细胞治疗组合物及其制备方法和作为过敏性反应及自身免疫疾病治疗药物的应用技术

本发明专利技术提供了一种细胞治疗组合物，将I gE(CH3)DC与CI K细胞共培养得到的I gE(CH3)DC

【技术实现步骤摘要】
细胞治疗组合物及其制备方法和作为过敏性反应及自身免疫疾病治疗药物的应用


[0001]本专利技术涉及细胞免疫领域，具体涉及一种细胞治疗组合物及其制备方法和用于治疗过敏性反应及自身免疫疾病的用途。

技术介绍

[0002]目前治疗过敏性反应，比如过敏性哮喘，主要使用糖皮质激素类广谱免疫抑制剂。该类药物虽然对过敏性反应的控制有一定效果，但由于对大多数免疫细胞均有抑制作用，所以副作用明显，如长期使用会导致机体免疫功能低下，易诱发感染、肿瘤等疾病。
[0003]因此，如何研发一种没有副作用或副作用较小的过敏性反应治疗药物，一直是本领域技术人员致力于开发的方向之一。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的，就是为了解决上述问题而提供了一种细胞治疗组合物及其制备方法，该细胞治疗组合物能有效治疗过敏源引起的变态反应性疾病及急性转移植物抗宿主病乃至目前流行性新冠病，且不具有任何副作用。
[0005]本专利技术的目的是这样实现的：
[0006]本专利技术提供了一种细胞治疗组合物，包括治疗有效量的DC细胞、CIK细胞和MSC细胞。
[0007]上述的细胞治疗组合物，其中，所述DC细胞和CIK细胞为自体细胞，所述MSC细胞为同种异体细胞,且所述DC细胞携带IgE的CH3蛋白片段。
[0008]本专利技术还提供了一种细胞治疗组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0009](1)自体外周血单个核细胞的制备；
[0010](2)DC细胞的分离和培养；
[0011](3)CIK细胞的诱导培养；
[0012](4)DC细胞中加入IgE的CH3蛋白片段，制备IgE(CH3)DC细胞；
[0013](5)IgE(CH3)DC细胞与CIK细胞共培养，制备IgE(CH3)DC
‑
CIK细胞；
[0014](6)IgE(CH3)DC
‑
CIK细胞与同种异体MSC细胞共培养制备细胞治疗组合物。
[0015]上述的一种细胞治疗组合物的制备方法，其中，步骤(4)中，所述CH3蛋白片段的浓度为50ug
‑
500ug/1
×
107DC细胞。
[0016]上述的一种细胞治疗组合物的制备方法，其中，步骤(4)中，所述CH3蛋白片段采用真核细胞基因表达得到。
[0017]上述的一种细胞治疗组合物的制备方法，其中，步骤(5)中，IgE(CH3)DC细胞与CIK细胞按照1:3
‑
5的细胞数量比例混合共培养。
[0018]上述的一种细胞治疗组合物的制备方法，其中，步骤(6)中，MSC细胞与IgE(CH3)DC
‑
CIK细胞按照1:10
‑
50的细胞数量比例混合共培养。
[0019]上述IgE(CH3)DC
‑
CIK细胞与MSC细胞共培养得到的细胞治疗组合物可作为治疗过敏性反应及自身免疫疾病的细胞类药物。
[0020]IgE(CH3)基因表达后糖基化与DC细胞上甘露糖受体结合，与CIK共培养，DC是专职呈递细胞，DC与IgE(CH3)识别递呈再与CIK共培养可促进CIK的增殖，同时CIK细胞对DC的成熟也有促进作用，这些功能是通过DC与CIK分泌互补的细胞因子来完成。在IgE(CH3)DC与CIK共培养过程中激发CIK的细胞活性，使CIK等T杀伤细胞赋予IgE(CH3)的记忆性，在机体内清除病源体细胞，降低变态反应性疾病的发生，即为细胞介导的细胞免疫效应。
[0021]DC在培养过程中内化携带IgE(CH3)，激活DC细胞的MHCⅡ分子，形成复合物，然后递呈予Th细胞，在体内激活的Th细胞通过信号分子识别B细胞，引起B细胞增殖、抗体的产生以及抗体类别的转换，为B细胞介导的体液免疫效应。
[0022]本专利技术在选择MSC细胞与IgE(CH3)DC
‑
CIK细胞再共培养，在IgE(CH3)DC
‑
