具有改善的治疗效果的依那西普变体制造技术

本发明专利技术提供改进的依那西普变体，包含一个(A105E)、优选两个(A105E/L106F)关于SEQ ID NO:3的依那西普原始氨基酸序列的氨基酸取代。这些变体抑制TNF活性，但无法中和人LTα(hLTα)。因此，由于它们防止与使用原始依那西普分子相关的副作用，同时保留TNF阻断活性，所以它们在本文中被提议作为临床上用于治疗自身免疫或炎性疾病的重要替代品，其中涉及加剧的TNF活性。TNF活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有改善的治疗效果的依那西普变体


[0001]本专利技术属于医学和药理学领域，特别是涉及治疗性嵌合融合蛋白，其结合人肿瘤坏死因子(hTNF)并抑制其在炎症过程中的生物学作用。因此，这些融合蛋白可用于治疗涉及TNF的自身免疫和/或炎性疾病。特别地，本专利技术涉及融合蛋白依那西普的突变体变体，其改善其TNF中和特异性并因此改善其治疗效果。这些改善的突变体特异性抑制hTNF，从而保留原始化合物的抗炎治疗作用，同时它们表现出的阻断人类淋巴毒素(hLT)的能力大大降低，并因此改善与依那西普的临床使用相关的副作用。

