一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法技术

本发明专利技术提供了一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法，所述方法采用色谱条件为：色谱柱：C185.0μm 4.6*250mm；检测器：紫外检测器；柱温：30℃；波长：355nm；进样量：10μL；流速：0.6mL/min。本方法采用高效液相色谱法，检测器为紫外检测器或二极管阵列检测器，等度洗脱，仪器要求低，流动相配制简单，检测快速；三乙胺为拖尾抑制剂，可以有效改善分离，使主峰对称性良好，与杂质有效分离；该色谱条件可以有效分离米诺环素中间体山环素与各有关物质，可用合成过程液体、固体样品的质量监控。量监控。

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，具体地涉及一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法。

技术介绍

[0002]米诺环素又称二甲胺四环素、美诺星，是一种广谱抗菌的半合成四环素类抗生素，抗菌作用为该属中最强，特点为高效、速效、长效，能克服奶四环素的金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌，口服吸收迅速且不受食物影响。山环素(脱甲氧四环素)是米诺环素的重要中间体，是一种重要的半合成中间体原料，会有副产物产生，在生产和贮藏过程中，易发生差向异构化导致产品品质变化，因此它的质量不但对整体反应收率有影响，还间接影响终产品的质量。它的分析检测对之前合成步骤的条件摸索和反应控制和后续反应收率提高有着重要作用，所以建立一种高效快捷、操作简单、稳定有效的分析检测方法对米诺环素中间体进行分析检测时非常必要的。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，提供了一种专属性强、线性好、准确度好的高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法。
[0004]本专利技术采用的技术方案为：一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法，所述方法采用色谱条件为：
[0005]色谱柱：C185.0μm 4.6*250mm或C183.0um 4.6*150mm；
[0006]检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器；
[0007]柱温：30℃；
[0008]波长：355nm；
[0009]进样量：10μL；
[0010]流速：0.6mL/min；
[0011]流动相：溶液A：甲醇：乙腈＝600：240:160；
[0012]采用等度洗脱。
[0013]进一步地，所述溶液A配置方法为：0.16M磷酸二氢钠用三乙胺调pH至6
±
0.2，摇匀备用。
[0014]进一步地，所述方法还包括供试品溶液、对照溶液和系统适用性溶液的制备。
[0015]进一步地，所述供试品溶液制备方法为：取米诺环素中间体供试品，用0.1M盐酸溶解或稀释，定容稀释至1mg/mL，进样前用微孔滤膜过滤。
[0016]进一步地，所述对照溶液制备方法为：精密量取供试品溶液1mL，于100mL容量瓶中，用0.1M盐酸稀释后定容至刻度，摇匀，进样前用微孔滤膜过滤。
[0017]进一步地，所述系统适用性溶液制备方法为：将7种杂质和米诺环素中间体对照品溶液配置成混合溶液用作系统适用性溶液；混合溶液中7种杂质的浓度为：杂质A、杂质D、杂
质F各10ug/mL，杂质B、杂质C、杂质E、杂质G为2ug/mL，米诺环素中间体浓度为1mg/mL。
[0018]本专利技术获得的有益效果为：本方法采用高效液相色谱法，检测器为紫外检测器或二极管阵列检测器，等度洗脱，仪器要求低，流动相配制简单，检测快速；三乙胺为拖尾抑制剂，可以有效改善分离，使主峰对称性良好，与杂质有效分离；该色谱条件可以有效分离米诺环素中间体山环素与各有关物质，可用合成过程液体、固体样品的质量监控；通过方法学验证，检测方法准确可行，方法操作简便，线性良好，可用于米诺环素中间体有关物质的检测。
附图说明
[0019]图1为本专利技术中统适用性色谱图；
[0020]图2为本专利技术中空白溶剂色谱图；
[0021]图3为本专利技术中粗品色谱图；
[0022]图4为本专利技术中成品色谱图。
具体实施方式
