建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法技术

本发明专利技术属于医学和动物行为学领域，公开了一种建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法，包括选择正常新西兰家兔，在常规饲料中，加入有效量的胆固醇和猪油；投药喂食一段时间后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术，损伤髂内动脉内皮；术后通过交配试验、双核素或海绵体注射血管活性药物进行检测、鉴定。本发明专利技术建立的血管性勃起功能障碍的动物模型，为探讨勃起功能障碍的病理机制、研究治疗方法及临床新药开发及药物验证提供了必要依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学和动物行为学领域，涉及一种动物模型的建立方法，进一步地，本专利技术涉及一种。
技术介绍
勃起功能障碍(ED)一直是泌尿男科关注的热点。很长一段时间内，人们曾认为ED的原因主要是心理性的。随着研究手段的进步和各种临床资料的汇总，人们发现绝大部分ED存在各种器质性原因。由于引起ED的病因复杂，目前为止，人们对ED的发病机理还是不甚明了，因此寻找合适的ED动物模型对ED的发生、发展、临床的防治及新药研制都很必要。高脂血症是中、老年人常见的疾病之一。目前的研究发现，随着生活水平的提高，饮食结构的变化，高脂(胆固醇)血症已不仅仅是严重影响中、老年人心血管系统及身心健康的危险因子，而且发病人数有逐渐增加并低龄化趋势。高脂血症引起ED发生、发展的机理一直是人们关注的热点以前认为高脂血症引起ED的原因主要是因为阴茎局部动脉粥样硬化斑块，导致阴茎供血不足而致。随着研究的深入，人们发现阴茎海绵体在阴茎的勃起及维持勃起中起了关键性的作用，阴茎的勃起及勃起的维持不仅仅需要动脉充裕的供血，还需要海绵体及静脉系统完整的阻断机制发挥作用。众所周知，随着年龄增长，发生ED的可能性也逐渐增加，但ED也并不是老龄化过程中不可避免的事件。本专利技术人曾经调查了382例ED患者，发现动脉硬化本身的危险因子如高血脂也是ED的危险因子。Eardley等认为，勃起功能障碍的改变很可能是全身动脉粥样硬化最初的临床表现，故开始治疗ED前应注意评价患者的心血管状态。基于对阴茎勃起生理的认识，我们知道，阴茎要获得并维持足够硬度的勃起，充足的动脉血供和完善的静脉阻断机制是必不可少的。那么任何可能破坏这两种机制的危险因子就可能最终导致ED的发生。临床上高血脂的常见性和其本身既可以引起ED也是心血管疾病的基础等事实，使本专利技术人想到通过高血脂研究建立ED模型的原因。正是基于上述事实和思路，本专利技术人考虑设计制造高脂血症引起ED的动物模型来研究其发生的机理，试图为临床防治高脂血症性ED和研究血管性ED的发病机理及ED的临床药理试验提供理论依据。对于ED模型的建立，人们也进行过不少的探索。人们曾试图对狗用简单机械性损伤的方法来制成高血脂性ED动物模型，但结果却不太满意，这是因为采用部分结扎或使用缩窄环之类的机械性阻断血供的方法，事实上并不能使动物出现阴茎局部血管或勃起组织的异常。随后研究又发现，如果只采用手术结扎狗的左、右侧髂内动脉或同时结扎其两侧阴部动脉，只能使动物的阴茎海绵体血流量在结扎即刻减少50％；还有人发现，如果阻断狗的双侧阴茎动脉血供，再用电刺激诱导勃起时可使动物模型阴茎海绵体内压一过性降低60％；如果采用慢性机械性损伤的方法逐渐阻断阴茎动脉的血供，尽管最后可以完全阻断阴茎的血供，但由于形成了很多侧枝循环，事实上对动物的阴茎勃起并没有很大的影响。以前的研究还发现，如单纯喂胆固醇饲料，动物并未发生动脉粥样硬化。此外，对有些鼠类只能出现明显的高胆固醇血症，也不发生动脉硬化。以家兔为实验动物，如果同时喂以高胆固醇、高脂肪的饲料，则能发生动脉粥样硬化，但问题是这种病变主要是在家兔的主动脉形成粥样硬化斑块，而主要供应阴茎血液的血管--髂动脉难以形成粥样硬化。因此迄今为止还没有一个令人满意的血管性ED动物模型。基于以上现有技术，本专利技术通过对新西兰家兔喂以高脂、高胆固醇饮食，并用经皮冠状动脉成形(percutaneous transluminal coronaryangioplasty，PTCA)球囊导管过度扩张损伤其双侧髂内动脉内皮，让病变固定于髂内动脉，继而对阴茎及其血管系统产生影响，以建立血管性勃起功能障碍的动物模型，为探讨ED的病理机制、研究治疗方法奠定基础、提供依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，它包括a)选择正常家兔，在饲料中，加入高脂、高胆固醇食品；b)投药喂食5-10天后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术，损伤髂内动脉内皮。