一株黄曲霉拮抗菌的应用制造技术

一株黄曲霉拮抗菌的应用，将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀；所述生防菌Pantoea vagans BWL1，已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M2021001。经过发明专利技术方法处理饲料，黄曲霉病受到显著抑制，AFB1产生量降低约90%。AFB1产生量降低约90%。AFB1产生量降低约90%。

【技术实现步骤摘要】
一株黄曲霉拮抗菌的应用


[0001]本专利技术涉及一种株黄曲霉拮抗菌的应用，属于农产品贮藏


技术介绍

[0002]黄曲霉会侵染一些重要粮食和经济作物，例如玉米、花生、豆类等，并且在储藏、运输等过程中，产生大量的致癌性剧毒化合物
‑
黄曲霉毒素，造成大量粮食和饲料等损失。
[0003]黄曲霉毒素对畜禽和人类的健康存在巨大威胁。黄曲霉毒素(aflatoxin，AFT)是一种真菌毒素，由黄曲霉产生。黄曲霉毒素为剧毒物质，其毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，已被证实具有致癌、致畸、致细胞突变的作用，被国际癌症研究机构评定为Ι类致癌物质，是肝癌的主要致癌物质。研究表明全球有5亿以上的发展中国家的人口长期受到黄曲霉毒素的威胁。畜禽采食黄曲霉毒素污染的饲料会导致中毒、疾病甚至死亡，给畜牧业造成巨大的经济损失，而奶牛采食被黄曲霉污染的饲料，不但产奶性能降低，肝功能受损，免疫力下降，而且毒素还会转移到牛奶中，对人类健康造成严重威胁。黄曲霉毒素主要分为B1，B2，G1， G2，M1和M26亚型，其中B1(Aflatoxin，AFB1)毒性最强。研究表明我国饲料中AFB1 的污染很普遍；其中，饼粕类中的AFB1超标率最高，为13.2％，其含量超过国家规定的限量标准1倍以上，存在较高的安全隐患。此外，黄曲霉毒素具有非常稳定的理化性质，工业加工、日常烹饪及巴氏消毒均不能有效地去除黄曲霉毒素，这使得黄曲霉毒素在食物链中持续存在而长期威胁公众的身体健康。因此，为了保护动物和人类健康，需要采取措施降低饲料黄曲霉毒素污染。
[0004]现有的黄曲霉毒素防控手段主要包括化学防控和生物防控。化学防控是通过采用化学试剂控制黄曲霉菌生长或破坏黄曲霉毒素。但利用自然界天然存在的拮抗微生物的生物防控手段被认为是很有潜力、吸引力、有很好的可控效果的。同时，生物防控技术得到了广泛的认可，特别是在环境保护上，可以替代很多人工合成的化学试剂的使用，减少了环境污染。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一株黄曲霉拮抗菌的应用。
[0006]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一株黄曲霉拮抗菌的应用，将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀；所述生防菌Pantoeavagans BWL1，已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国武汉，武汉大学。保藏编号为CCTCC NO：M2021001。
[0007]优选的技术方案为：所述微生物制剂的生防菌Pantoea vagans BWL1的活菌数大于或等于108CFU/mL。
[0008]优选的技术方案为：微生物制剂与饲料的质量比例为1:500
‑
1000。
[0009]由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有的优点是：
[0010]1、本专利技术筛选得到一株生防菌Pantoea vagans BWL1，能够高效拮抗青霉菌和灰
霉菌。
[0011]2、经过专利技术方法处理饲料，黄曲霉病受到显著抑制，AFB1产生量降低约90％。
附图说明
[0012]图1为Pantoea vagans BWL1形态。标尺＝50μm。
[0013]图2为Pantoea vagans BWL1对黄曲霉生长的抑制作用。通过平板对峙法可见Pantoeavagans BWL1能有效抑制黄曲霉菌丝生长。
[0014]图3为Pantoea vagans对黄曲霉菌的孢子萌发、芽管伸长的抑制作用。标尺＝20μm。
[0015]图4为Pantoea vagans BWL1对花生黄曲霉病的抑制效果。
[0016]图5为Pantoea vagans BWL1对花生黄曲霉素AFB1产生量的抑制效果。
[0017]图6为Pantoea vagans BWL1对玉米黄曲霉病的抑制效果。
[0018]图7为Pantoea vagans BWL1对玉米黄曲霉素AFB1产生量的抑制效果。
具体实施方式
[0019]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效。
[0020]实施例1：一株黄曲霉拮抗菌的应用
[0021]一株高效拮抗黄曲霉菌的生防菌Pantoea vagans BWL1，已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2021001。生防菌Pantoea vagans BWL1，分离自健康柑橘果实表面，是果实习居菌，采用平板对峙法，发现生防菌Pantoea vagans BWL1 对黄曲霉菌具有显著抑制作用。生防菌Pantoea vagans BWL1分离、筛选、鉴定方法如下。
[0022](1)拮抗菌的分离
[0023]取市售健康柑橘，放入已灭菌的500mL烧杯中，加入灭菌水200mL，150r/min振荡1h。取悬浮培养液稀释成10
‑1、10
‑2、10
‑3后，取100μL涂布到LB固体平板上，25℃倒置静止培养24h。挑取单菌落到新的LB固体平板进行划线培养，对获得的单克隆菌株第二次划线培养，获得纯种菌株。
[0024]获得的菌株保藏于30％的甘油中，置于
‑
80℃低温环境中。
[0025]所述的LB培养基，其制作方法为：在950mL的去离子水中加入酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，NaCl 10g，溶解后以5N的NaOH调节pH至7.0，定容至1L，121℃高压蒸汽灭菌 20min后备用。
[0026](2)拮抗菌的筛选
[0027]菌株的抑菌效果测试采用平板对峙法。将黄曲霉菌菌丝块接种于PDA平板上，25℃培养 7天，此时黄曲霉菌大约长到2/3
‑
3/4盘，以打孔器从平板上靠近菌丝边缘位置取直径0.5cm 的黄曲霉菌菌饼，接种到新的PDA平板上，25℃培养3
‑
5天；将已纯化的细菌接种于液体 LB培养基中，25℃培养过夜，以接种环蘸取菌液在黄曲霉菌平板上划线，25℃培养3天后观察抑菌效果。
[0028]所述的PDA培养基，即常用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
[0029](3)拮抗菌的鉴定
[0030]选取有抑制效果的菌株，通过对16s rDNA、ATP synthase(atpD)和recombinase(recA)基因进行扩增并测序，在NCBI(美国国家生物技术信息中心)数据库中进行比对，将菌株鉴定为 Pantoea vagans，并将菌株编号为BWL1。16s rDNA、atpD和recA基因扩增片段已提交至NCBI 数据库，序列号依次为MW133037、MW221267和MW221265。
[0031]鉴定所用引物、PCR反应条件以及扩增片段序列如下：
[0032]16SrDNA基因扩增片段测序结果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株黄曲霉拮抗菌的应用，其特征在于：将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀；所述生防菌Pantoea vagans BWL1，已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M2021001。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丹凤，王永海，叶应旺，杨友洋，毕婉玲，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：