一种鉴定性连锁矮小基因的引物组及其应用制造技术

本发明专利技术涉及动物育种领域，特别是涉及一种鉴定性连锁矮小基因的引物组及其应用。本发明专利技术在GHR基因缺失段内部设计检测dw基因的上游引物，在GHR缺失段的上游设计检测DW基因的上游引物，并统一将下游引物设计在GHR缺失段的下游，通过多重PCR反应，利用缺失段内部和缺失区段两端同时进行扩增，这样Z

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定性连锁矮小基因的引物组及其应用


[0001]本专利技术涉及动物育种领域，特别是涉及一种鉴定性连锁矮小基因的引物组及其应用。

技术介绍

[0002]鸡性连锁矮小基因(dw基因)是鸡性染色体上的生长激素受体(GHR)基因3
’‑
非翻译区(3
’‑
UTR)存在近1.7kb的缺失突变形成的等位基因。1935年苏联学者Behtank就发现了dw基因。dw基因位于鸡Z染色体上肝脏坏死基因in位点与无翼基因we位点之间，靠近银色(S)及金色(s)羽基因和慢羽(K)、快羽(k)基因，dw基因与银色基因和慢羽基因的交换值分别为7％和6.6％。
[0003]dw基因是已知的8种矮小基因中的一种，有别于其他具有明显致病或致死效应的大多数矮小基因。诸多研究都表明，此基因是唯一对鸡本身健康无害，而对人类有利的隐形伴性突变基因。相比于正常体型鸡，由其培育而成的基因隐性纯合的矮小鸡仅有正常体型鸡体重的2/3，具有基础代谢率低、耗料量少、饲养密度大、适应性和抗应激强等诸多优势。
[0004]而dw基因属于伴性遗传，正常基因DW对dw显性，因此只有矮小型纯合子的公鸡和携带矮小型基因的母鸡才表现矮小性状。明显的外部特征为胫骨缩短20％左右，而Z
DW
Z
dw
的杂合子公鸡表型正常，不能与Z
DW
Z
DW
的纯合非矮小公鸡区分。所以能从分子水平上准确鉴定性连锁矮小基因携带鸡的基因型可以加快矮小鸡育种效率。

技术实现思路
<br/>[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种鉴定性连锁矮小基因的引物组及其应用。本专利技术提供的引物组能够快速、准确地鉴定性连锁矮小基因携带鸡的基因型。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种鉴定性连锁矮小基因的引物组，包括引物对1和引物对2；
[0008]所述引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述引物对1的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；
[0009]所述引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述引物对2的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
[0010]本专利技术还提供了上述引物组在鉴定性连锁矮小基因携带鸡中的应用。
[0011]本专利技术还提供了一种鉴定性连锁矮小基因携带鸡的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的引物组。
[0012]本专利技术还提供了一种鉴定性连锁矮小基因携带鸡的方法，包括以下步骤：
[0013]以样本鸡的基因组DNA或总RNA反转录得到的cDNA为模板，利用上述引物组进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0014]扩增产物的判断包括：当含有600bp～700bp的扩增产物时，则样本鸡为性连锁矮小基因携带鸡。
[0015]优选的，所述PCR反应程序包括：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃复性30s，72℃延伸40s，循环35次；72℃延伸5min。
[0016]优选的，所述PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：PCR SuperMix 10μL，所述引物组中引物对1的正向引物和引物对2的正向引物各0.4μL，所述引物组中引物对1的反向引物和引物对2的反向引物各0.2μL，DNA模板2.5μL和剩余去离子水。
[0017]优选的，所述PCR SuperMix的浓度为10μmoL/L；所述引物组中引物对1的正向引物、引物对1的反向引物、引物对2的正向引物和引物对2的反向引物的工作浓度均为10μmoL/L；所述DNA模板的浓度为100ng/μL。
[0018]优选的，所述判断的方法包括电泳或测序。
[0019]优选的，扩增产物的判断还包括：当含有600bp～700bp的扩增产物和大于700bp且小于等于800bp的扩增产物时，则样本鸡为携带有性连锁矮小基因的杂合鸡；
[0020]当仅含有600bp～700bp的扩增产物时，则样本鸡为携带有性连锁矮小基因的纯合鸡；
[0021]当仅含有大于700bp且小于等于800bp的扩增产物时，则样本鸡为未携带有性连锁矮小基因的纯合鸡。
[0022]本专利技术还提供了上述引物组或上述试剂或试剂盒或上述方法在辅助选育矮小鸡群新品种中的应用。
[0023]有益效果：
[0024]本专利技术提供一种鉴定性连锁矮小基因的引物组，包括引物对1和引物对2；所述引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述引物对1的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述引物对2的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本专利技术在GHR基因缺失段内部设计检测dw基因的上游引物，在GHR缺失段的上游设计检测DW基因的上游引物，并统一将下游引物设计在GHR缺失段的下游，通过多重PCR反应，利用缺失段内部和缺失区段两端同时进行扩增，这样Z
DW
Z
DW
和Z
DW
W只能检测到未缺失区段的扩增产物，Z
dw
W和Z
dw
Z
dw
只能检测到缺失后的片段，而杂合子Z
DW
Z
dw
个体则能同时检测到两种片段，通过特定的引物组能够快速、准确地鉴定性连锁矮小基因携带鸡的基因型。
附图说明
[0025]图1为应用例1中不同基因型鸡的凝胶电泳图，其中M泳道为DNA分子量标记(100～1500bp Ladder)，图中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10泳道为扬泰小黑鸡，有一条713bp的条带，基因型为Z
DW
Z
DW
；11泳道为白来航公鸡，有一条714bp的条带，基因型为Z
DW
Z
DW
；12泳道为矮小鸡纯系公鸡，有一条614bp条带，基因型为Z
dw
Z
dw
；
[0026]图2为应用例1中不同基因型鸡的凝胶电泳图，其中M泳道为DNA分子量标记(100～1500bp Ladder)，图中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10泳道为扬泰小黑鸡，有两条713bp和614bp的条带，基因型为Z
DW
Z
dw
；11泳道为白来航公鸡，有一条714bp的条带，基因型为Z
DW
Z
DW
；12泳道为矮小鸡纯系公鸡，有一条614bp条带，基因型为Z
dw
Z
dw
；13泳道为阴性对照去离子水；
[0027]图3为应用例1中不同基因型鸡的凝胶电泳图，其中M泳道为DNA分子量标记(100～
1500bp Ladder)，图中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10泳道为扬泰小黑鸡，有一条713b本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定性连锁矮小基因的引物组，其特征在于，包括引物对1和引物对2；所述引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述引物对1的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述引物对2的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。2.权利要求1所述引物组在鉴定性连锁矮小基因携带鸡中的应用。3.一种鉴定性连锁矮小基因携带鸡的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1所述的引物组。4.一种鉴定性连锁矮小基因携带鸡的方法，其特征在于，包括以下步骤：以样本鸡的基因组DNA或总RNA反转录得到的cDNA为模板，利用权利要求1所述引物组进行PCR扩增，得到扩增产物；扩增产物的判断包括：当含有600bp～700bp的扩增产物时，则样本鸡为性连锁矮小基因的携带者。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR反应程序包括：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃复性30s，72℃延伸40s，循环35次；72℃延伸5min。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：PC...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙从佼，徐桂云，王喜琼，庄景杰，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：