一种非红细胞凝集的抗PD-L1/CD47双特异抗体及其在抗肿瘤治疗中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种非红细胞凝集的抗PD

【技术实现步骤摘要】
一种非红细胞凝集的抗PD-L1/CD47双特异抗体及其在抗肿瘤治疗中的应用


[0001]本专利技术属于医学领域，具体涉及一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段特异性识别程序性死亡分子1配体I型(programmed cell death 1 ligand 1，PD-L1)和人分化簇47(Cluster of Differentiation，CD47)，能够作为免疫活化物刺激机体的免疫反应，从而产生抗肿瘤等疾病的作用效果，同时该抗体不引起红细胞凝集。

技术介绍

[0002]2011年，癌症超过心脏病，成为全球第一大死亡原因。WHO在2013年12月公布，全球每年新增癌症患者数已经超过1400万名，这与2008年的统计结果1270万人相比，人数大幅增加。同期，癌症患者的死亡人数也有所增加，从过去的760万人增加到820万人。2013年免疫抗癌疗法被Science杂志评为年度10大科技突破之首，自此之后，肿瘤免疫疗法研究不断获得突破性进展，其临床应用也取得了巨大成功，是当前肿瘤治疗研究领域最具前景的治疗手段，有望成为继手术、放化疗方法后的新的常规治疗方法。
[0003]在20世纪80年代早期，Allison及其他研究者确定了在T细胞表面负责识别抗原的αβT细胞受体(TCR)的基因结构。80年代后期，Boone、Rosenberg、Old等人研究分别发现，不同肿瘤病人体内均存在一些肿瘤特异性抗原，能够被T细胞所识别并特异性杀伤肿瘤细胞，使得肿瘤免疫治疗的希望重新燃起，大量研究致力于肿瘤治疗性疫苗的研究和开发。然而，Schwartz等人研究发现，仅有TCR信号并不足以激活抗原特异性T细胞，T细胞的激活还需要其他分子的参与，也就是所谓第二信号“共刺激分子”的协同作用。同时研究发现，只有特定的抗原递呈细胞(APCs)才能够表达共刺激分子，而大多数细胞，包括肿瘤细胞，并不能够提供共刺激分子信号。在20世纪90年代早期，Allison等发现了CD28分子，能够提供T细胞激活所需要的第二信号。之后Linsley等人研究发现表达在APCs细胞表面的B7分子是CD28分子的配体，而Allison等通过小鼠模型研究，经过改造后能够表达B7分子的肿瘤细胞能够被小鼠免疫系统迅速清除。因此，肿瘤细胞B7分子表达的缺失可能是机体不能够有效激发T细胞免疫的重要因素。
[0004]在20世纪90年代的研究均表明，细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4，CTLA-4)在体内发挥着与CD28完全相反的功能，如果把CD28这一类分子比作是一部汽车的“油门”，那么CTLA-4这一类分子发挥的是“刹车”的功能。当机体T细胞活化之后，这类分子会“检查”免疫细胞激活程度，在激活的细胞中表达上调并发挥免疫抑制功能，从而使得机体的T细胞不至于过度增殖和活化而损伤正常细胞，因此这类分子又被称为“免疫检查点”分子。癌细胞利用这类分子的免疫抑制机制，逃避机体的免疫系统杀伤。研究表明，利用CTLA-4特异性单克隆抗体来阻断CTLA-4的信号，能够显著提高T细胞活性，并且在多种肿瘤的小鼠模型研究中发现，单克隆抗体阻断CTLA-4后能够大大提高小鼠对肿瘤的抑制能力。除了CTLA-4之外，免疫检查点分子还包括程序性死亡受体分子-1(Programmed cell death receptor 1，PD-1)及其配体PD-L1(PD-1 ligand 1)、
TIM-3、LAG-3、TIGIT等B7超家族和CD28超家族分子。通过特异性单克隆抗体阻断这些“抑制”信号，能够重新释放T细胞的活性，从而使得这些T细胞能够发挥抗肿瘤作用。肿瘤免疫检查点疗法对抗肿瘤策略的贡献在于：一方面，免疫检查点疗法并不直接靶向肿瘤细胞，而是作用于病人的免疫系统，通过解除限制T细胞发挥功能的信号从而释放T细胞活性；另一方面，这种对T细胞的激活并不具有抗原特异性，而是对整个免疫系统的重新激活，因此能够适用于多种不同肿瘤的治疗，可以作为肿瘤的通用疗法。不仅如此，CTLA-4抗体阻断疗法的成功，开创了免疫抑制相关分子阻断在肿瘤治疗中的开发和应用，基于PD-1和PD-L1等为代表的免疫抑制分子开发的阻断性抗体同样取得了重大突破。
[0005]PD-L1作为PD-1分子的配体，在T细胞发挥效应的过程中发挥了重要作用。研究表明，其在肿瘤细胞中的提高表达能够诱导肿瘤特异性T细胞上PD-1分子的表达上调，进而使得T细胞功能受到一定的抑制，造成肿瘤的免疫逃逸。因此，靶向PD-L1并阻断PD-1/PD-L1之间的相互作用，能够拮抗PD-1分子诱导的T细胞抑制性信号，进而恢复T细胞的肿瘤杀伤活性，达到治疗肿瘤的作用，是肿瘤免疫治疗的重要靶点。
[0006]另外，几乎所有肿瘤细胞都具有通过提高自身CD47蛋白表达，不但使其周围多种免疫细胞正常免疫杀伤功能受到抑制，而且表现出促进肿瘤组织扩增和转移的特性，这种特性能够导致患者病情进一步恶化。相关研究表明，阻断肿瘤细胞CD47相关的信号通路，能够解除肿瘤细胞对免疫细胞的抑制作用，从而激活肿瘤微环境中免疫细胞，尤其是巨噬细胞的杀伤功能，杀伤肿瘤细胞；活化的巨噬细胞通过吞噬靶细胞，发挥其抗原提呈的功能，特异性地活化T细胞，通过活化的T细胞发挥的细胞毒作用，进一步杀伤肿瘤细胞。
[0007]利用抗体结合细胞表面蛋白靶点治疗多种肿瘤和类风湿等免疫疾病已取得显著的效果；截至目前，经FDA批准上市的相关药物已超过60种。相关研究已经证明，利用抗CD47单克隆抗体，在体内特异性结合肿瘤细胞表面高表达的CD47蛋白，能够有效解除肿瘤细胞对免疫细胞的抑制作用，重新恢复机体免疫细胞功能，达到抑制肿瘤生长的效果。

