蛋白复合物及其应用制造技术

本发明专利技术属于免疫学和分子生物学技术领域，具体涉及一种蛋白复合物及其应用。本发明专利技术提供的蛋白复合物包括TIGIT的胞外段、TIGIT的跨膜区、CD28的胞内段，以及4

【技术实现步骤摘要】
蛋白复合物及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学和分子生物学领域，尤其涉及一种蛋白复合物，一种免疫抑制
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共刺激信号转换分子，一种多核苷酸，一种表达载体，一种细胞，一种免疫效应细胞，以及一种药物组合物及其在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。

技术介绍

[0002]过继细胞治疗(Adoptive Cell Therapy,ACT)是将经体外处理的自体或异体免疫细胞回输给患者，以增强患者免疫功能，达到治疗目的的方法。当前肿瘤ACT进展迅速，在多种类型恶性肿瘤的临床治疗中取得了非常好的疗效。
[0003]在各种ACT中，使用肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor Infiltrating Lymphocyte,TIL)在肿瘤治疗中已经被证明是一种非常成功的方法。TIL的ACT能够成功主要原因在于两方面：1)对于自体肿瘤表现出多样的抗原特异性；2)能够裂解并根除肿瘤。尽管取得了一定的成功，TIL治疗也面临以下技术难关：1)体外扩增往往有困难，尤其目前的TIL治疗需要大于10
10
个细胞数量级；2)TIL细胞大多数为耗竭细胞，进入体内要克服肿瘤的免疫抑制环境。
[0004]因此，目前亟需一种能够有效克服肿瘤微环境的免疫抑制的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于提供一种蛋白复合物，一种免疫抑制
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共刺激信号转换分子，一种多核苷酸，一种表达载体，一种细胞，一种免疫效应细胞，以及一种药物组合物及其在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途，旨在解决现有ACT疗法中存在肿瘤微环境对回输的细胞存在免疫抑制的技术问题。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术一方面，提供了一种蛋白复合物，其包括T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)的胞外段、TIGIT的跨膜区、CD28的胞内段，以及4
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1BB的胞内段。
[0007]在一些实施方案中，蛋白复合物还包括TIGIT的部分胞内段。进一步地，该TIGIT的胞内段的N端与跨膜区的C端连接。更进一步地，该TIGIT的胞内段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码该TIGIT的胞内段的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；胞外段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，编码胞外段的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，编码跨膜区的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，CD28的胞内段的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码CD28的胞内段的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，4
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1BB的胞内段的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，编码4
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1BB的胞内段的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。
[0008]在一些实施方案中，蛋白复合物还包括连接肽(link)，其连接CD28的胞内段与4
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1BB的胞内段。进一步地，连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，编码连接肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
[0009]在一些实施方案中，蛋白复合物还包括信号肽，该信号肽的C端与TIGIT的胞外段
的N端连接。进一步地，该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，编码该信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。
[0010]在一些实施方案中，CD28的胞内段的位置可以与4
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1BB的胞内段的位置互换，即，CD28的胞内段位于4
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1BB的胞内段的N端，或4
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1BB的胞内段位于CD28的胞内段的N端。进一步地，蛋白质复合物优选从N端至C端依次为：信号肽、TIGIT的胞外段、TIGIT的跨膜区、TIGIT的胞内段、CD28的胞内段和4
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1BB的胞内段，此时，蛋白质复合物的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；或
[0011]蛋白质复合物优选从N端至C端依次为：信号肽、TIGIT的胞外段、TIGIT的跨膜区、TIGIT的胞内段、CD28的胞内段、连接肽和4
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1BB的胞内段，此时，蛋白质复合物的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。
