重组病毒和其用途制造技术

本发明专利技术涉及重组病毒和其用途。更具体地，本发明专利技术涉及对感兴趣的多肽进行编码的新型重组马立克氏病病毒以及其用于向动物，特别是家禽表达或递送此类多肽的用途。本发明专利技术特别适于针对禽类病原体对家禽进行疫苗接种。针对禽类病原体对家禽进行疫苗接种。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组病毒和其用途


[0001]本专利技术涉及重组病毒和其用途。更具体地，本专利技术涉及对感兴趣的分子进行编码的新型重组马立克氏病病毒(Marek's Disease Virus)以及其用于向动物，特别是家禽表达或递送此类分子的用途。本专利技术特别适于针对禽类病原体对家禽进行疫苗接种。

技术介绍

[0002]家禽肉和蛋是重要的食物来源，由于人口的增长及其高质价比，因此其消耗不断增加。近期的禽流感疫情使公众舆论集中在家禽健康以及食品安全和保障上。家禽疫苗技术成为全球关注的问题。
[0003]表达病原体蛋白的重组病毒通常用作针对靶向病原体的家禽疫苗。包含此类病毒的疫苗诱导外源病原体蛋白或其片段在受感染细胞内的表达，这可以随后诱导特异性和保护性体液免疫以及细胞介导的免疫。
[0004]已知不同的病毒可以在潜伏感染或持续感染的状态下在受感染动物体内存活。因此，已经开发了此类病毒(其中已经整合了源自病原体的外源基因)用作病毒载体疫苗，以增加对免疫动物的免疫持续时间。
[0005]这些病毒载体(或重组病毒)通常基于痘病毒，如禽痘(EP
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A
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0,517,292)；疱疹病毒，如马立克氏病病毒血清型1、2和3(火鸡疱疹病毒(HVT))(例如，WO
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A
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87/04463、US5,980,906、US 5,853,733)或者，可替代地，新城疫病毒(NDV)和禽腺病毒。
[0006]这些重组禽类病毒显示出可变水平的保护。表达传染性法氏囊病(IBD)病毒的VP2蛋白的重组HVT已经显示出优于经典IBD疫苗(IBD)的优势。感兴趣的其它HVT载体表达新城疫(ND)病毒(ND)或传染性喉气管炎(ILT)病毒(LT)的抗原。
[0007]基于HVT的重组病毒的实际问题之一可以是当其组合使用以赋予针对不同病原体的免疫原性时所述重组病毒的干扰。的确，当将表达不同抗原的两种不同rHVT混合时，可以诱导至少针对所述疾病之一的较低保护(参见例如，Slacum G等人,2009,《HVT重组体与其它马立克氏病疫苗的相容性(The compatibility of HVT recombinants with other Marek's disease vaccines)》,第58届西方家禽疾病会议(58th Western Poultry Disease Conference),萨克拉门托,加利福尼亚州,美国,3月23日
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25日,第84页)。
[0008]因此，需要新的方法来改善动物，特别是家禽中的疫苗接种，从而允许同时保护免受若干疾病。
[0009]已经开发了可以表达两种不同抗原性肽的多价HVT载体(参见WO2013/144355)。
[0010]使用主要位于UL的克隆区，例如在W02016/120421中还报道了基于MDV1的重组载体。还已经提到了US中的克隆位点，例如US2或US10。
[0011]本专利技术公开了新型重组病毒，其适用于在动物中诱导强免疫保护并且另外可以与如重组HVT疫苗等其它病毒疫苗组合使用，以获得延长的免疫。

