一种古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒薄层鉴别及总黄酮含量测定的方法技术

本发明专利技术公开了一种古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒薄层鉴别及总黄酮含量测定的方法，该方法采用薄层色谱(TLC)法对蠲痹颗粒中的羌活、独活、秦艽进行鉴别；以芦丁为对照品，以5％亚硝酸钠‑10％硝酸铝‑氢氧化钠试液为显色体系，在510nm波长下以分光光度法测定总黄酮。结果薄层法色谱鉴别专属性强，斑点清晰，阴性无干扰；芦丁浓度在0.01038～0.06228mg/ml范围内与吸光度线性关系良好,回归方程为y＝12.264x‑0.0061(r

【技术实现步骤摘要】
一种古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒薄层鉴别及总黄酮含量测定的方法
本专利技术涉及一种中药新药古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒薄层鉴别及总黄酮成分含量测定，具体的说是一种鉴别蠲痹颗粒中的羌活、独活、秦艽，对活性大类成分总黄酮进行含量测定的方法，属于医药

技术介绍
中药新药古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒祛风除湿，蠲痹止痛，主治风寒湿三气合而成痹者。中医痹症，现代中医将其称之为尪痹，指风寒湿邪侵袭关节，气血痹阻所致的骨关节病，以小关节疼痛，肿胀，晨僵，甚至变形为特点，西医病名类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)为其中一种。类风湿性关节炎为自身免疫疾病，治愈难，发病率有逐年上升的趋势。蠲痹颗粒处方出自清代程国彭《医学心悟》。蠲痹汤，因临床用于防治RA，疗效确切，获批为国家古代经典名方类新药，医学前景良好。目前国内关于中药新药古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒制剂质量控制方面少有研究，为使制剂质量得到有效控制，因此选择蠲痹颗粒中的羌活、独活、秦艽TLC鉴别及活性大类成分总黄酮含量测定的质量评价指标，为控制中药新药古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒质量提供科学依据。本专利技术建立了中药新药古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒羌活、独活、秦艽的TLC鉴别及总黄酮含量测定的检测方法，实验结果表明，本法建立薄层法色谱鉴别法专属性强，斑点清晰，阴性无干扰；以芦丁为对照品，以5％亚硝酸钠-10％硝酸铝-氢氧化钠试液为显色体系，在510nm波长下以分光光度法测定总黄酮含量的方法，简单快速、准确可靠，重复性及稳定性均较好，可作为该制剂的质量控制方法。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种中药新药古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒薄层鉴别及总黄酮成分含量测定，该方法简单、稳定、重现性好，可用于该药品的质量控制。本专利技术的目的是这样实现的：具体步骤如下：1、薄层鉴别：A羌活：精密称取羌活对照药材1.0g置具塞锥形瓶中，加入20ml石油醚(60～90℃)，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加入1ml乙酸乙酯溶解，作为羌活对照药材溶液；精密取蠲痹颗粒样品粉末称取2.0g，同对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液；取缺羌活的的阴性样品，同对照药材制备的方法，制成羌活阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、阴性样品溶液和羌活对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯(8:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。B独活：精密称取独活对照药材1.0g，加入20ml石油醚(60～90℃)，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为独活对照药材溶液；精密称取蠲痹颗粒粉末2.0g，同对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液。取缺独活的阴性样品,同对照药材溶液制备方法,制成独活阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、独活对照药材溶液和阴性样品溶液各5μl，分别同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。C秦艽：精密称取秦艽对照药材1.0g，加甲醇20ml，超声波提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为秦艽对照药材溶液。精密称取蠲痹颗粒样品2.0g，同秦艽对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液。取缺秦艽的阴性样品,同对照药材溶液制备方法,制成秦艽的阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、秦艽对照药材溶液和阴性样品溶液各10μl，分别点于同一块硅胶GF254板上，以三氯甲烷-甲醇-水(8:2:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干在紫外线灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2、总黄酮含量测定：A对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品适量，置于25ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度线，摇匀，制备浓度为0.519mg·ml-1芦丁对照品溶液。B供试品溶液的制备：取蠲痹颗粒细粉约3.0g，精密称定，置于索氏提取器中，加入三氯甲烷加热回流提取至无色，弃去三氯甲烷溶液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色(约3h)，提取液挥干，残渣加乙醇，溶解，置25ml容量瓶中，加乙醇至刻度线，摇匀，作为供试品溶液。C分离检测：精密移取芦丁对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，分别置于25ml容量瓶中，按顺序加水至6ml，加5％NaNO2溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加10％AlCl3溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加4％NaOH溶液10.0ml，再加水至刻度。摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，在波长为510nm处进行检测，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；精密吸取样品溶液1ml,置于25ml容量瓶中，按顺序加水至6ml，加5％NaNO2溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加10％AlCl3溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加4％NaOH溶液10.0ml，再加水至刻度。摇匀，放置15min，在波长为510nm处进行检测，记录吸光值，根据标准曲线计算含量即可。本专利技术具有以下优点和积极效果：1、本专利技术所述方法简单、准确、重现性和稳定性好，可为全面评价和控制蠲痹颗粒质量提供理论基础和科学依据。2、本专利技术方法采用薄层色谱(TLC)法对蠲痹颗粒中的羌活、独活、秦艽进行鉴别；以芦丁为对照品，以5％亚硝酸钠-10％硝酸铝－氢氧化钠试液为显色体系，在510nm波长下以分光光度法测定总黄酮。结果薄层法色谱鉴别专属性强，斑点清晰，阴性无干扰；芦丁浓度在0.01038～0.06228mg/ml范围内与吸光度线性关系良好,回归方程为y＝12.264x-0.0061(r2＝0.9999；n＝6),平均加样回收率101.24％(RSD＝1.56％)。3、本专利技术方法操作简单、精密度、重现性和稳定性良好，为蠲痹颗粒有效成分质量控制和药效评价的进一步研究奠定了理论基础和科学依据。附图说明图1是本专利技术羌活薄层色谱鉴别图附图标记说明：1-2为羌活对照药材；3-5为蠲痹颗粒样品；6为缺羌活阴性对照样品图2是本专利技术独活薄层色谱鉴别图附图标记说明：1-2为独活对照药材3-5为蠲痹颗粒样品6缺独活阴性对照样品图3是本专利技术秦艽薄层色谱鉴别图附图标记说明：1-2为秦艽对照药材3-5为蠲痹颗粒样品6为缺秦艽阴性对照样品图4是本专利技术芦丁和供试品最大吸收波长扫描图具体实施方式以下结合附图和具体实施方式对本专利技术作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本专利技术，但并不以此限制本专利技术。1仪器与试剂752型紫外-可见分光光度计(上海舜恒平科学仪器有限公司)、超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、电子天平ME104E/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒薄层鉴别及总黄酮含量测定的方法，其特征在于：该方法利用薄层鉴别(TLC)及紫外分光光度法，分别鉴别蠲痹颗粒中的羌活、独活、秦艽，对活性大类成分总黄酮进行含量测定。具体步骤如下：(1)薄层鉴别：A羌活：精密称取羌活对照药材1.0g置具塞锥形瓶中，加入20ml石油醚(60～90℃)，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加入1ml乙酸乙酯溶解，作为羌活对照药材溶液；精密取蠲痹颗粒样品粉末称取2.0g，同对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液；取缺羌活的的阴性样品，同对照药材制备的方法，制成羌活阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、阴性样品溶液和羌活对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯(8:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。B独活：精密称取独活对照药材1.0g，加入20ml石油醚(60～90℃)，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为独活对照药材溶液；精密称取蠲痹颗粒粉末2.0g，同对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液。取缺独活的阴性样品,同对照药材溶液制备方法,制成独活阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、独活对照药材溶液和阴性样品溶液各5μl，分别同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。C秦艽：精密称取秦艽对照药材1.0g，加甲醇20ml，超声波提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为秦艽对照药材溶液。精密称取蠲痹颗粒样品2.0g，同秦艽对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液。取缺秦艽的阴性样品,同对照药材溶液制备方法,制成秦艽的阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、秦艽对照药材溶液和阴性样品溶液各10μl，分别点于同一块硅胶GF254板上，以三氯甲烷-甲醇-水(8:2:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干在紫外线灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)总黄酮含量测定：A对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品适量，置于25ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度线，摇匀，制备浓度为0.519mg·ml...