[0012]本专利技术另一方面，提供了一种免疫抑制
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共刺激信号转换分子(又称“Switch”)，其包括本专利技术提供的上述蛋白复合物。
[0013]在一些实施方案中，免疫抑制
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共刺激信号转换分子还可以包括本专利技术提供的上述蛋白复合物以外的蛋白复合物中的任意一种或几种，例如：以表达在胞外和跨膜区的、起免疫抑制作用的TIGIT，与作为共刺激信号蛋白的CD28的胞内区或4
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1BB的胞内区形成的蛋白复合物；或者以表达在胞外和跨膜区的、起免疫抑制作用的TIGIT，与不同于CD28的胞内区和4
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1BB的胞内区的共刺激信号蛋白形成的蛋白复合物；或者以不同于TIGIT且起免疫抑制作用的免疫抑制蛋白与任意一种共刺激信号蛋白形成的蛋白复合物。
[0014]本专利技术另一方面，提供了一种多核苷酸，该多核苷酸编码本专利技术提供的上述蛋白复合物。
[0015]在一些实施方案中，该多核苷酸的序列如SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18所示。
[0016]本专利技术另一方面，提供了一种表达载体，其包括本专利技术提供的上述多核苷酸。
[0017]在一些实施方案中，该表达载体选自慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺相关病毒载体、腺病毒载体、转座子载体系统中的至少一种。
[0018]本专利技术另一方面，提供了一种细胞，其包括本专利技术提供的上述载体。
[0019]在一些实施方案中，该细胞为T细胞、NK细胞、记忆T细胞、滤泡辅助性T细胞和/或调节性T细胞。进一步地，该细胞优选为肿瘤浸润T淋巴细胞。
[0020]本专利技术另一方面，提供了一种免疫效应细胞，其表达本专利技术提供的上述蛋白复合物。
[0021]在一些实施方案中，该免疫效应细胞为T细胞、NK细胞、记忆T细胞、滤泡辅助性T细胞和/或调节性T细胞。进一步地，该免疫效应细胞优选为肿瘤浸润T淋巴细胞。
[0022]本专利技术另一方面，提供了一种药物组合物，其包括本专利技术提供的上述蛋白复合物、上述免疫抑制
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共刺激信号转换分子、上述多核苷酸、上述表达载体、上述细胞、上述免疫效应细胞中的至少一种。
[0023]本专利技术最后一方面，提供了上述药物组合物在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用。
[0024]在一些实施方案中，该药物组合物用于制备预防或治疗肺癌、宫颈癌、黑色素瘤、胃癌和/或乳腺癌的药物。
[0025]TIGIT广泛表达于多种免疫效应细胞。当TIGIT与肿瘤细胞表面表达的配体结合，
激活了免疫抑制性信号通路，使免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白复合物，其特征在于，包括TIGIT的胞外段、TIGIT的跨膜区、CD28的胞内段，以及4
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1BB的胞内段。2.根据权利要求1所述的蛋白复合物，其特征在于，所述蛋白复合物还包括TIGIT的胞内段；优选地，所述TIGIT的胞内段的N端与所述跨膜区的C端连接；更优选地，所述TIGIT的胞内段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码所述TIGIT的胞内段的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述胞外段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，编码所述胞外段的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，编码所述跨膜区的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，所述CD28的胞内段的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码所述CD28的胞内段的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述4
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1BB的胞内段的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，编码所述4
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1BB的胞内段的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；和/或所述蛋白复合物还包括连接肽，所述连接肽连接所述CD28的胞内段与所述4
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1BB的胞内段；优选地，所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，编码所述连接肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；和/或所述蛋白复合物还包括信号肽，所述信号肽的C端与所述胞外段的N端连接；优选地，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，编码所述信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。3.根据权利要求2所述的蛋白复合物，其特征在于，所述CD28的胞内段位于所述4
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1BB的胞内段的N端，或所述4
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1BB的胞内段位于所述CD28的胞内段的N端；优选地，所述蛋白质复合物优选从N端至C端依次为：所述信号肽、所述TIGIT的胞外段、所述TIGIT的跨膜区、所述TIGIT的胞内段、所述CD28的胞内段和所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚拯，李亚腾，李斌，李文静，高青，刁树青，王泽瑶，
申请(专利权)人：青岛华赛伯曼医学细胞生物有限公司，
类型：发明
国别省市：