技术实现思路

[0008]本专利技术的一个方面在于提供一种能够与PD-L1和CD47分子特异结合的抗PD-L1/CD47双特异抗体或其抗原结合片段，其包含：
[0009]与PD-L1分子结合的SEQ ID NO：3所示的重链CDR1序列、SEQ ID NO：4所示的重链CDR2序列、SEQ ID NO：5所示的重链CDR3序列；
[0010]与CD47分子结合的SEQ ID NO：6所示的重链CDR1序列、SEQ ID NO：7所示的重链CDR2序列、SEQ ID NO：8所示的重链CDR3序列；
[0011]与PD-L1分子结合的SEQ ID NO：9所示的轻链CDR1序列、SEQ ID NO：10所示的轻链CDR2序列、SEQ ID NO：11所示的轻链CDR3序列；
[0012]与CD47分子结合的SEQ ID NO：12所示的轻链CDR1序列、SEQ ID NO：13所示的轻链CDR2序列、SEQ ID NO：14所示的轻链CDR3序列；
[0013]以及SEQ ID NO：17所示的重链可变区连接序列和SEQ ID NO：18所示的轻链可变区连接序列，其中所述重链可变区连接序列用于连接抗PD-L1/CD47双特异抗体的与PD-L1分子结合的重链本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与PD-L1和CD47分子特异结合的抗PD-L1/CD47双特异抗体或其抗原结合片段，其包含：与PD-L1分子结合的SEQ ID NO：3所示的重链CDR1序列、SEQ ID NO：4所示的重链CDR2序列、SEQ ID NO：5所示的重链CDR3序列；与CD47分子结合的SEQ ID NO：6所示的重链CDR1序列、SEQ ID NO：7所示的重链CDR2序列、SEQ ID NO：8所示的重链CDR3序列；与PD-L1分子结合的SEQ ID NO：9所示的轻链CDR1序列、SEQ ID NO：10所示的轻链CDR2序列、SEQ ID NO：11所示的轻链CDR3序列；与CD47分子结合的SEQ ID NO：12所示的轻链CDR1序列、SEQ ID NO：13所示的轻链CDR2序列、SEQ ID NO：14所示的轻链CDR3序列；以及SEQ ID NO：17所示的重链可变区连接序列和SEQ ID NO：18所示的轻链可变区连接序列，其中所述重链可变区连接序列用于连接抗PD-L1/CD47双特异抗体的与PD-L1分子结合的重链可变区和与CD47分子结合的重链可变区，所述轻链可变区连接序列用于连接抗PD-L1/CD47双特异抗体的与PD-L1分子结合的轻链可变区和与CD47分子结合的轻链可变区。2.如前述任一项权利要求所述的抗PD-L1/CD47双特异抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab
′
、Fab
′-
SH、Fv、scFv、F(ab
′
)2、双抗体和包含CDR的肽，所述抗PD-L1/CD47双特异抗体或其抗原结合片段能够阻断PD-L1与PD-1、CD47与SIRPα的结合。3.如前述任一项权利要求所述的抗PD-L1/CD47双特异抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO：15所示的重链可变区序列和SEQ ID NO：16所示的轻链可变区序列。4.如前述权利要求中任一项所述的抗PD-L1/CD47双特异抗体或其抗原结合片段，其包含人Fc区，更优选包含人IgG4的Fc区。5.如前述权利要求中任一项所述的抗PD-L1/CD47双特异抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：严景华，史瑞，谭曙光，高福，马素芳，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：