【技术特征摘要】
1.一种古代经典名方复方制剂蠲痹颗粒薄层鉴别及总黄酮含量测定的方法，其特征在于：该方法利用薄层鉴别(TLC)及紫外分光光度法，分别鉴别蠲痹颗粒中的羌活、独活、秦艽，对活性大类成分总黄酮进行含量测定。具体步骤如下：(1)薄层鉴别：A羌活：精密称取羌活对照药材1.0g置具塞锥形瓶中，加入20ml石油醚(60～90℃)，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加入1ml乙酸乙酯溶解，作为羌活对照药材溶液；精密取蠲痹颗粒样品粉末称取2.0g，同对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液；取缺羌活的的阴性样品，同对照药材制备的方法，制成羌活阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、阴性样品溶液和羌活对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯(8:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。B独活：精密称取独活对照药材1.0g，加入20ml石油醚(60～90℃)，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为独活对照药材溶液；精密称取蠲痹颗粒粉末2.0g，同对照药材溶液制备方法，制备供试品溶液。取缺独活的阴性样品,同对照药材溶液制备方法,制成独活阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、独活对照药材溶液和阴性样品溶液各5μl，分别同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。C秦艽：精密称取秦艽对照药材1.0g，加甲醇20ml，超声波提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为秦艽对照药材溶液。精密称取蠲痹颗粒样品2.0g，同秦艽对照药材溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗宇东，谭安蔷，庞晓云，陈晓艺，李娜，邹意华，李清平，
申请(专利权)人：广西中医药大学制药厂，
类型：发明
国别省市：广西;45