一种Cap2结构5制造技术

本发明专利技术提供了一种Cap2结构5'帽子类似物及其制备方法，属于基因工程技术领域，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式为m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)p(2'OMeU)。本发明专利技术提供的Cap2结构5'帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。率。率。

【技术实现步骤摘要】
一种Cap2结构5
′
帽子类似物及其制备方法和应用
[0001]本申请是申请日为2020年08月20日、申请号为202010842263.2、专利技术名称为《一种Cap2结构5
′
帽子类似物及其制备方法》的分案申请，申请人为深圳市瑞吉生物科技有限公司。


[0002]本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种Cap2结构5
′
帽子类似物及其制备方法。

技术介绍

[0003]翻译效率和免疫原性是mRNA药物行使功能的两大关键因素。自体免疫蛋白如RIG
‑
I和IFIT识别异常加帽的mRNA，降低了外源mRNA在细胞内的活性和半衰期，使得mRNA药物在体内难以发挥作用。因此，优化mRNA帽结构对于提高mRNA的生物活性和降低免疫原性是至关重要的。
[0004]目前在体外合成带帽的mRNA有两种方法，第一种是mRNA转录后使用牛痘病毒加帽酶对其进行加帽，产生带Cap 0或Cap 1的RNA，这种加帽方法很高效，但是产量不稳定，价格也很昂贵。此外酶促加帽法不能产生Cap 2和m6Am的帽子。第二种方法是转录过程中加入过量的帽结构类似物来进行加帽。截至目前，最常用的帽结构类似物是ARCA，使用ARCA可产生具有免疫原性的Cap 0，但是加帽效率只有70％。该方法的产量也比较低，每毫升转录反应体系最多制备1.5mg RNA，转录产物具有很高的免疫原性。另一种叫做Cleancap的共转录加帽的方法也被广泛采用。Cleancap属于Cap 1，与ARCA使用二聚体(m7GpppG)启动T7转录不同，CleanCap使用三聚体(m7GpppAmG)启动T7转录。该方法的产量比较高，每毫升转录反应体系制备4mg加帽的RNA，加帽效率可达90％，其转录产物的免疫原性低于ARCA。
[0005]基于现有mRNA合成体系中的帽结构类似物的加帽率低，单位合成体积内mRNA产量低以及免疫原性高等缺点，从而研发了Cap2帽结构类似物，既弥补了以上应用上的缺点，又大大提升了蛋白翻译效率。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种Cap2结构5
′
帽子类似物及其制备方法，本专利技术提供的Cap2结构5
′
帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种Cap2结构5
′
帽子类似物，所述Cap2结构5
′
帽子类似物的分子式选自以下任一种；
[0009]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeA)p(2
′
OMeG)；
[0010]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeG)p(2
′
OMeG)；
[0011]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeC)p(2
′
OMeG)；
[0012]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeU)p(2
′
OMeG)；
[0013]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeA)p(2
′
OMeA)；
[0014]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeG)p(2
′
OMeA)；
[0015]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeC)p(2
′
OMeA)；
[0016]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeU)p(2
′
OMeA)；
[0017]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeA)p(2
′
OMeC)；
[0018]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeG)p(2
′
OMeC)；
[0019]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeC)p(2
′
OMeC)；
[0020]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeU)p(2
′
OMeC)；
[0021]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeA)p(2
′
OMeU)；
[0022]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeG)p(2
′
OMeU)；
[0023]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeC)p(2
′
OMeU)；
[0024]m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeU)p(2
′
OMeU)；
[0025]3′‑
O
‑
Me
‑
m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeA)p(2
′
OMeG)；
[0026]3′‑
O
‑
Me
‑
m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeG)p(2
′
OMeG)；
[0027]3′‑
O
‑
Me
‑
m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeC)p(2
′
OMeG)；
[0028]3′‑
O
‑
Me
‑
m7G(5
′
)ppp(5
′
)(2
′
OMeU)p(2
′
OMeG)；
[0029]3′‑
O
‑
Me
‑
m7G(5
′本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Cap2结构5'帽子类似物，其特征在于，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式为m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)p(2'OMeU)。2.权利要求1所述的Cap2结构5'帽子类似物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将2'
‑
O
‑
Methyl
‑
GTP溶解在无RNA酶的水中，再分别与磷酸水解酶、2
×
Reaction Buffer混合后进行孵育，得到2'
‑
O
‑
Methyl
‑
GDP；2)将所述步骤1)得到的2'
‑
O
‑
Methyl
‑
GDP溶解在无RNA酶水中，再与7
‑
Methylguanosine、鸟苷转移酶、2
×
Reaction Buffer混合后进行孵育，得到m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)；3)将所述步骤2)得到的m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)溶解在无RNA酶水中，与T4 RNA Ligase1混合后，再与2'
‑
O
‑
Methyl
‑
UTP混合，再与2
×
T4 RNA Ligase Reaction Buffer混合后进行孵育，得到Cap2结构5'帽子类似物。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)2'
‑
O
‑
Methyl
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡勇，张苗苗，洪丹，胡迅，
申请(专利权)人：深圳市瑞吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：