用于纯化分离病毒类抗原的液相色谱法制造技术

本发明专利技术公开了一种新型复合型层析介质，其具有独特的核壳结构，专为生物大分子的分离纯化而设计。其以高聚物微球为基质，粒径均一，粒径大小可以调节并精确控制，具有良好的物理化学稳定性。其表面经特殊处理，具有更好的亲水性，最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。并通过专有的表面修饰专利技术，通过精确控制两步关键的化学反应来建立壳层、核层的表面化学。两层的表面化学官能团可以选择和官能团密度可以调节、精确控制，并确保了壳层、核层的官能团的高密度和均一性，壳层、核层的厚度可以调节且均一性良好。该核壳结构复合模式层析介质可广泛适用于蛋白、抗体、病毒、病毒载体、疫苗、DNA、RNA、质粒等生物大分子的分离和纯化。纯化。

【技术实现步骤摘要】
用于纯化分离病毒类抗原的液相色谱法


[0001]本专利技术涉及复合模式层析介质液相色谱纯化分离应用领域。具体而言，本专利涉及一种化学合成的多孔亲水高分子微球，其具有独特的壳核结构，以及其在病毒、病毒载体、病毒样颗粒纯化分离的液相色谱应用。

技术介绍

[0002]液相色谱(Liquid Chromatography，LC)是从混合物中分离物质的重要工具。作为现代液相色谱的关键组成部分，液相色谱层析介质，多为固体多孔载体，可分为两大类：无机液相色谱层析介质(二氧化硅和相关无机氧化物)和有机液相色谱层析介质。而有机液相色谱层析介质可以进一步分为天然聚合物，如琼脂糖、纤维素、葡聚糖、壳聚糖及其衍生物，以及合成聚合物。
[0003]液相色谱在化学、生物化学、制药等前沿科学领域发挥着越来越重要的作用，越来越受到学术界和工业界的关注。一般来说，液相色谱在所有的制药过程中，包括发现、开发、制造过程和质量控制，都涉及并发挥着非常重要的作用。例如，它被广泛用于鉴定和分析样品中是否存在化学物质或微量元素，制备大量极纯材料，分离手性化合物，检测混合物和未知化合物的纯度，以及大规模分离和纯化药物。
[0004]生物制品(biologics)作为新的重要治疗剂出现，涵盖了广泛的产品，如各种重组治疗蛋白、疫苗、血液和血液成分、过敏原、细胞、基因治疗和组织。生物制品通常由糖类、蛋白质，核酸或它们的复杂组合组成，其来源可以是天然的，如从人类、动物或微生物中分离出来，或通过生物技术方法和其他尖端技术生产制备。它们通常处于生物医学研究的最前沿，可用于治疗各种其他方法难以治疗的严重疾病。
[0005]然而，由于生物药物的物理化学特性的异质性和其分离复杂性，因此其在生物药物的发现、开发和制造中存在许多挑战和未解决的问题。例如，1)它们的分子量(MW)、电荷和过渡期后修饰不同，因此先进的液相色谱表征和快速质量控制(QC)分析技术必不可少。2)可能与产品有关或与工艺有关的杂质，必须被去除和表征，因此生物医药的制备通常需要多个大规模和高纯度的纯化过程。3)由于其稳定性差和浓度低，必须优化下游纯化工艺，其目的是提高生产效率，降低生物制品的药物成本。例如，减少或简化LC工艺步骤、提高纯化速度、减少缓冲液的消耗和废物产生，都可以帮助提高生物医药的生产效率和降低其生产成本。
[0006]众所周知，生物制品的分离纯化主要依靠色谱技术。上述这些未满足且具有挑战性的需求为新液相色谱层析介质的开发提供了机会。随着研发和商业化管线中治疗性生物制品的数量不断增加，其结构的复杂性也在增加，对分析和分离的要求也相应增加。
[0007]虽然新液相色谱层析介质不时出现，但它们总体上跟不上生物制药行业的高要求，原因有以下几点：1)生物制药行业需要液相色谱平台产品，在下游纯化工艺(DSP)方面能够为新的生物制品提供系统化和平台化的解决方案，而不是为每个新的生物制品进行新的、通常是漫长的工艺开发。2)在生物药物的不同商业化阶段，所选择的液相色谱层析介质
缺乏可扩展性。从分析表征到生产，从小规模到大规模生产，这都是有问题的，而许多液相色谱介质在商业上只提供一定范围的微球大小和孔径大小，而且树脂化学的选择也很有限。即使最初的分析结果或小规模纯化结果很好，也不能保证商业化的液相色谱层析介质可以用于全面生产。3)缺乏通用的树脂化学或分离模式来满足个别的分离和纯化的挑战。工业界不仅需要一些具有常规性能的液相色谱层析介质以保持其低成本，而且还需要定制的液相色谱层析介质(或可以易于定制的液相色谱层析介质)以提高制造效率。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种合成的、多孔结构的、核壳结构的亲水高分子聚合物在纯化分离病毒、病毒载体、病毒样颗粒的液相色谱法中的应用。
[0009]本专利技术的第一方面，提供了一种用于纯化分离病毒类抗原的液相色谱法，所述方法包括如下步骤：
