本发明专利技术提供了一种具有镇痛作用的多肽，其特征在于所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；本发明专利技术含有36个氨基酸残基，其氨基酸序列为ACLGGFECKNSPNKDCSKSCLSVCSKQHKCKWKKDL，分子量为3876.01 Da。本发明专利技术多肽对钠通道Nav1.7有明显的抑制作用，具有明显的镇痛效果，具备开发为镇痛药物的潜力。具备开发为镇痛药物的潜力。具备开发为镇痛药物的潜力。
【技术实现步骤摘要】
一种具有镇痛作用的多肽及其应用
[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种具有镇痛作用的多肽及其应用。
技术介绍
[0002]电压门控离子通道是参与细胞电信号传导的跨膜蛋白，在神经和肌肉等兴奋性组织中负责动作电位的起始和传导，其活动与细胞的兴奋、收缩、分泌和突触传递等特异性功能密切相关。电压敏感型钠通道Nav1.7参与疼痛信号的产生和传导，全部敲除小鼠中编码Nav1.7通道的基因SCN9A，会使小鼠丧失对热痛、机械痛、炎性痛等的感受，但对运动功能、认知状态、交感神经系统和胃肠道系统没有影响。在药理学上抑制Nav1.7活性的化合物有可能治疗慢性疼痛，因此靶向Nav1.7通道的专一性抑制剂有望发展为新型的镇痛药物。
[0003]传统的钠离子通道小分子抑制剂通常结合在通道保守度高的孔道区，而结合在较不保守的电压敏感区的生物多肽，相比较而言会有更好的亚型选择性。通过对现有多肽抑制剂的分析研究，筛选出具有更高效力、更高选择性、更好稳定性及生物利用度的多肽抑制剂依然是国际疼痛领域研究的热点与难点。
技术实现思路
[0004]针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种具有镇痛作用的多肽及其应用，本专利技术多肽对钠通道Nav1.7有明显的抑制作用，镇痛效果明显，具备开发为镇痛药物的潜力。
[0005]本专利技术通过下述技术方案实现。
[0006]一种具有镇痛作用的多肽，其特征在于所述多肽的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示；本专利技术多肽DH87，含有36个氨基酸残基，其氨基酸序列为 ACLGGFECKNSPNKDCSKSCLSVCSKQHKCKWKKDL，分子量为3876.01Da。
[0007]作为优选技术方案，所述多肽采用固相化学合成的方法获得。
[0008]上述多肽在镇痛药物中的应用。
[0009]作为优选技术方案，所述镇痛药物的制剂类型为溶液型、胶体溶液型、乳剂型或混悬型、口腔速溶药膜、口服液、胶囊、注射剂或透皮吸收制剂。
[0010]本专利技术的有益效果：
[0011]本专利技术的多肽DH87对钠通道Nav1.7有明显的抑制作用，是一种钠通道抑制剂。该多肽可有效减轻小鼠福尔马林模型、醋酸扭体模型的疼痛，可作为镇痛药物分子。
附图说明
[0012]图1为本专利技术多肽DH87的质谱图。
[0013]图2为本专利技术多肽DH87复性后高效液相色谱纯化图。
[0014]图3为本专利技术多肽DH87对电压门控钠通道Nav1.7的活性。
[0015]图4为本专利技术多肽DH87对福尔马林导致的小鼠疼痛模型的镇痛效果图。
[0016]图5为本专利技术多肽DH87对醋酸导致的小鼠疼痛模型的镇痛效果图。
具体实施方式
[0017]下面结合具体实施方式对本专利技术做进一步的说明，需要指出的是以下实施方式仅是以例举的形式对本专利技术所做的解释性说明，但本专利技术的保护范围并不仅限于此，所有本领域的技术人员以本专利技术的精神对本专利技术所做的等效的替换均落入本专利技术的保护范围。
[0018]实施例1
[0019]本专利技术多肽DH87的制备采用固相合成法，具体步骤如下。
[0020](1)分别称取0.1mM，0.64mmol/g的Rink Amide Resin和4倍过量的氨基酸以及5倍过量的HOBT/HATU缩合试剂作为之后的琢个偶联氨基酸的反应体系，以及配置20％的哌啶和5％的N
‑
