一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基及其分化方法技术

本发明专利技术公开了一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，属于生物技术领域，包括如下成分：IMDM培养基、DMEM

【技术实现步骤摘要】
一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基及其分化方法


[0001]本专利技术属于生物
，特别是一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基及其分化方法。

技术介绍

[0002]自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。
[0003]自然杀伤细胞(Natural Killer Cell,NK),因其杀伤肿瘤细胞或者病毒感染的细胞无需预先致敏而得名,是人体免疫监视的第一道防线.具有强大的抗肿瘤作用以及良好的安全性，NK细胞以多种细胞表型出现在中枢和外周免疫器官及多个非免疫器官,在机体免疫的早期发挥重要的监视作用：在肝脏中,能够通过直接的细胞毒性作用和产生γ
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干扰素等效应分子杀死肝星状细胞,起到明显的抗肝纤维化作用,同时也会对肝脏造成一定的损伤.NK细胞的生理性或病理性改变都对妊娠过程有重要影响，并且，免疫系统在控制和根除肿瘤细胞中起着重要作用。
[0004]近年,由于疗效显著,免疫疗法在肿瘤治疗中备受关注.自然杀伤(NK)细胞是机体固有免疫系统效应细胞,无需抗原提呈,即可识别并杀伤肿瘤细胞.随着对NK细胞杀伤肿瘤细胞作用机制的深入研究,以NK细胞为基础的血液系统肿瘤细胞免疫疗法备受关注。
[0005]NK细胞对多种类型肿瘤均具有细胞毒性作用,NK细胞和其他临床肿瘤治疗方法的联合应用,特别是近几年抗肿瘤临床转化上对NK细胞的应用越来越多，因此，如何通过体外培养获得满足临床需要的NK细胞已成为近年来学者们研究的热点问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基及其分化方法，以解决现有技术中的不足。
[0007]本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，包括如下成分：
[0009]IMDM培养基、DMEM
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F12培养基和stemlineⅡ造血干细胞培养基。
[0010]进一步的，还包括如下成分：
[0011]葡萄糖、L
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谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚硒酸钠、非必须氨基酸以及细胞因子。
[0012]进一步的，所述IMDM培养基、DMEM
‑
F12培养基和stemlineⅡ造血干细胞培养基对应的体积比为1:2:1。
[0013]进一步的，所述葡萄糖的浓度含量为1000
‑
2500mg/l；所述L
‑
谷氨酰胺的浓度含量为0.5
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5mM；所述丙酮酸钠的浓度含量为10
‑
50ng/l；所述亚硒酸钠的浓度含量为10
‑
50ng/
l；所述非必须氨基酸的浓度含量为10
‑
100ug/l。
[0014]优选的，所述葡萄糖的浓度含量为1500mg/l；所述L
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谷氨酰胺的浓度含量为2mM；所述丙酮酸钠的浓度含量为20ng/l；所述亚硒酸钠的浓度含量为20ng/l；所述非必须氨基酸的浓度含量为20ug/l。
[0015]进一步的，所述细胞因子包括：IL
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7、IL
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15、SCF、Flt3L、SR
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1、UM171。
[0016]进一步的，所述IL
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7的浓度含量为10
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100ng/ml；所述IL
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15的浓度含量为5
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50ng/ml；所述SCF的浓度含量为10
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100ng/ml；所述Flt3L的浓度含量为5
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50ng/ml；所述SR
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1的浓度含量为0.5
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1nmlo/ml；所述UM171的浓度含量为10
‑
50nmlo/ml。
[0017]一种将造血干细胞分化成自然杀伤细胞的方法，使用上述权利要求1～7中任意一项所述的培养基，将造血干细胞分化成自然杀伤细胞，包括第一阶段培养和第二阶段培养，具体是：
[0018]在第一阶段，使用浓度为20ug/ml的IL
‑
3包被过夜的低吸附培养板在上述培养基中培养细胞7天，期间期间每隔3天的时间对细胞进行半换液；
[0019]在第二阶段，将细胞转入上述培养基在超低吸附培养板培养细胞7天，期间每隔3天的时间对细胞进行半换液即可。
[0020]进一步的，所述造血干细胞包括造血祖细胞。
[0021]本专利技术具有如下有益效果：
[0022]本专利技术使用纯细胞因子法配制培养基，避免了血清的使用，降低了污染源从而避免污染；本专利技术避免了一些其他细胞系作为饲养诱导条件，使分化出的细胞更为安全，降低未知风险。
附图说明
[0023]图1是流式检测实施例1及其对比组的CD3
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CD56+阳性率的结果图；
[0024]图2是流式检测实施例2及其对比组的CD3
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CD56+阳性率的结果图；
[0025]图3是流式检测阴性组的CD3
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CD56+阳性率的结果图；
[0026]图4是实施例1及其对比组、实施例2及其对比组的阳性率柱状图。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例1
[0029]本实施例采用的培养基配方以100m体系为例：IMDM培养基25ml、DMEM
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F12培养基50ml及stemlineⅡ造血干细胞培养基25ml，葡萄糖浓度1500mg/l，L
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谷氨酰胺浓度2mM,丙酮酸钠浓度20ng/l，亚硒酸钠浓度20ng/l，非必须氨基酸浓度20ug/l，IL
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7浓度为50ng/ml，IL
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15浓度为25ng/ml，SCF浓度为50ng/ml，Flt3L浓度为25ng/ml，所述SR
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1浓度为35uM，UM171浓度为35uM。
[0030]实施例1中提前一天使用含有浓度为20ug/ml IL
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3的DPBS包被六孔低吸附培养
板，在4℃冰箱过夜。包被好的培养板用DPBS清洗3遍造血干细胞接种入分化培养基的接种数为12万/ml；接种当天记为第0天，在该条件下培养造血干细胞7天，期间期间每隔3天的时间对细胞进行半换液；在第8天，将细胞转移至新的超低吸附培养板中，培养基及培养条件不变至培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，其特征在于，包括如下成分：IMDM培养基、DMEM
‑
F12培养基和stemlineⅡ造血干细胞培养基。2.根据权利要求1所述的一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，其特征在于，还包括如下成分：葡萄糖、L
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谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚硒酸钠、非必须氨基酸以及细胞因子。3.根据权利要求2所述的一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，其特征在于，所述IMDM培养基、DMEM
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F12培养基和stemlineⅡ造血干细胞培养基对应的体积比为1:2:1。4.根据权利要求3所述的一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，其特征在于，所述葡萄糖的浓度含量为1000
‑
2500mg/l；所述L
‑
谷氨酰胺的浓度含量为0.5
‑
5mM；所述丙酮酸钠的浓度含量为10
‑
50ng/l；所述亚硒酸钠的浓度含量为10
‑
50ng/l；所述非必须氨基酸的浓度含量为10
‑
100ug/l。5.根据权利要求4所述的一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，其特征在于，所述葡萄糖的浓度含量为1500mg/l；所述L
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谷氨酰胺的浓度含量为2mM；所述丙酮酸钠的浓度含量为20ng/l；所述亚硒酸钠的浓度含量为20ng/l；所述非必须氨基酸的浓度含量为20ug/l。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹哲厚，吴立前，马悦悦，
申请(专利权)人：杭州原生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：