一种以树鼩为实验动物构建的视疲劳动物模型制造技术

本发明专利技术属于医疗评价、检测技术领域，具体涉及一种通过迫使树鼩眼过用调节（正调节），使支配眼调节的副交感神经异常兴奋、交感神经的兴奋性发生相应改变、睫状肌和瞳孔括约肌持续性收缩，导致支配眼调节的交感与副交感双重神经的动态平衡失调，从而以实验手段构建的视疲劳树鼩动物模型。该模型用于研究视疲劳的发病机理、进行预防和治疗视疲劳的研究，尤其是用于筛选预防和治疗视疲劳的新药、用于筛选预防和治疗视疲劳的措施、用于客观评价预防和治疗视疲劳的方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医疗评价、检测
，具体涉及一种用于研究视疲劳发病机理、进行预防和治疗视疲劳研究的以树鼩(Tupaia Belangeris，TreeShrew)为实验动物构建的动物模型。由于视疲劳的发病机制有许多不明之处，也无有效的、理想的治疗方法，特别是目前没有视疲劳的动物模型，使医药学界难以对视疲劳进行深入系统的实验研究。因此，建立视疲劳的动物模型，是进一步深入研究视疲劳的发病机理、进行预防和治疗视疲劳的研究，尤其是筛选预防和治疗视疲劳的新药、筛选预防和治疗视疲劳的措施、客观评价预防和治疗视疲劳方法的前提和基础。眼的正常调节是交感与副交感双重神经支配的动态平衡结果；当支配眼调节的交感与副交感双重神经的动态平衡失调时(主要表现为支配睫状肌和瞳孔括约肌的副交感神经异常兴奋)，则会出现眼胀、头痛、头晕、眼眶胀痛等症状，即视疲劳的临床表现，导致眼痛、头痛等视疲劳的主要临床表现是由于过用调节(正调节)，使睫状肌和瞳孔括约肌持续性收缩所致。由此可见，视疲劳的发生与支配眼调节的交感与副交感双重神经的动态平衡失调密切相关；过用调节，使睫状肌和瞳孔括约肌持续性收缩是视疲劳发生的重要原因。同时，研究还证实，过度的调节与青少年获得性近视的发生发展有密切的关系，故建立视疲劳的动物模型亦可为进行预防和治疗青少年获得性近视的研究提供重要的依据。睫状肌和瞳孔括约肌是完成眼调节的生理基础，因此，构建视疲劳动物模型的实验动物应具有与人相似的睫状肌和瞳孔括约肌，视觉系统发育完善。本专利技术专利通过比较解剖学和组织病理学研究发现树鼩属哺乳纲、灵长目、原猴亚目、树鼩下目、树鼩科，其解剖特点与猿猴接近，颅脑发达，视觉系统发育完善；其睫状肌的三种肌纤维均有分布、并且分布情况与人眼接近，睫状肌的肌动蛋白表达阳性；其瞳孔括约肌发育完善，肌动蛋白阳性表达分布均匀，是建立视疲劳动物模型的理想实验动物。但是迄今还没有以树鼩为实验动物来建立视疲劳动物模型，更无树鼩视疲劳动物模型的文献报道。本专利技术专利根据树鼩的解剖与生理特点，用迫使树鼩眼过用调节(正调节)的方法成功地建立了视疲劳树鼩动物模型。众所周知，眼的调节是在交感与副交感神经兴奋后，其神经末梢释放神经递质，作用于细胞膜上的相应受体，再通过第二信使发生一系列生理生化反应而最终完成的。支配眼调节的副交感神经为胆碱能神经，释放的神经递质为乙酰胆碱，相应受体为胆碱能受体。眼处于正调节时必然伴随睫状肌和瞳孔括约肌的收缩，睫状肌和瞳孔括约肌是完成眼调节的生理基础，瞳孔括约肌上的受体为M-ACh受体，且大部分是M3-ACh受体亚型。而交感神经在眼的调节过程中也起着重要的作用，因为睫状肌的交感神经兴奋，睫状肌松弛引发副调节，这对维持眼调节时交感与副交感双重神经支配的动态平衡十分重要。已知在睫状肌中β受体密度较高，且大部分为β2型肾上腺素能受体(β2-AR)，其第二信使为cAMP、cGMP。因此，睫状肌的β-AR(大部分为β2-AR)、瞳孔括约肌的M-ACh受体(大部分为M3-ACh受体)，及其第二信使系统和神经递质是反映交感与副交感神经兴奋状态及其神经信号传导机制的一组重要的客观指标。但是至今还没有用睫状肌的β-AR(大部分为β2-AR)、瞳孔括约肌的M-ACh受体(大部分为M3-ACh受体)，及其第二信使系统作为客观指标来评价视疲劳动物模型、筛选防治视疲劳的新药、评价防治视疲劳方法的文献报道。本专利技术提出一种以树鼩为实验动物的视疲劳动物模型，是通过迫使树鼩眼过用调节(正调节)，使支配眼调节的副交感神经异常兴奋、睫状肌和瞳孔括约肌持续性收缩，交感神经的兴奋性发生相应改变，导致支配眼调节的交感与副交感双重神经的动态平衡失调，从而建立视疲劳树鼩的动物模型。