甲基吗啉(均为与DMF的体积比)。
[0021](2)称取取代度为0.64mmol/g的Rink Amide Resin 0.15g用2
‑
3mL的DMF 在合成柱中浸泡30min，使其充分膨化，之后用真空泵将DMF抽滤掉。
[0022](3)向膨化后的树脂中加入20％的哌啶2
‑
3mL去保护8min，其间每隔2min 在旋转混合仪上摇匀，抽滤掉哌啶，再加适量20％的哌啶进行第二次去保护8min，其间依旧在混合仪上混匀。去保护后真空泵将液体抽干，再用DMF洗涤8次，每次约1.5mL，确保去保护剂洗涤干净。
[0023](4)在进行去保护的同时，活化从C端到N端需要依次偶联的氨基酸。即取0.19g HATU和0.069g HOBT各一份，以及4倍过量的氨基酸分别加入0.75ml 的5％的N
‑
甲基吗啉，溶解后将两者混合加入需要偶联的氨基酸中，放在旋转混合仪上摇匀，避光保存。活化时间为15
‑
20min。
[0024](5)将活化好的氨基酸加入到已去保护和DMF洗涤干净的树脂中，震荡使树脂和氨基酸溶液充分混匀，在生物摇床上进行偶联，平着放置，200rpm， 25℃，偶联相应氨基酸所需要的反应时间；其中，氨基酸偶联步骤中，依据各个氨基酸合成难易程度，设计不同的偶联时间。
[0025](6)偶联完一个氨基酸，依次往下偶联第二个氨基酸时，应先将第一个氨基酸上的Fmoc保护基团去掉，DMF洗涤8次之后再与活化了的第二个氨基酸进行反应。一个循环结束之后重复(3)
‑
(5)的操作。偶联到14号位的时候，进入到难偶联片段，提高相应的偶联时间。
[0026](7)全部偶联之后，去掉最后一个氨基酸的Fmoc保护，之后用DMF、无水甲醇洗涤，清洗完毕之后抽干，加入6mL的裂解液(TFA︰二巯基乙烷︰苯甲醚︰苯甲硫醚的体积比为90︰5︰2︰3)。放入旋转混匀仪中反应2h。反应完毕之后，去掉树脂，用50mL离心管收集裂解液，向裂解液中加冰乙醚至45mL，摇匀，静置2分钟，在3000r/min转速下离心5min，取出弃上清液，重复离心两次后得到的下层沉淀即为多肽粗品。
[0027](8)待多肽粗品溶解于水后，10000rpm，离心10min，取上清，0.22μm的滤头过滤。过滤后的样品用C18反相色谱柱(10mm
×
250mm，5μm)进行分离纯化，流动相的洗脱液配制：A(H2O，含0.1％TFA)；B(ACN，含0.1％TFA)，乙腈浓度变化范围为22％～40％，洗脱梯度为1％/min，洗脱速度为3ml/min，检测波长为280/215nm，收集目标组分冻干。
[0028](9)毒素分子质量的鉴定使用AB SCIEX TOF/TOFTM 5800型质谱仪，采用MALDI TOF进行检测。用0.1％TFA，50％乙腈，49.9％去离子水混合液制备基质CCA(αcyano 4 hydroxyc innamic acid)的饱和液，然后取1μL样品与1μL CCA的饱和液混合，再取0.5μL混合液点样于质谱的样品盘上，室温干燥后检测分子量。用外标法或内标法进行校正。结果见
图1，DH87线性多肽的分子量为3876.01Da，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0029](10)室温下，配制50mL复性液(0.1M NaCl、0.1M Tris
‑
HCl、5mM GSH 和0.5mM GS本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种具有镇痛作用的多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的一种具有镇痛作用的多肽，其特征在于，所述多肽采用固相化学合成的方法获得。3.权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾雄智，伍铭惠，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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