体外诊断检测试剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及体外诊断检测试剂及其制备方法和应用，检测试剂包括中空金纳米颗粒和负载于中空金纳米颗粒表面的功能分子，中空金纳米颗粒为中空多孔结构，且中空金纳米颗粒的粒径为50

【技术实现步骤摘要】
体外诊断检测试剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及药学
，特别涉及体外诊断检测试剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]免疫层析技术是一种将色谱层析技术与免疫技术相结合的免疫分析技术，目前市场上的免疫层析试纸条多使用胶体金或者胶体硒作为检测标志物，具有操作简便，成本低，快速，检测标本种类多等优点，在疾病诊断、兽药残留、食品安全检测等领域具有广泛的用途。胶体金免疫层析试纸条的基本原理是利用抗原抗体结合反应，在层析过程中，胶体金标记物随样品溶液通过毛细作用在构建好的试纸条上移动，当移动到反应垫上时与测试线T上埋好的相应受体结合被固定，聚集后显红棕色，T线的颜色深浅大致反映了样品中待测物的含量，同时设置质控线C，以验证检测结果是否有效。基本检测方法包括双抗体夹心法：用于较大分子抗原检测；间接法：用于抗体检测；竞争法：用于小分子抗原检测。
[0003]常见的产品例如早孕试纸条，由样品垫，金标垫，反应垫和吸水垫构成，反应垫上划有检测线T线和质控线C线，使用双抗体夹心法，当样本中待检测的人绒毛膜促性腺激素滴入在样品垫上，在吸水垫的毛细作用下进行移动，然后与金标垫上的金标抗体结合，继续移动到反应垫上与质控线和检测线上的单抗二结合后聚集显色，即代表阳性反应。但是目前胶体金免疫层析技术灵敏度不高，导致只能进行一些疾病的初筛，可信度不高，准确诊断还需要借助其他技术，不利于临床诊断。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要提供一种能够提高体外诊断灵敏度的检测试剂及其制备方法和应用。
>[0005]一种检测试剂，所述检测试剂包括中空金纳米颗粒和负载于所述中空金纳米颗粒表面的功能分子，所述中空金纳米颗粒为中空多孔结构，且所述中空金纳米颗粒的粒径为50
‑
120nm，吸收波长为500nm
‑
700nm，所述功能分子为抗体、抗原、核酸或标志蛋白。
[0006]上述检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
[0007]获取所述中空金纳米颗粒的分散液；
[0008]将功能分子负载至所述中空金纳米颗粒的表面，制得所述检测试剂。
[0009]一种试纸条，包含有上述检测试剂。
[0010]一种试剂盒，包括上述检测试剂，或上述试纸条。
[0011]一种检测药物有效性的方法，包括采用上述试剂盒检测待测药物的步骤。
[0012]上述检测试剂，或上述试纸条在人兽疾病中间结果鉴定、食品安全检测和兽药残留检测中的应用。
[0013]本专利技术具有以下有益效果：
[0014]上述检测试剂通过中空金纳米颗粒负载功能分子，相比于传统的胶体金纳米颗粒，检测下限明显降低。同时本专利技术的中空金纳米颗粒，相比于常用的胶体金，粒径更大，不
易团聚，且为多孔结构，比表面积更大，与功能分子的亲和力更大，故能显著提高功能分子荷载量，进而能够达到提高检测的灵敏性的目的。且中空金纳米颗粒具有优异的对酸碱盐的稳定性，可以提高检测试剂的稳定性，所使用的中空金纳米颗粒外观与胶体金的红棕色不同，呈墨绿色，聚集后可以用肉眼有效的分辨出是否显阳性反应，并且较易分辨出深浅，可以用在传统的免疫层析试纸条中来进行简单的定量。
[0015]此外，上述检测试剂还可以用于SPR芯片技术中作放大检测信号的增强试剂，相比于传统的胶体金作为增强试剂，具有更高的检测灵敏度，并且可以缩短检测时间，例如：本专利技术的检测试剂对样本中新冠中和抗体的检测灵敏度能够提高约16倍，并且OD
650
‑
OD
590
的值与浓度的相关系数更高，表明本专利技术的检测试剂联合SPR芯片可在一定的检测范围内进行定量检测或半定量检测，克服了传统方法难以实现定量或半定量的缺陷。还可以与PEI反应作为SPR芯片上的孵育试剂用作结合包被蛋白，与长金法生成孵育试剂相比，能显著提高SPR芯片的检测线性范围和检测灵敏度。
附图说明
[0016]图1为胶体金(左)和本专利技术的检测试剂联合SPR芯片(右)检测新冠中和抗体原理图；
[0017]图2为本专利技术一实施方式的试纸条的示意图；
[0018]图3为对比例1的胶体金检测血浆中新冠中和抗体扫谱图(500nm
‑
700nm)；
[0019]图4为对比例1的胶体金吸光度和时间关系图(0
‑
4.5min)；
[0020]图5为对比例1的胶体金检测新冠中和抗体的吸光度和浓度关系图；