技术介绍

[0002]肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)包含19种细胞因子和29种细胞受体，参与重要的生物学过程，例如细胞死亡、免疫力和器官发育。但是，这些细胞因子的生产失调会引发自身免疫和炎症性疾病。例如，克罗恩病、牛皮癣、强直性脊柱炎、类风湿性关节炎和炎症性肠病通常与家族的原型细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF)的失控活动有关。
[0003]迄今为止，美国食品药品监督管理局(FDA)批准了用于治疗这些疾病的五种TNF抑制剂：四种单克隆抗体(英夫利昔单抗，阿达木单抗，赛妥珠单抗和戈利木单抗)和一种可溶性诱饵受体，依那西普也称为Enbrel(Willrich，MAV，etal，2015，Transl Res 165，270
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282)。依那西普是细胞TNF受体2(TNFR2)配体结合结构域与人IgG1 Fc部分的嵌合融合蛋白(Murray,K.M.,Dahl,S.L.,1997,Ann Pharmacother 31,1335
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1338)。因此，依那西普是一种生物医学产品，通过干扰可溶性炎性细胞因子TNF来治疗自身免疫和炎性疾病。它与TNF结合并降低其在涉及人类和其他动物过度炎症的疾病中的作用，包括自身免疫性疾病，如强直性脊柱炎、青少年类风湿性关节炎、斑块状牛皮癣、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、以及潜在地在TNF介导的各种其他疾病。因此，已被批准治疗这些疾病。TNF是许多器官系统中炎症(免疫)反应的“主要调节剂”。自身免疫性疾病是由过度活跃的免疫反应引起的。因此，依那西普具有通过抑制TNF治疗这些疾病的潜力。该融合蛋白在US5447851B1中获得了专利。
[0004]此外，US5605690公开了通过对人施用TNF拮抗剂例如可溶性人TNFR来治疗TNF依赖性炎性疾病例如关节炎的方法。
[0005]依那西普的一些生物仿制药已经开发了商品名“Etacept”(Cipla)、“Benepali”(Samsung Bioepis)或“Erelzi”(Sandoz)。
[0006]然而，尽管依那西普已被证明可以有效改善患者的症状，但它也可能引起严重的不良反应，包括对病毒或真菌感染(如疱疹或念珠菌)的易感性增加、或罹患结核病或乙型肝炎、淋巴瘤或其他类型的癌症、多发性硬化症、惊厥、心力衰竭、狼疮、牛皮癣或自身免疫性肝炎的风险增加(Fellermann，K.，2013，Dig Dis 31，374
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378)。据报道，使用依那西普会导致严重的感染和败血症，包括死亡，包括重新激活潜伏性结核病和乙型肝炎感染。由于与该药物相关的许多严重感染，2008年5月2日，FDA向依那西普发出了黑匣子警告。
[0007]这些副作用可以至少部分地通过以下事实来解释：依那西普不仅阻断TNF，而且阻
断其他对稳态和免疫力至关重要的TNFSF配体，如淋巴毒素α(LTα)(Mitoma，H.，et al.，2018，细胞因子101，56
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63)。几篇报道表明LTα对于抵抗分枝杆菌感染的宿主防御至关重要(Roach，DR，Briscoe，H.，Saunders，B.，等人，2001，J.Exp.Med.193，239
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246；Ehlers，S.，Holscher，C.，Scheu，S.，等人，2003，J.Immunol.170，5210
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5218)，其构成了在抗TNF疗法下患者的主要感染并发症之一。重要的是，在没有TNF的情况下，LTα活性在这些感染中更具决定性(Bopst，M.，Garica，I.，Guler R.，等人，2001，Eur.J.Immunol.31，1935
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1943)，模拟了这些患者的免疫状况。因此，该药物的抗LTα活性可能有助于加重依那西普治疗的患者的感染。
[0008]用上面提到的任何已批准的TNF单克隆抗体均可实现更特异性的抗TNF治疗。但是，据报道，与这些抗体相关的感染风险甚至可能比依那西普高(Wallis,R.S.,Broder M.S.,Wong J.,et al.,2004,Clin.Infect.Dis.38,1261
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1265)。这些抗体的Fc区介导的强细胞毒活性可能解释了这一点，这可能导致带有TNF的免疫细胞的破坏(Mitoma，H.等人，2018，Cytokine 101，56
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63)。
[0009]因此，由于上述原因，对依那西普分子的重新设计和改进似乎是实现该药物在临床上更安全应用的理想方法。
[0010]仍然需要以依那西普作为TNF拮抗剂或TNF阻断剂的自身免疫和炎性疾病的新药和改良药理治疗，这对受这些疾病影响的大量患者非常有利，并且避免了因那西普给药而产生的不良副作用。
[0011]专利技术概述
[0012]本专利技术提供改进的依那西普变体，包含一个(A105E)、优选两个(A105E/L106F)关于SEQ ID NO:3的依那西普原始氨基酸序列的氨基酸取代。这些变体抑制TNF活性，但无法中和人LTα(hLTα)。因此，由于它们可防止与使用原始依那西普分子相关的副作用，同时保持TNF阻断活性，所以它们在本文中被提议作为在临床中使用的绝佳替代品。
[0013]专利技术人已经鉴定氨基酸残基，其抑制可溶性病毒TNF诱饵受体(CrmD)阻断hLTα(图1)，并将其成功转移到依那西普序列中以特异性地阻碍其抗
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LTα活性(图2)。本文公开的所得依那西普变体对hTNF具有特异性，并且阻断hLTα的能力大大降低，因此有可能在临床上用作依那西普的更安全替代品。
[0014]在本申请中证明，通过使它的90s环看起来更像A105E和A105E/L106F依那西普突变体中的CrmD，可以极大地阻碍依那西普的抗
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hLTα活性。因此，本专利技术公开的依那西普变体被提议作为更安全的第二代依那西普，其特征在于具有可溶性诱饵受体的优点和抗体疗法的高TNF特异性克服了原药的副作用。
[0015]由于本专利技术公开的变体是在临床上广泛使用和批准的化合物(依那西普)的突变体，因此可以以可靠和安全的方式将其施用于患者。
[0016]本专利技术的第一方面涉及分离的多肽，在下文中为“本专利技术的多肽”、“本专利技术的变体”或“本专利技术的突变体”，包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，其中所述SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.分离的多肽，包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，其中所述SEQ ID NO:1的氨基酸序列包含氨基酸取代A105E。2.权利要求1所述的分离的多肽，还包含氨基酸取代L106F。3.权利要求2所述的分离的多肽，包含氨基酸取代A105E和L106F。4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，连接至人IgG1的Fc片段。5.根据权利要求3或4中任一项所述的分离的多肽，包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。6.分离的多核苷酸，包含编码根据权利要求1至5中任一项所述的分离的多肽的核酸序列。7.包含根据权利要求6所述的分离的多核苷酸的基因构建体，其中所述基因构建体优选是病毒载体。8.宿主细胞，包含根据权利要求1至5中任一项所述的分离的多肽、根据权利要求6所述的分离的多核苷酸或根据权利要求7所...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：西班牙高等科研理事会，
类型：发明
国别省市：