一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物制造技术

本发明专利技术公开了一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物，所述生物标记物为次黄嘌呤、甘油磷酸胆碱、乙酰肉碱、氢化可的松(皮质醇)，所述生物标记物次黄嘌呤和甘油磷酸胆碱随着疾病进展表达量总体趋势降低，乙酰肉碱和氢化可的松(皮质醇)随着疾病进展表达量总体趋势升高。本发明专利技术还公开了一种用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物的筛选方法。利用本发明专利技术的生物标记物次黄嘌呤、甘油磷酸胆碱、乙酰肉碱、氢化可的松(皮质醇)预测静脉内平滑肌瘤病进展具有较高的特异性，有利于静脉内平滑肌瘤病的早发现、早治疗，具有良好的临床使用和推广价值。

【技术实现步骤摘要】
一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物
本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物。
技术介绍
静脉内平滑肌瘤病(IVL)是一种罕见的雌激素依赖性肿瘤疾病。尽管IVL在组织学上是良性的，但其具有浸润性生长的特征。肿瘤起源于子宫静脉壁或盆腔静脉，可以伸入子宫或盆腔的静脉通道，经髂静脉或卵巢静脉侵入并延伸至下腔静脉。一旦肿瘤通过三尖瓣进入右心房或右心室以及肺动脉，会引起严重的循环障碍，可以导致晕厥或猝死。如果心脏的部分肿瘤脱落，可能导致肺栓塞或脑梗塞，危及生命。由于IVL的临床症状和影像学表现不明确，术前误诊漏诊率较高。当IVL病变在早期局限于盆腔而无血管侵犯时，其表现可能与子宫肌瘤相似。如果肿瘤晚期侵入下腔静脉或心脏，容易误诊为原发性心脏肿瘤或静脉血栓。研究显示，IVL术后复发的风险可高达30％，且大静脉受累患者术后复发的风险明显高于无静脉受累患者。目前大多数研究只是探讨影响IVL发病机制和预后的潜在调控基因，并未关注患者体内一系列代谢物的变化。所以，目前还没有特异的生化指标来判断IVL的诊断和预后。随着现代生物分析技术的迅速发展，代谢组学已经成功地应用于许多领域，如癌症研究。代谢组学是“组学”技术之一，是基因组学、转录组学和蛋白质组学的补充。代谢物被定义为小型有机物和低分子量化合物(<1500道尔顿)，是代谢过程中的最终产物。对代谢物的研究有助于确定患者体内被激活或功能失调的代谢途径。在分子水平上，代谢组学采用新的生物标记物来探索疾病发展的潜在机制。代谢组学在疾病的诊断和预后中起着至关重要的作用。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于提供一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物。本专利技术的第二目的是提供所述生物标记物在制备预测静脉内平滑肌瘤病进展的试剂盒中的应用。本专利技术的第三目的是提供一种用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物的筛选方法。为实现上述目的，本专利技术首先提供一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物，所述生物标记物为次黄嘌呤、甘油磷酸胆碱、乙酰肉碱、氢化可的松(皮质醇)。优选的，所述生物标记物为血清标记物。本专利技术进一步发现，所述生物标记物次黄嘌呤和甘油磷酸胆碱随着静脉内平滑肌瘤病进展表达量总体趋势降低，乙酰肉碱和氢化可的松(皮质醇)随着静脉内平滑肌瘤病进展表达量总体趋势升高。进一步地，本专利技术提供了所述的生物标记物在制备预测静脉内平滑肌瘤病进展的试剂盒中的应用。优选的，所述试剂盒包括检测次黄嘌呤、甘油磷酸胆碱、乙酰肉碱、氢化可的松(皮质醇)浓度的试剂。进一步地，本专利技术提供了一种用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物的筛选方法，包括以下步骤：(1)样本收集：收集静脉内平滑肌瘤病无复发患者(IVL-no)、静脉内平滑肌瘤病复发患者(IVL-re)、健康无子宫肌瘤对照者(Co-no)、健康有子宫肌瘤对照者(Co-um)血清样本；(2)液相色谱质谱采集：通过液相色谱对样本进行预分离，质谱采集一级、二级谱图；(3)数据分析：wiff格式的原始MS数据经ProteoWizardMSConvert转换为mzXML文件，然后采用XCMS软件进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积，对XCMS提取得到的数据首先进行代谢物结构鉴定、数据预处理，然后进行实验数据质量评价，最后再进行数据分析，首先采用单变量统计分析方法，包括foldchange(FC)分析和Student'st检验或Mann-WhitneyU检验，然后用R软件包(ropls)对处理后的数据进行主成分分析，并进行正交偏最小二乘法-判别分析，正交偏最小二乘法-判别分析得到的OPLS-DA模型用多重交叉验证和置换检验对模型的稳定性进行了评价；(4)筛选：根据上述正交偏最小二乘法-判别分析得到的OPLS-DA模型的变量重要性评分和P值进行差异代谢物筛选，筛选标准为：VIP＞1，P值＜0.05；(5)鉴定：采用超高效液相色谱-串联飞行时间质谱联用仪(UHPLC-Q-TOFMS)进行检测样本中的代谢物，通过分析匹配代谢物的保留时间、分子质量(分子质量误差在<25ppm内)、二级碎裂谱图、碰撞能等信息，对生物样本中的代谢物进行结构鉴定，并对鉴定结果进行严格的人工二次核对、确认。参照国际上针对代谢物标准倡议(MetabolomicsStandardsInitiative,MSI)提供的代谢物鉴定等级。等级0：具有明确的三维结构和立体化学信息。等级1：可靠的二维结构鉴定，至少需要将真实化学标准品的两个或多个正交性质(如MS/MS谱图、保留时间RT或碰撞截面(CCS)值)与在相同分析条件下分析的感兴趣代谢物的相同性质进行比较。等级2级或3级为假定的注释结果，通常仅基于一个或两个性质，依赖于与不同实验室收集的或用不同分析方法获得的数据进行比较，而不是在相同分析条件下与真实的化学标准进行直接比较。不能被鉴定为以上等级的为等级4未知物。本项目代谢物的最终鉴定等级均在Level2以上。优选的，所述方法还包括采用层次聚类分析方法、KEGG途径富集方法、Lasso回归分析方法、广义线性回归模型、ROC曲线分析方法中的一种或多种对筛选到的差异生物标记物进一步筛选。优选的，所述血清样本在基于液相色谱质谱采集时，每7个样本加入一个质量控制样品，用于监测和评价系统的稳定性及实验数据的可靠性；优选的，所述样本进样前进行以下处理：样本在4℃环境下缓慢解冻后，将样本与预冷甲醇/乙腈/水溶液(2：2：1，v/v)涡旋混合，低温超声30min，-20℃静置10min；4℃离心机中14000g离心20min，取上清真空干燥，质谱分析时加入100μL乙腈水溶液(乙腈：水＝1:1，v/v)复溶，涡旋，4℃离心机中14000g离心15min，取上清液进样分析；优选的，液相色谱所用色谱柱为Agilent1290InfinityLC超高效液相色谱系统(UHPLC)HILIC色谱柱，柱温25℃，流速0.5mL/min，进样量2μL，色谱流动相包含两种溶剂A和B：流动相A为水+25mM乙酸铵+25mM氨水，流动相B为乙腈，色谱梯度洗脱程序为：0-0.5min为95％B，0.5-7min为B从95％线性变化至65％，7-8min为B从65％线性变化至40％，8-9min为B维持在40％，9-9.1min为B从40％线性变化至95％，9.1-12min为B维持在95％，整个分析过程中样品置于4℃自动进样器中，为避免仪器检测信号波动而造成的影响，采用随机顺序进行样本的连续分析；质谱检测使用四级杆串联飞行时间质谱仪Q-TOF，采用ABTripleTOF6600质谱仪进行样本一级、二级谱图的采集，HILIC色谱分离后的ESI源条件如下：IonSourceGas1(Gas1)：60，IonSourceGas2(Gas2)：60，Curtaingas(CUR)：30，sourcetemperature：600℃，IonSaparyVoltageFloatin本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物为次黄嘌呤、甘油磷酸胆碱、乙酰肉碱、氢化可的松。/n