[0021]图6为实施例1的中空金检测血浆中新冠中和抗体扫谱图(500nm
‑
700nm)；
[0022]图7为实施例1的中空金吸光度和时间关系图(0
‑
4.5min)；
[0023]图8为实施例1的中空金检测新冠中和抗体的吸光度和浓度关系图。
具体实施方式
[0024]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0025]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0026]本专利技术一实施方式提供了一种检测试剂，检测试剂包括中空金纳米颗粒(NHGNPs)和负载于中空金纳米颗粒表面的功能分子，中空金纳米颗粒为中空多孔结构，且中空金纳米颗粒的粒径为50
‑
120nm，吸收波长为500nm
‑
700nm，功能分子为抗体、抗原、核酸或标志蛋白。
[0027]本专利技术技术人员在研究中发现，传统的免疫层析技术常采用胶体金或者胶体硒作为检测标志物，其灵敏度不高，且为实心纳米金，粒径约为30
‑
40nm，摩尔吸光系数较小亮度不足，比表面积小，静电吸附作用负载的抗体/抗原不足，导致检测灵敏度不高。且目前大多
数免疫层析技术无法实现定量或半定量检测，例如心衰的诊断，心衰的典型蛋白标志物是可溶性裂解基质素sST2和pro
‑
BNP蛋白，但是这两种蛋白在血浆中的含量与心衰病程具有明显正相关性，单纯靠胶体金试纸条检测出有和无的差别意义并不大。
[0028]此外，本专利技术技术人员在研究中还发现：表面等离子体共振传感(SPR)技术是近年来快速发展的一种体外诊断模式，具有灵敏度高、所需试样少、能够实时检测等优点。目前报道的一种新型纳米等离子光学传感器(Nanoplasmonic Sensor)芯片，纳米等离子光学检测系统结构简单，成本低，操作简便，可以采用普通的酶标仪或光学显微成像系统进行检测，使用胶体金作为信号增强试剂，用于进行新冠病毒抗原或血浆中新冠中和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括中空金纳米颗粒和负载于所述中空金纳米颗粒表面的功能分子，所述中空金纳米颗粒为中空多孔结构，且所述中空金纳米颗粒的粒径为50
‑
120nm，吸收波长为500nm
‑
700nm，所述功能分子为抗体、抗原、核酸或标志蛋白。2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述功能分子为S
‑
RBD蛋白或N蛋白；或所述功能分子为CRP单克隆抗体；或所述功能分子为NT
‑
proBNP单克隆抗体和/或sST2单克隆抗体；或所述功能分子为非洲猪瘟病毒单克隆抗体或小鹅瘟病毒单克隆抗体。3.权利要求1
‑
2任一项所述的检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：获取所述中空金纳米颗粒的分散液；将所述功能分子添加到中空金纳米颗粒的分散液中，孵化，封闭，离心，重分散，制得所述检测试剂。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，采用以下方法获取所述中空金纳米颗粒的分散液：将柠檬酸盐、钴源(优选为氯化钴、氟化钴或溴化钴)和溶剂混合，制得混合液；其中，所述钴源为能够提供二价钴离子的盐；在真空环境下，向所述混合液中加入还原性硼氢化盐溶液(优选为硼氢化钠或硼氢化钾)进行反应；通入空气，并加入氯金酸溶液，进行反应，获得反应液，所述反应液为所述中空金纳米颗粒的分散液。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，采用以下方法获取中空金纳米颗粒分散液：将6mL0.05M柠檬酸钠、300μL0.4M氯化钴和300mL水混合，制得混合液；惰性气体氛围下，向所述混合液中加入3mL0.13mM的硼氢化钠溶液，进行反应；待溶液从无色逐渐变深至深灰色后，通入空气并加入1.5mL的25mM的氯金酸溶液，搅拌12
‑
36h，制得所述中空纳米颗粒分散液；加入PVP K30溶液，在0
‑
4℃的条件下离心，收集沉淀物；将所述沉淀物重分散，制得所述中空金纳米颗粒的分散液；或采用以下方法获取中空金纳米颗粒分散液：将6mL0.05M柠檬酸钠、300μL0.4M氯化钴和60mL水混合，制得混合液；惰性气体氛围下，向所述混合液中加入3mL0.13mM的硼氢化钠溶液，进行反应；待溶液从无色逐渐变深至深灰色后，在0
‑
4℃的条件下搅拌5
‑
20min，通入空气并加入1.5mL的25mM的氯金酸溶液稀释至4.5mL，搅拌12...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈雁，涂家生，罗昌友，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：