一种与耳听力相关的基因及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体的说，涉及一种与耳听力相关的基因及其应用。本发明专利技术公开了一种改善耳听力的产品，其特征在于，所述改善耳听力的产品含提高下述蛋白质表达的物质。在Atoh1

【技术实现步骤摘要】
一种与耳听力相关的基因及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体的说，涉及一种与耳听力相关的基因及其应用。

技术介绍

[0002]哺乳动物中，TGF
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β超家族成员在大多数发育和生理过程中都是细胞增殖和分化的有效调节因子。然而，其家族成员Tgfbr1在小鼠耳蜗中的表达尚不清楚。基于现有技术中对Tgfbr1与耳听力的关系的研究不足，对于Tgfbr1与耳听力的关系进行了进一步探求。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种与耳听力相关的基因并提供一种改善耳听力的方法。
[0004]本专利技术提供了一种蛋白质，所述蛋白质为如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：
[0005]A1)氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质；
[0006]A2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且与植物耐盐性和抗旱性相关的蛋白质；
[0007]A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质。
[0008]与所述蛋白质相关的生物材料，为下述B1)至B9)中的任一种：
[0009]B1)编码所述蛋白质的核酸分子；
[0010]B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
[0011]B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；
[0012]B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；
[0013]B5)含有B1)所述核酸分子的转基因细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因细胞系。
[0014]B1)所述核酸分子为如下b1)或b2)所示的所述蛋白质的编码基因：
[0015]b1)编码序列是序列表中序列1中的核苷酸的cDNA分子或DNA分子；
[0016]b2)核苷酸是序列表中序列1中的的cDNA分子或DNA分子。
[0017]一种产品，所述产品含提高所述蛋白质表达的物质。
[0018]所述产品的活性成分为提高所述蛋白质表达的物质。
[0019]所述提高所述蛋白质表达的物质为Tgf
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β1。
[0020]所述蛋白质、或所述生物材料的下述P1
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P9中的任一种应用：
[0021]P1、所述蛋白质、或所述生物材料或所述产品在制备改善耳听力的产品中的应用；
[0022]P2、所述蛋白质、或所述生物材料或所述产品在制备提高耳蜗的IHCs和OHCs规律性的产品中的应用；
[0023]P3、所述蛋白质、或所述生物材料或所述产品在制备促进耳蜗的纤毛生长的产品
中的应用；
[0024]P4、所述蛋白质、或所述生物材料或所述产品在制备改善Corti器官的发育异常产品中的应用。
[0025]一种用于检测耳听力的产品，所述产品为用于鉴定待测动物的耳蜗组织的基因组中是否含有序列1所述的DNA序列的物质，若含有，则表明具有待测动物为耳听力无障碍动物；若不含有，则表明待测动物为耳听力障碍动物。
[0026]所述用于鉴定待测动物的耳蜗组织的基因组中是否含有序列1所述的DNA序列的物质为引物对。
[0027]本专利技术的有益效果在于，本专利技术提供一种与耳听力相关的基因并提供一种能够改善耳听力的产品，所述产品的活性成分包括Tgf
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β1。在Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠耳蜗中应用TGF
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β1可以改善其毛细胞的功能。同时也说明这种TGF
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β1细胞因子对治疗听力疾病起到重要潜在治疗作用。
附图说明
[0028]图1为Tgfbr1基因在小鼠耳蜗中的表达。(A)采用qPCR方法比较3日龄和30日龄小鼠耳蜗中Tgfbr1基因的表达。数据以平均值
±
SEM表示(n＝3)。(B)原位杂交检测到3日龄和30日龄小鼠耳蜗中Tgfbr1基因表达，与对照组相比。(C,D)免疫荧光分析Tgfbr1在HEI
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OC1细胞和小鼠毛细胞中表达检测指标抗体包括Tgfbr1和DAPI。Bar:20μm和10μm。
[0029]图2为:Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠的生成及Corti器官分析。(A)生成control和Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠的育种策略示意图(B)Tgfbr1(ALk5)缺失等位基因是通过Atoh1
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Cre介导重组产生的。(C)对照组小鼠和Atoh1
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Tgfbr1
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的小鼠心脏、肝脏和耳蜗中Tgfbr1 mRNA的相对水平。数据以平均值
±
SEM表示(n＝3，**p<0.01；***p<0.001)。(D)Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠和对照组小鼠内源性蛋白Tgfbr1免疫印迹分析。(E)对P3或P30小鼠中耳蜗基底膜使用扫描电镜观察，Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠和对照组的耳蜗基底膜观察到IHCs和OHCs纤毛束。bar:10μm和2μm。对于P3和P30小鼠，IHCs和OHCs中静纤毛的平均数量依赖于三个代表的毛细胞的静纤毛数的平均值(平均值
±
SEM)。(F)来自Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠和对照组小鼠相应发育阶段的Corti，用相应抗体染色，包括:Tgfbr1、Myo3A、Myo3B、Myo7A、phalloidin
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532和DAPI进行免疫荧光观察，bar:10μm和2μm。(G)透射电镜分析Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠和对照组小鼠在指定发育阶段的IHCs和OHCs。bar:2μm。
[0030]图3为图3。Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠和野生型小鼠Corti器官分析。
[0031](A,B)免疫荧光分析Atoh1
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Tgfbr1
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小鼠和野生型小鼠的毛细胞结构，检测Tgfbr1,Myo7A,DAPI和phalloidin
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532等指标。Bar:2μm。
[0032]图4为图4:Tgfbr1是小鼠听力功能的关键基因。(A,B)Atoh1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改善耳听力的产品，其特征在于，所述改善耳听力的产品含提高下述蛋白质表达的物质，所述蛋白质为如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：A1)氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质；A2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且与植物耐盐性和抗旱性相关的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质。2.根据权利要求1所述的改善耳听力的产品，其特征在于，所述改善耳听力的产品的活性成分为提高权利要求1所述蛋白质表达的物质。3.根据权利要求2所述的改善耳听力的产品，其特征在于，所述提高权利要求1所述蛋白质表达的物质为转化生长因子β1。4.权利要求1中的所述的蛋白质。5.与权利要求5所述蛋白质相关的生物材料，为下述B1)至B9)中的任一种：B1)编码权利要求5所述蛋白质的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；B5)含有B1)所述核酸分子的转基因细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因细胞系。6.根据权利要求5所述的相关生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子为如下b1)或b2)所示的所述蛋白质的编码基因：b1)编码序列是序列表...

【专利技术属性】
技术研发人员：何珊，
申请(专利权)人：山东省第二人民医院山东省耳鼻喉医院，山东省耳鼻喉研究所，
类型：发明
国别省市：