进一步的，本专利技术所述的正常兔为新西兰大白兔。进一步的，也可选择高脂血症兔为模型兔。本专利技术所述的高脂、高胆固醇食品为按照家兔每天进食量计算的有效量的胆固醇和猪油。进一步的，有效量的胆固醇和猪油是按照每天进食量的1％-1.5％比例加胆固醇，按4％-6％比例加入猪油，每天早、晚喂食，自由饮水。本专利技术在首次投药喂食足够时间后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术。优选的，在首次投药喂食5-7天后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术。再进一步的，在术后第25-30天、第50-60天观察并检测各项指标，优选的，在术后第50-60天观察并检测各项指标，更优选的，在术后第56天观察并检测各项指标。本专利技术的目的还在于提供一种筛选血管性勃起功能障碍的动物模型的方法，采用血管活性药物如盐酸罂粟碱诱导阴茎勃起，然后用双核素技术进一步进行检测。作为本专利技术的实施方式，采用99m锝-113m铟双核素技术，观察动脉显像指数(PIA)及静脉显像指数(PIV)。本专利技术对新西兰家兔喂高脂、高胆固醇饲料的同时，我们还采用球囊导管选择性地损伤髂内动脉内皮的方法制作模型。选择家兔作为实验对象，一方面还是基于家兔的阴茎海绵体生理特性和人类的最为相似，另外，由于家兔属于素食性动物，它对高脂、高胆固醇饲料比较敏感，加上PTCA球囊导管损伤血管内皮，因此只需要25天以后就可以形成高脂血症并可以逐渐造成定位于髂内动脉的动脉粥样硬化样病变，而狗、猴子或猪至少需要一至五年的时间，这对实验进度的时限性有所不利。从本实验的结果看，在喂食高脂、高胆固醇并PTCA球囊导管髂内动脉去内皮处理后25-30天，有71％(5/7)动物诱发为ED，第50-60天时86％(6/7)出现ED，事实证明模型制作达到了目标要求。血中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)升高是高脂血症的主要特征和生化物质基础。本专利技术的实验结果显示，与同期对照组相比，高脂、高胆固醇饮食的家兔血中TG、TC及LDL随着进食时间的延长明显升高(p＜0.01)，但第4周以后，这三项指标有趋向饱和的趋势。在动脉粥样硬化发生发展的机制中，LDL的过氧化已被肯定。LDL的氧化产物与造影所显示的冠状动脉粥样硬化的严重程度明显相关。研究表明，LDL氧化修饰后加速血管粥样硬化的机制是1.化学趋化作用，加速单核细胞向粥样硬化部位趋化。2.抑制单核巨噬细胞从血管壁返回血液中。3.增强巨噬细胞对脂质的吞噬。4.损伤血管内皮，加速血管内皮剥落。血浆高密度脂蛋白(HDL)是将外周组织(包括粥样硬化病变中的)的胆固醇逆转运至肝脏清除代谢的主要接受体，升高HDL水平有助于促进粥样硬化病变消退。从本实验也可以看到这样的趋势第4周时，实验组的HDL几乎是同期对照组的10倍，两者相比统计学上差异非常显著(p＜0.01)，这是由于机体出现代偿性变化的结果。随着时间的延长，第8周的动物模型血浆中HDL反而出现了下降，虽然和同期对照组相比HDL仍然有差异(p＜0.05)，但却只有对照组的2倍左右，而与第4周时模型组的HDL相比，差异也无显著性，这都说明模型的粥样硬化病变在加重。ED动物模型的诊断目前尚无统一的标准。这主要是由于缺少理想的评价阴茎勃起功能的指标，使ED动物模型难以建立，从而限制了其发展。专利技术人在实验中发现，临床常用的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种建立血管性勃起功能障碍动物模型的方法，其特征在于，它包括：ａ）选择正常兔，在饲料中，加入高脂、高胆固醇食品；或高脂血症兔；ｂ）正常兔投药喂食５－１０天后，施行双侧球囊导管髂内动脉扩张成形术，损伤髂内动脉内皮。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈斌，
申请(专利权)人：上海第二医科大学附属仁济医院，陈斌，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]