[0023]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0024]实施例1：系统适用性实验
[0025]系统适用性溶液配制：将上表中7种已知杂质和米诺环素中间体山环素对照品配置成混合溶液用作系统适用性溶液，混合溶液中7种相关杂质的浓度为杂质A、杂质D、杂质F各10ug/mL,杂质B、杂质C、杂质E、杂质G为2ug/mL，米诺环素中间体浓度为1mg/mL。
[0026]精密量取系统适用性溶液10uL，注入高效液相色谱仪。
[0027]系统适用性色谱图如图1所示，空白溶剂色谱图如图2所示。各个杂质出峰时间和系统适用性考察结果见表1：
[0028]表1.系统适用性考察
[0029][0030]结论：355nm波长下，空白溶剂在主峰和各个杂质峰处不出峰，各杂质之间、杂质与
主峰之间分离度符合要求，理论塔板数、对称因子满足有关物质测定要求。
[0031]实施例2：线性范围试验
[0032]精密称取7种杂质和米诺环素中间体对照品各适量，分别用0.1M盐酸溶解并稀释，制成一系列线性样品溶液，摇匀。
[0033]精密量取系统适用性溶液10uL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，绘制线性曲线和方程。结果如见表2：
[0034]表2.米诺环素中间体和杂质A、B、C、D、E、F、G线性考察
[0035][0036][0037]结论：7个杂质以及米诺环素中间体线性回归方程和R^2均满足要求，线性回归显著。
[0038]实施例3：回收率试验
[0039]未加标样品溶液配制：精密称定20mg供试品，于20mL容量瓶中，用0.1M盐酸溶解，稀释定容并摇匀。
[0040]杂质对照品储备液：各取杂质A、杂质B、杂质D、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G对照品适量，用0.1M盐酸溶解制成杂质A、杂质D、杂质F均为100ug/mL，杂质B、杂质C、杂质E、杂质G为20ug/mL的混合对照品溶液。
[0041]加标溶液配制：
[0042]50％加标溶液：精密称定供试品20mg，于20mL容量瓶中，用0.1M盐酸溶解，加入杂质对照品储备液1mL，用0.1M盐酸定容并摇匀；制备三份平行样品。
[0043]50％加标溶液：精密称定供试品20mg，于20mL容量瓶中，用0.1M盐酸溶解，加入杂质对照品储备液2mL，用0.1M盐酸定容并摇匀；制备三份平行样品。
[0044]50％加标溶液：精密称定供试品20mg，于20mL容量瓶中，用0.1M盐酸溶解，加入杂质对照品储备液3mL，用0.1M盐酸定容并摇匀；制备三份平行样品。
[0045]以上每个样品用0.1M盐酸稀释100倍，制得对应的对照溶液。
[0046]以上溶液各10uL，注入液相色谱仪，测定各杂质含量。
[0047]加标前样品检测结果见表3：
[0048]表3.加标前样品检测结果
[0049]名称含量％杂质A0.80杂质B未检出杂质C未检出杂质D0.41杂质E未检出杂质F0.24杂质G未检出
[0050]分别计算杂质A、B、C、D、E、F、G的回收率，结果见表4
‑
10：
[0051]表4.杂质A回收率考察
[0052][0053]表5.杂质B回收率考察
[0054本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法，其特征在于：所述方法采用色谱条件为：色谱柱：C185.0μm 4.6*250mm或C183.0um 4.6*150mm；检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器；柱温：30℃；波长：355nm；进样量：10μL；流速：0.6mL/min；流动相：溶液A：甲醇：乙腈＝600:240:160；采用等度洗脱。2.根据权利要求1所述一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法，其特征在于：所述溶液A配置方法为：0.16M磷酸二氢钠用三乙胺调pH至6
±
0.2，摇匀备用。3.根据权利要求1所述一种高效液相色谱法检测米诺环素中间体有关物质的方法，其特征在于：所述方法还包括供试品溶液、对照溶液和系统适用性溶液的制备。4.根据权利要求3所述一种高效液相色谱法...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓雨，马盼盼，
申请(专利权)人：河北圣雪大成制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：