技术实现思路

[0012]本专利技术公开了新型重组病毒，其适用于在动物中诱导强免疫保护并且另外可以与如重组HVT疫苗等其它病毒疫苗组合使用，以引发延长的免疫。本专利技术更具体地涉及新型属于血清型1的重组马立克氏病病毒(“rMDV1”)，其含有位于MDV086.6基因座中的一个或多个外源基因。本专利技术的确示出了MDV1基因组内的所述基因座允许外源基因的有效克隆和稳定表达。
[0013]因此，本专利技术的一个目的在于在其基因组中包括重组核酸的属于血清型1的重组马立克氏病病毒(rMDV1)，其中所述重组核酸位于基因组的MDV086.6(SORF1)基因座中。
[0014]如本专利技术将进一步公开的，重组核酸可以通过插入MDV086.6(SORF1)编码序列内或通过插入MDV086.6(SORF1)侧翼的基因间区来克隆以置换MDV086.6(SORF1)基因座的全部或一部分。
[0015]本专利技术的另外的目的涉及一种包括如上定义的rMDV1的基因组的核酸分子。
[0016]本专利技术还涉及一种包括如上定义的核酸分子的载体(例如，质粒、粘粒、病毒、染色体等)。
[0017]本专利技术还涉及一种包括如上定义的rMDV1、载体或核酸的宿主细胞或此类细胞的培养物。
[0018]本专利技术的另外的目的是一种用于产生或复制如上定义的rMDV1的方法，所述方法包括用如上定义的核酸分子或如上定义的rMDV1感染感受态细胞以及收集所述rMDV1。
[0019]本专利技术的另外的目的是一种用于产生rMDV1的方法，所述方法包括(i)将在启动子控制下的重组核酸引入属于血清型1的马立克氏病病毒的MDV086.6基因座中；(ii)复制所述病毒；以及(iii)收集所述病毒。
[0020]本专利技术的另一个目的是一种组合物，如疫苗，所述组合物包括如上定义的rMDV1以及药学上或兽医学上可接受的赋形剂和/或佐剂。
[0021]这种组合物可以用于例如对禽类(如家禽)进行疫苗接种或使其免疫。
[0022]因此，本专利技术的另一个目的在于用于针对病原体对禽类，优选地鸡进行疫苗接种的如上定义的rMDV1或如上定义的组合物。
[0023]本专利技术的另一个目的在于用于在禽类，优选地鸡中诱导或刺激免疫应答的如上定义的rMDV1或组合物。
[0024]本专利技术的另外的目的是如上定义的rMDV1，其用于与属于不同血清型并且表达不同抗原的另外的重组疱疹病毒组合地使用，以用于通过同时、分开、顺序或交替施用针对至少两种不同病原体对禽类，优选地鸡进行疫苗接种。
[0025]另一方面，本专利技术提供了一种对动物进行疫苗接种或使动物免疫的方法，所述方法包括至少一次施用如上定义的rMDV1或组合物。
[0026]在另外的方面，本专利技术提供一种用于在动物中诱导针对一种或多种禽类病原体的免疫原性或保护性应答的方法，所述方法包括至少一次施用如上定义的rMDV1或组合物。
[0027]本专利技术进一步涉及一种使禽类免疫的方法，所述方法包括向所述禽类施用有效免疫量的本专利技术的rMDV1或组合物。
[0028]本专利技术进一步提供了一种用于使禽类免疫的疫苗接种试剂盒，所述疫苗接种试剂盒包括有效量的本专利技术的组合物以及用于向所述禽类施用所述组合物的构件。
[0029]本专利技术可以用于表达任何多肽，优选地用于表达禽类病原体的抗原。适用于对如家禽等禽类进行疫苗接种。
附图说明
[0030]图1展示了可以分别用于构建(a)RR071或(b)RR072或(c)RR075的三种类型的基础同源性质粒。
[0031]图2示出了(a)重组MDV1/IBD基因组(RR071、RR072、RR075)和(b)重组MDV1/ILT基因组(RR080、RR083、RR092、RR093、RR094)的图解。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种属于血清型1的重组马立克氏病病毒(recombinant Marek's Disease Virus of serotype 1，rMDV1)，其在其基因组中包括重组核苷酸序列，其中所述重组核苷酸序列位于所述基因组的MDV086.6(SORF1)基因座中。2.根据权利要求1所述的rMDV1，其中所述重组核苷酸序列置换MDV086.6基因座的全部或一部分。3.根据权利要求1所述的rMDV1，其中所述重组核苷酸序列位于MDV086.6编码区内，基本上没有SORF1基因座序列的缺失。4.根据权利要求1所述的rMDV1，其中所述重组核苷酸序列位于MDV086.4与MDV086.6之间的基因间区中或者位于MDV086.6与MDV087(SORF2)之间的基因间区中。5.根据前述权利要求中任一项所述的rMDV1，其中所述MDV1是MDV1的CVI988Rispens病毒株。6.根据前述权利要求中任一项所述的rMDV1，其中所述重组核苷酸序列对抗原，优选地禽类病原体的抗原进行编码。7.根据权利要求6所述的rMDV1，其中所述禽类病原体选自新城疫病毒(NDV)、干保罗病病毒(Gumboro disease virus)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、支原体(MG)或球虫。8.根据权利要求7所述的rMDV1，其中所述重组核苷酸序列对IBDV的VP2蛋白、ILTV的gB蛋白或其免疫原性片段进行编码。9.根据前述权利要求中任一项所述的rMDV1，其中所述重组核苷酸序列含有转录启动子。10.根据权利要求9所述的rMDV1，其中所述启动子选自鸡β
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肌动蛋白(Bac)启动子或其衍生物，如Coa5；Pec启动子；鼠类巨细胞病毒(Mcmv)即刻早期(ie)1启动子；人巨细胞病毒启动子(Hcmv)；猿猴病毒(SV)40启动子；以及劳斯氏肉瘤病毒(Rous Sarcoma virus，RSV)启动子或其保留了启动子活性的任何片段。11.根据权利要求1所述的r...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：法国诗华大药厂，
类型：发明
国别省市：