[0010]1)提供一层析介质、待分离病毒类抗原、第一缓冲液、第二缓冲液、在线清洗(CIP)溶液；
[0011]所述层析介质为合成的亲水高分子聚合物，且具有多孔结构，并且具有2
‑
5层结构；
[0012]2)以所述层析介质填装液相色谱设备的色谱柱，得到用于所述方法的液相色谱柱；
[0013]3)以所述第一缓冲液冲洗所述液相色谱柱；
[0014]4)将所述待分离病毒类抗原在步骤3)所得液相色谱柱上进行上样；
[0015]5)以所述第二缓冲液冲洗步骤4)所得液相色谱柱，收集分离产物，得到经分离的病毒类抗原；
[0016]6)以所述CIP溶液冲洗步骤5)所得液相色谱柱，收集分离产物，除去所述待分离病毒类抗原中的工艺相关杂质。
[0017]在另一优选例中，用于所述合成的亲水高分子聚合物的可聚合单体选自下组：(甲基)丙烯酸类单体、苯乙烯类单体、乙烯基类单体、或其组合。
[0018]在另一优选例中，所述多孔结构用于尺寸排阻分离；且
[0019]所述层析介质的至少一个内层和至少一个外层具有不同类型的结合功能基团，或者所述层析介质的至少一个内层和至少一个外层具有相同类型的、不同结合密度的结合功能基团，以使得所述层析介质的至少一个内层和至少一个外层具有不同的层析性能。
[0020]在另一优选例中，所述结合功能基团选自下组：亲水性基团、疏水性基团、离子基团、亲和性基团、混合模式功能基团。
[0021]在另一优选例中，所述亲水性基团选自下组：羟基、或通过2
‑
羟基乙硫醇、3
‑
硫烷基丙烷
‑
1,2
‑
二醇、葡聚糖、任何直链或支链多官能环氧化物进行化学改性而转化的基团。
[0022]在另一优选例中，所述疏水性基团选自下组：直链或支链C1
‑
C18烷基、低聚(环氧乙烷)、苯基、苄基及其衍生物；优选地，所述疏水性基团通过氧原子(O)、氮原子(N)、硫原子(S)、醚、酯或酰胺基团与所述层结构连接。
[0023]在另一优选例中，所述离子基团选自下组的阳离子基团：伯胺、仲胺、叔胺、或其组合。
[0024]在另一优选例中，所述伯胺为直链或支链C1
‑
C18烷基胺；更优选地，伯胺选自下组：乙胺、丁胺、己胺、辛胺、或其组合。
[0025]在另一优选例中，所述仲胺选自下组：二甲胺、二乙胺、或其组合。
[0026]在另一优选例中，所述叔胺选自下组：三甲胺、N，N
‑
二甲基丁胺、或其组合。
[0027]在另一优选例中，所述离子基团选自下组的阴离子基团：磺酸根基团、磷酸根基团、羧酸根基团及其含有相关基团的衍生物。
[0028]在另一优选例中，所述亲和性基团选自下组：蛋白A、蛋白L、蛋白G、3
‑
氨基苯基硼酸、正义/反义寡核苷酸、亚氨基二乙酸(IDA)、三(羧甲基)乙二胺(TED)、次氮基三乙酸(NTA)和其他金属螯合配体。
[0029]在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于纯化分离病毒类抗原的液相色谱法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)提供一层析介质、待分离病毒类抗原、第一缓冲液、第二缓冲液、在线清洗(CIP)溶液；所述层析介质为合成的亲水高分子聚合物，且具有多孔结构，并且具有2
‑
5层结构；2)以所述层析介质填装液相色谱设备的色谱柱，得到用于所述方法的液相色谱柱；3)以所述第一缓冲液冲洗所述液相色谱柱；4)将所述待分离病毒类抗原在步骤3)所得液相色谱柱上进行上样；5)以所述第二缓冲液冲洗步骤4)所得液相色谱柱，收集分离产物，得到经分离的病毒类抗原；6)以所述CIP溶液冲洗步骤5)所得液相色谱柱，收集分离产物，除去所述待分离病毒类抗原中的工艺相关杂质。2.如权利要求1所述液相色谱法，其特征在于，所述多孔结构用于尺寸排阻分离；且所述层析介质的至少一个内层和至少一个外层具有不同类型的结合功能基团，或者所述层析介质的至少一个内层和至少一个外层具有相同类型的、不同结合密度的结合功能基团，以使得所述层析介质的至少一个内层和至少一个外层具有不同的层析性能。3.如权利要求1所述液相色谱法，其特征在于，所述层析介质具有核壳结构。4.如权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于，所述层析介质具有选自下组的一个或多个特征：1)所述层析介质的比孔容为0.05mL/g
‑
3.0mL/g；2)所述层析介质的比表面积为40m2/g
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：毛慧明，许峰，杨克，胡新妹，黄学英，
申请(专利权)人：苏州赛分科技有限公司，
类型：发明
国别省市：