CIK的培养体系的特定的微环境中，MSC通过共培养的细胞间的接触、内化作用，可分泌多细胞因子，特别是分泌一种倾化因子可训化共培养条件下的T效应细胞，使其在特定的培养条件被诱导分化成不同表型特征的细胞，注入体内可更有效地清除分泌IgE或结合IgE(CH3)的病源体细胞。
[0023]MSC(人脐带间充质干细胞)本身是一种早期不表达MHC基因且对免疫系统有良好的调节作用，很多实验证明MSC是治疗过敏源引起的变态反应性疾病及急性转移植物抗宿主病乃至目前流行性新冠病均已取得良好结果。
[0024]本专利技术涉及对变态反应性疾病：
①
T细胞免疫效应；
②
DC呈递CH3抗原产生的细胞免疫效应；
③
MSC
S
单项免疫调节效应及其MSC与上述DCCIK细胞的协同、连动功能性效应。本专利技术运用IgE(CH3)DCCIK+MSCs共培养细胞治疗过敏性反应及自身免疫疾病，通过实验证明会产生更为有利的结果，且不具有任何副作用。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。下述实施例中所述试剂原料除非注明来源外，均为市售的常见原料，试剂的配制采用常规方法。实施例中未详述的方法均为本领域常规操作。
[0026]专利技术中的实施例均选用SD大鼠作为验证实验动物。
[0027]实施例1：全基因组PCR获取IgE的CH3基因片段并构建重组质粒
[0028]合成PCR两对引物P1和P2。引物P1和P2的5
’
端和3
’
端的酶切位点分别引入EcoR
Ⅴ
和EcoRⅠ酶切位点，以构建pVAC
‑
CH3重组质粒。
[0029]P1:5
’‑
GGGATATCATGCCGACAGATCATGAGCCACG
‑3’
(下划线部分为EcoR
Ⅴ
酶切位点)
[0030]P2:5
’‑
GGGAATTCTCACTGGGGAAGGGTGATGGAAC
‑3’
(下划线部分为EcoRⅠ酶切位点)
[0031]以SD大鼠全基因组DNA为模板，建立100μL的反应体系，包括10
×
PCR反应缓冲液10μL、25mMMgCl26μL、DMSO5Μl、dNTP8μL、上下游引物各4μL、大鼠全基因组DNA 4μL和水60μL。然后进行PCR反应，95℃预变性5min后加入TaqDNA聚合酶3.2μL。反应条件为：94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸2min，共进行39个循环。最后一个循环72℃延伸10min，4℃保存。
[0032]重组质粒pVAC
‑
CH3的构建
[0033]以全基因组DNA为模板，应用引物P1、P2扩增出IgE的CH3片段，连入PMD18
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞治疗组合物，其特征在于，包括治疗有效量的DC细胞、CIK细胞和MSC细胞。2.根据权利要求1所述的细胞治疗组合物，其特征在于，所述DC细胞和CIK细胞为自体细胞，所述MSC细胞为同种异体细胞,且所述DC细胞携带IgE的CH3蛋白片段。3.一种细胞治疗组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)自体外周血单个核细胞的制备；(2)DC细胞的分离和培养；(3)CIK细胞的诱导培养；(4)DC细胞中加入IgE的CH3蛋白片段，制备IgE(CH3)DC细胞；(5)IgE(CH3)DC细胞与CIK细胞共培养，制备IgE(CH3)DC
‑
CIK细胞；(6)IgE(CH3)DC
‑
CIK细胞与同种异体MSC细胞共培养制备细胞治疗组合物。4.如权利要求3所述的一种细胞治疗组合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述CH3蛋白片段的浓度为50ug...

【专利技术属性】
技术研发人员：张尚权，刘晓燕，徐剑飞，关战军，李宗林，袁艳婷，
申请(专利权)人：埃尔利生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：