下面对专利技术作进一步详述，要求保护的范围并不限于实施方式本身。具体方法如下1.迫使树鼩眼过用调节(正调节)选取适当的树鼩，迫使树鼩眼连续长时间处于过用调节(正调节)的状态。2.检测支配眼调节的交感与副交感双重神经的兴奋状态根据预试实验，在造模实验的早期、中期及后期(结束)时，分别处死树鼩，立即摘除双侧眼球，一部分眼球分别以10％甲醛、3％戊二醛固定，以备组织病理学研究；另一部分以生理盐水冲洗，显微手术镜下分离睫状体和虹膜，生理盐水冲洗后，滤纸吸干。将每只树鼩的睫状体和虹膜分别以锡箔密封、编号，电子天平称重后立即投入液氮中保存，以备检测睫状体中β-AR(大部分是β2-AR亚型)及虹膜中M-Ach受体(大部分是M3-ACh受体亚型)的最大结合容量(Rt)及平衡解离常数(KD)、cAMP和cGMP含量。根据上述构建视疲劳树鼩动物模型的实验，比较分析其检测结果发现①在实验的早期，树鼩睫状体中β-AR和虹膜中M-Ach受体的最大结合容量(Rt)及平衡解离常数(KD)与正常对照组比较差异均无统计学意义，表明支配树鼩眼调节的副交感神经与交感神经的受体均未发生明显变化，树鼩眼处于交感与副交感双重神经支配的生理平衡状态，如附附图说明图1-4。②在实验的中期，树鼩睫状体中β-AR的最大结合容量(Rt)和cAMP含量较正常对照组明显升高，cGMP含量较正常对照组明显下降，差异均有统计学意义；虹膜中M-Ach受体的平衡解离常数(KD)较正常对照组明显降低，即亲和力明显增强，cGMP含量较正常对照组明显升高，差异均有统计学意义，表明支配树鼩眼调节的副交感神经异常持续兴奋，交感神经的β-AR也发生上调，树鼩眼处于交感与副交感双重神经支配的高水平的动态平衡状态，如附图1、附图3、附图7-10。③在实验的后期，树鼩睫状体中β-AR的最大结合容量(Rt)及平衡解离常数(KD)、cAMP含量与正常对照组比较差异均无统计学意义，而cGMP含量较正常对照组明显升高，差异均有统计学意义；虹膜中M-Ach受体的最大结合容量(Rt)及cGMP含量较正常对照组明显升高，差异均有统计学意义，表明支配树鼩眼调节的副交感神经仍然异常持续兴奋，而交感神经的兴奋性下降，睫状肌与瞳孔括约肌持续性收缩，模型眼处于交感与副交感双重神经支配的动态平衡失调状态，即此时树鼩眼处于视疲劳，如附图1-10。④组织病理学研究也证实，在实验的后期模型组树鼩眼的睫状肌和瞳孔括约肌均处于收缩状态；同时，树鼩也表现出烦躁不安、回避用眼等相应的行为变化。由此说明本专利技术专利以实验的手段建立了视疲劳树鼩动物模型。具体实施例方式实施例1通过诱视物迫使树鼩眼过用调节(正调节)法选取成年树鼩，将双眼及全身状况正常的树鼩随机分为模型组和正常对照组。正常对照组树鼩置于安放有睡盒的笼中，睡盒开放，动物可自由出入。每日2次给食饮水。白昼正常光照；夜间无光照。模型组树鼩置于安放有睡盒的笼中，睡盒于每日白昼(7时～19时)关闭，树鼩只能在睡盒外活动，用活动诱视物对树鼩进行近距离持续诱视；树鼩笼具中的睡盒于夜间(19时～次日7时)开放，此段时间树鼩可进入睡盒内休息。每日投食给水2次。白昼正常光照；夜间无光照。在实验结束时，处死树鼩，立即摘除双侧眼球，一部分眼球分别以10％甲醛、3％戊二醛固定，以备组织病理学研究；另一部分以生理盐水冲洗，显微手术镜下分离睫状体和虹膜，生理盐水冲洗后，滤纸吸干。将每只树鼩的睫状体和虹膜分别以锡箔密封、编号，电子天平称重后立即投入液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以树＊为实验动物构建的视疲劳动物模型，其特征是：迫使树＊眼连续长时间处于过用调节（正调节），致使支配眼调节的副交感神经异常持续兴奋，交感神经的兴奋性发生相应改变，模型眼处于交感与副交感双重神经支配的动态平衡失调状态。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张堰黎，
申请(专利权)人：张堰黎，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]