GST标签、c
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Myc标签、His标签、Flag标签或生物素标签。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Proteasome subunit alpha type 1抗原蛋白经镍柱亲和层析、分子筛层析、凝胶过滤层析、离子交换柱层析、疏水柱纯化。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品和阳性质控品为重组人抗标签肽免疫球蛋白G或其片段，或从血清中提取抗Proteasome subunit...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，毛建华，田丹丹，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：