【技术特征摘要】
20210625 CN 20211071501561.一组用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物为次黄嘌呤、甘油磷酸胆碱、乙酰肉碱、氢化可的松。


2.如权利要求1所述的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物为血清代谢物。


3.如权利要求1所述的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物次黄嘌呤和甘油磷酸胆碱随着静脉内平滑肌瘤病进展表达量总体趋势降低，乙酰肉碱和氢化可的松随着静脉内平滑肌瘤病进展表达量总体趋势升高。


4.如权利要求1-3任意一项所述的生物标记物在制备预测静脉内平滑肌瘤病进展的试剂盒中的应用。


5.权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括检测次黄嘌呤、甘油磷酸胆碱、乙酰肉碱、氢化可的松浓度的试剂。


6.一种如权利要求1-3任意一项所述的用于静脉内平滑肌瘤病进展预测的生物标记物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样本收集：收集静脉内平滑肌瘤病无复发患者、静脉内平滑肌瘤病复发患者、健康无子宫肌瘤对照者、健康有子宫肌瘤对照者血清样本；
(2)液相色谱质谱采集：通过液相色谱对样本进行预分离，质谱采集一级、二级谱图；
(3)数据分析：wiff格式的原始MS数据经ProteoWizardMSConvert转换为mzXML文件，然后采用XCMS软件进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积，对XCMS提取得到的数据首先进行代谢物结构鉴定、数据预处理，然后进行实验数据质量评价，最后再进行数据分析，首先采用单变量统计分析方法，包括foldcha...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛志通，冯鹏辉，李建初，张紫娟，郁琦，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京;11